TLR-4信号转导通路介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达的研究

目的: 观察TLR-4信号转导通路在层流低切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达中的作用。方法: 设计突变引物, 用RT-PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变TLR4 cDNA, 用PCR技术从其DNA中扩增出IL-8上游调控序列(IL-8USCS), 分别克隆于真核表达质粒pcDNA3及绿色荧光增强蛋白报告基因pEGFP1质粒,构建出重组TLR-4缺失突变基因真核表达质粒pcDNA3-mTLR4和IL-8报告基因表达质粒pEGFP1-IL8USCS。用pEGFP1-IL8USCS转染或pcDNA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染ECV304细胞, 用4.2 dyne/cm²层流切应力刺激3 h, 流式细胞仪观察荧光蛋白表达强度变化。细胞裂解物IκB免疫印迹和NF-κB p65免疫荧光细胞化学染色检测IκB的磷酸化及降解和NF-κB的活化。结果: 用pEGFP1-IL8USCS转染细胞, 经层流切应力刺激3 h后荧光蛋白表达增强(1.06:2.71), 同样用pcDNA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染细胞, 层流切应力刺激3 h后荧光蛋白表达未明显增强。细胞裂解物免疫印迹显示, 刺激10 min时磷酸化IκB即显著增强, 1 h后磷酸化IκB印迹强度几乎降到基线水平, 而IκB随刺激时间延长而逐渐降低, 1 h后几乎测不到IκB。NF-κB p65免疫荧光细胞化学染色显示, 切应力刺激0.5 h, 胞核即出现阳性反应, 刺激1.5 h、2 h后, 胞核呈强阳性染色。结论: 本研究提示, TLR4/NF-κB信号转导通路可能介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因的表达。     

SEB诱导的CD4+ T细胞无能、凋亡及MHC-I类分子表达下调

目的：探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素（SEB）体外诱导外周T细胞免疫耐受的作用机制。方法：采用SEB体外刺激C57BL/6J（B6）小鼠的脾细胞后，以MTT比色法检测脾细胞的增殖，并用PI染色后以流式细胞术（FCM）分析不同时间段处于S期，G0-G1期的细胞及无能T细胞的凋亡，测定T细胞亚群及MHC-I（H-2K^b)表达的变化。用琼脂糖凝胶电泳，观察不同时间段凋亡T细胞的DNA特征。结果：部分去除CD8^ T细胞后。SEB可刺激B6小鼠脾细胞中CD4^ T细胞大量增殖，在SEB刺激后第3天，CD4^ T细胞中处于S期的比率最大，此后开始下降；而处于G0-G1期的CD4^ T细胞变化则相反，在初次刺激后第3天，增殖的CD4^ T细胞出现无能，FCM检测及用琼脂糖凝胶电泳检查DNAladder证实，在第7天，无能CD4^ T细胞出现凋亡，且凋亡细胞的比率逐渐增多，不因加入抗CD3抗体或CoN A而逆转，在SEB刺激后，CD4^ T细胞表面MHC-I类分子（H-2K^b)的表达，随细胞无能的出现而明显下调。结论：SEB诱导的T细胞免疫耐受，可能与CD4^ T细胞的无能，凋亡及细胞表面分子MHC-I的表达下调有关。     

闭合性脑损伤患者进行常规头CT复查必要性研究

目的：研究闭合性脑损伤患者入院后进行常规头CT复查的必要性。方法：应用分层分析和Logistic回归分析研究医疗干预和常规复查头CT及其他可能危险因素间的统计学联系。结果：GCS≤8组，常规复查头CT与医疗干预相关；GCS〉8组，常规复查头CT与医疗干预无关。结论：（1）GCS≤8的患者常规复查头CT可能受益；（2）GCS〉8的患者如果伴有入院后低血压和（或）凝血机制障碍者，也可能从常规复查头CT中受益；（3）其余的患者常规复查头CT没有必要。     

