星点设计-效应面法优化丹参须根有效成分的酶法提取工艺

目的：研究丹参须状细根中有效成分的酶法提取工艺，同时优化酶解工艺的参数。方法：采用纤维素酶酶解再超声促提来提取丹参须状细根中的有效成分，通过星点设计-效应面法优化酶解参数，并利用多元线性回归和多项式回归建立预测模型。结果：利用优选出的酶解工艺所得到的丹参须状细根提取液中总丹参酮和总丹酚酸的收率较非酶法分别提高了113.92%和30.64%，并且薄层检测表明纤维素酶酶解对提取液中的有效成分无质的影响；同时，建立的数学模型的复相关系数较高，并且通过检验。结论：采用纤维素酶酶解再超声促提的方法可以充分地提取出丹参须状细根中的有效成分，同时，利用多项式回归所建立模型有较好的预测性。     

不同气候区丹参生物量、有效成分变化与气象因子的相关性研究

通过在陕西境内由南向北的3种典型气候区以及过渡带布设22个试验区,将同一种源丹参种苗于春季栽植于上述试验区,统一规范人工栽培管理,采用HPLC检测样品的二萜醌类成分(二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA),并测定生物量数据(根长、分根数、根直径和根干重)。由中国气象科学数据共享中心平台和陕西省农业气象服务中心获取试验区的降雨量、年均温、昼夜温差等10个关键农业生态气象因子。试验结果表明:同一种源的丹参在不同气候生境条件下获得的所有试验区丹参样品经检测均符合国家药典的限量标准,二氢丹参酮含量的变异系数最大。不同气候区的丹参根系形态差别较大。相关性分析结果表明:4—10月相对湿度、4—10月水气压、4—10月累积日照时数、4—10月昼夜温差和年均温是影响丹参品质的主要限制性气象因子,而4—10月20 cm平均地温、年活动积温、年均温、4—10月水气压、4—10月昼夜温差是影响丹参产量的主要限制性气象因子。丹参酮类物质均随纬度降低而升高,根的干物质积累量基本随纬度升高而降低,且随海拔升高而降低。相对于水分和温度条件,丹参对日照时数长短的要求并不严格。丹参可以适应多种气候条件,完成其正常生命过程,但与陕西北部的半干旱季风气候、中部的暖温带半湿润气候相比,南部的北亚热带湿润季风气候的相对温暖湿润气候条件更利于丹参的生长和有效成分的累积。     

光质对三七生长、光合特性及有效成分积累的影响

为了揭示光质对三七生长、光合特性及有效成分积累的影响,该研究采用7种光质（红、橙、黄、绿、青、紫、蓝）,进行盆栽试验,测定三七生长过程中其生长指标、光合特性及有效成分的含量。结果表明,光质对三七生长、光合特性及有效成分均有显著影响,其中红光有利于三七的株高生长,青、黄、紫、蓝光均有利于三七地下部分生物量的积累,蓝、黄光有利三七光合作用,青光有利于人参皂苷Rd的积累,黄、青光有利于单株三七有效成分总量的增加。     

丹参中转录因子SmMYB87基因的克隆、亚细胞定位和表达分析

目的克隆丹参Salvia miltiorrhiza中第14亚群R2R3 MYB转录因子基因SmMYB87的全长序列,并对其进行生物信息学和表达分析。方法以丹参总RNA为模板,利用同源克隆和c DNA快速扩增(RACE)技术获得SmMYB87 cDNA全长序列。运用生物信息学软件对该基因及其编码蛋白进行结构和理化性质分析,利用q RT-PCR测定SmMYB87在各器官中的表达并构建融合表达载体pTF-486-SmMYB87分析SmMYB87蛋白的亚细胞定位。结果 SmMYB87基因含有2个内含子和1个732 bp的开放阅读框(ORF),编码243个氨基酸。该基因在根、茎、叶和花中均有表达,且4个器官中的表达量没有显著差异。SmMYB87蛋白在细胞核和细胞膜上均有分布。结论 SmMYB87的序列结构和表达分析为进一步研究其在丹参中的生物学作用奠定了理论基础。     

基于杜娟属植物的DNA条形码序列筛选

我国的杜鹃属有毒植物约在60种以上,如羊踯躅等药用植物具有强毒付作用,而目前杜娟属的分类十分复杂。DNA barcoding技术是一种新的物种鉴定技术,COI序列已成功应用于动物的鉴定,但是目前国际上还没有找到一个通用序列能鉴定所有植物物种。本文对杜娟属257个物种ITS、ITS2、matK、PsbA—trnH序列比较,运用Wilcoxon秩和检验比较不同序列的变异性,然后用Taxon DNA软件评估这四个序列的barcodinggap。筛选适合于杜娟属的DNA条形码序列。分析结果表明：matK和psbA—trnH并不适合于杜娟属的DNA barcoding鉴定。ITS2和ITS序列都可以有效的对杜娟属植物进行DNA barcoding鉴定,但ITS在物种中的扩增效率较低,因此推荐将ITS2序列作为一个潜在的杜娟属植物DNA barcoding鉴定候选序列。     