复性速率液相分子杂交法测定枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌DNA杂交度

目的　研究DNA DNA杂交率和 (G C)mol%测定方法 ,并把获得的数据应用于芽孢杆菌细菌分类、鉴定。方法　以枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌为研究材料 ,采用简便、实用又有很好重复性的热变性温度法 (Tm)测定DNA中 (G C)mol% ,以及复性速率液相分子杂交法测定DNA DNA杂交度。结果　热变性温度法 (Tm)测定枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的DNA中 (G C)mol%分别为 42 .7和 40 .2 6 ,采用复性速率液相杂交法测定上述两菌DNA DNA杂交度为 9 6 6 %。结论　显示枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌为同属中相互关系并不十分密切的两个种。     

SHIFT试验预示着伊伐布雷定对心力衰竭治疗的开始

正流行病学研究和临床试验早期证实,心率和多种心脏病患者的风险强烈相关。心力衰竭和急性心肌梗死患者β-阻滞剂的有益效果至少部分与心率降低有关。伊伐布雷定是心脏窦房结起搏细胞的特异性I f离子通道选择性抑制剂。对窦性心律患者降低静息和和运动时心率,而不降低心肌收缩性和房室传导。该药物的开发本质上有助于获得降低心率的效果。SHIFT研究显示,对收缩性心力衰竭、窦性心律以及心率70次/min或以上的患者,在最佳治疗的基础上每     

UPA与VEGF在乳腺癌中的表达及意义

近年来,乳腺癌在女性中的发病率呈逐年上升趋势,侵袭和转移是导致患者死亡主要原因,而肿瘤侵袭转移有赖于细胞外基质的降解及肿瘤血管形成.研究表明,尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen cultivator,uPA)介导的纤维蛋白溶解作用及血管内皮生长因子(VEGF)介导的血管形成作用,都能促进乳腺癌的发生,发展及播散[1].故本研究通过检测乳腺癌组织中uPA和VEGF蛋白的表达状况,以探讨二者在乳腺癌侵袭转移中的作用及关系.     

血管内皮细胞在切应力刺激后Toll基因的表达变化

目的：本室先前的实验观察到原代培养的贴壁融合脐静脉内皮细胞层流刺激后,IL-8mRNA的增强表达和NF-κB的活化。本探讨Toll蛋白在切应力诱导血管内皮细胞表达趋化细胞IL-8基因表达中的可能作用。方法：从正常对照和层流刺激后的原代培养的人脐静脉内皮细胞提取总RNA,根据TLR-2和TLR-4cDNA序列设计特异引物,     

全麻时气腹压力对腹腔镜手术的影响

目的 :观察全身麻醉下高中低 3种不同二氧化碳 (CO2 )气腹压力对呼吸循环功能的影响。方法 :将 1 2 0例拟行腹腔镜手术的患者按不同气腹压力随机分为高压组 (H组 )、中压组 (M组 )和低压组 (L 组 ) ,每组 4 0例 ,监测气腹前后不同时点的呼吸循环指标。结果 :1 M组与 L组气腹对呼吸循环功能有不同程度影响 ,但各指标基本维持在正常水平。2 H组气腹对呼吸循环功能影响显著 (P<0 .0 1 ) ,并发症多。 3M及 H组所用手术时间比 L 组明显减少 (P<0 .0 1 )。结论 :临床可选用中等的气腹压力行腹腔镜手术 ,使手术更加安全顺利     

颅脑外伤伴双侧瞳孔散大患者59例救治体会

目的 探讨对颅脑外伤伴双侧瞳孔散大患者的救治经验.方法 对43例具备手术指征的患者行手术治疗,其余16例行非手术治疗.结果 手术治疗者恢复良好9例,中残1例,重残6例,植物生存4例,死亡39例;非手术治疗者16例中重残2例,植物生存1例,死亡13例.结论 颅脑外伤伴双侧瞳孔散大患者病死率高,需明确原发病,开展院前及术前急救.对具备手术指征者,积极、尽早手术治疗,防治并发症,以改善预后.