基于HPLC指纹图谱和多指标定量的黄芩趁鲜加工研究

目的研究黄芩采用不同干燥方法进行趁鲜加工与传统加工后,黄芩质量的变化规律,结合HPLC指纹图谱,确定最佳加工方法。方法对阴干、自然干燥、60℃烘干的不同含水率的鲜黄芩进行切制后60℃烘干,比较黄芩外观性状、醇溶性浸出物,HPLC测定不同加工下黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量,并进行指纹图谱评价。结果建立了16批不同加工处理下黄芩的指纹图谱,标定22个共有峰,指认了4个色谱峰,分别为11号色谱峰黄芩苷、16号色谱峰汉黄芩苷、19号色谱峰黄芩素、21号色谱峰汉黄芩素。计算出各批次黄芩之间的相似度,结合聚类分析对指纹图谱数据进行分类。并确定最佳加工方法为自然干燥至含水率为20.45%～35.22%时切制1～2 mm薄片后60℃烘干。其黄芩醇溶性浸出物在46.76%～49.72%,黄芩饮片断面呈黄色,与传统加工颜色一致,黄芩苷在18.986 4%～20.112 7%,比传统加工含量高。结论不同加工方法黄芩的质量存在差异,趁鲜加工可代替传统加工方法,用于大规模生产,为质量标准提升提供实验依据。     

活性氧在密旋链霉菌Act12诱导丹参毛状根中丹参酮积累中的作用

作者前期研究成果显示密旋链霉菌Act12可以上调丹参酮生物合成途径上的关键酶基因的表达大幅提高丹参毛状根中丹参酮含量。该实验则进一步研究了活性氧在Act12诱导丹参毛状根中丹参酮积累的作用。在继代培养21 d的丹参毛状根中添加Act12不同的诱导子及诱导子组合,分别测定不同收获期毛状根的生物量,毛状根中活性氧积累量,丹参酮类成分的积累量和关键酶基因表达量。Act12诱导后丹参毛状根中活性氧含量上升,HMGR和DXR基因表达上调,最高分别达到对照的32.4,4.8倍,毛状根中丹参酮积累增加,最高达到对照的10.2倍;加入活性氧抑制剂CAT和SOD后,丹参毛状根中的活性氧含量较Act12处理显著下降,HMGR和DXR基因表达也明显下降,毛状根中丹参酮含量较Act12处理下降了74.6%。活性氧介导了Act12诱导丹参酮积累,Act12很可能是通过ROS信号通路激活了MVA和MEP途径,从而提高了丹参酮在毛状根中的含量。     

中药材GAP认证准备过程中的生产质量管理体系建设

《中药材生产质量管理规范》(GAP)基地建设是一项系统工程,在实际生产中,中药材GAP认证准备过程存在很多盲点和问题,本文拟对其生产质量管理体系的建设进行探讨,并提出工作建议。作者总结了多个GAP基地认证准备过程中的经验,将GAP基地建设中的生产质量管理体系进行系统梳理,并对各项具体工作进行了概括和分类。将认证准备工作分为生产技术、质量管控、试验研究、基地管理、人员培训、文件档案等六大体系,并对每个体系内部所涉及的部门、人员、工作内容和流程、相应的软硬件进行探讨,以供同行借鉴和讨论,促进中药材GAP事业的发展和安全优质中药材的生产。栽培和产地加工过程中新方法、新技术的引入和应用,对相应的人员和关键生产技术的要求也逐步提高,对选地和品种的要求会更高,但生产操作会简化、成本会降低。鉴于目前中药材栽培中存在的连作障碍等问题,中药材的倒茬、间套作等配套技术需要逐渐探索和推广应用,要更加重视生产过程中对生态环境的保护。     

刺五加皂苷抗乳腺癌细胞活性研究

目的研究刺五加精制皂苷的体外抗人乳腺癌细胞MCF-7活性。方法香草醛-高氯酸比色法测定刺五加总皂苷含量,经大孔树脂D101梯度洗脱和丙酮沉淀纯化皂苷;MTT法研究该皂苷对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用。结果刺五加总皂苷含量为64.75 mg/g;纯化得到的乳黄色精制皂苷,其对乳腺癌细胞MCF-7的半抑制浓度IC50为29.57 g/ml,且呈剂量依赖性。结论刺五加皂苷具有很强的抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖作用。     

丹参DNA提取方法的优化

针对药用植物丹参含有较多的多酚类、醌类等水溶性次生代谢物，在提取DNA时易发生共沉淀而很难除去等问题，设计双蒸水预洗不同次数和活性碳吸附杂质等处理，对CTAB和SDS两种DNA提取方法进行了系统优化。研究得出，采用2％的CTAB提取液和双蒸水预洗一遍并且添加样品鲜重4％的活性碳于提取液中的提取方法最佳。不仅能除去多酚类、醌类等次生代谢物，而且去多糖、蛋白质效果良好，所获DNA纯度高；RAPD-PCR实验结果稳定清晰可靠。