圈套寡核苷酸影响腹腔巨噬细胞炎症介质表达的实验研究

目的 设计合成靶向核因子—κB(NF—κB)的哑铃形圈套寡核苷酸(0DNs)，并检测其抗炎效应。方法 提取大鼠腹腔巨噬细胞(pMφ)，随机分为正常对照组、单纯内毒素(LPS)组、圈套0DNs处理组、无关圈套0DNs处理组和脂质体处理组。收集正常对照组和单纯LPS组LPS刺激后1，2，6，12，18，24k上清及细胞；采用阳离子脂质体按质量比为4：1的比例分别介导2，4，8mg/L圈套0DNs转染大鼠pMφ细胞，6k后用LPS刺激，收集转染后8，12，18k上清及细胞。细胞免疫组化法分析LPS刺激前后p65表达与分布变化，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中肿瘤坏死因子—α(TNF—α)、白细胞介素—6(IL—6)蛋白表达，逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)法检测TNF—α、IL—6和IL—10mRNA转录。结果 4，8mg/L剂量哑铃形圈套0DNs可明显抑制LPS诱导的大鼠pMφTNF—α、IL—6转录和表达。结论 靶向NF—κB的哑铃形圈套0DNs具有拮抗炎症介质转录和表达的功能。     

严重创伤患者早期胰岛素强化治疗对外周血IFN-γ和IL-18水平的影响

目的探讨严重创伤患者早期胰岛素强化治疗中细胞因子干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-18(IL-18)的变化规律及其相关性。方法选择40例创伤后24 h内出现应激性高血糖(血糖值超过肾糖阈8．96 mmol/L)严重创伤患者(ISS≥20,APACHEⅡ分值近似),随机分为早期胰岛素强化治疗组和对照组,采用放射免疫法和ELISA法分别于治疗后12、24、48、72 h检测两组血浆IFN-γ和IL-18水平。结果严重创伤患者早期胰岛素强化治疗后血浆IFN-γ和IL-18水平明显低于对照组。结论严重创伤患者早期胰岛素强化治疗可以显著降低以血浆IFN-γ为主的炎性介质水平,继而抑制创伤后全身炎症反应综合征的发生与进展,降低严重创伤患者并发症发生率与死亡率。     

p65结合肽与p65的亲和力检测及其对NF-κB DNA结合活性抑制作用的鉴定

目的检测NF-κB p65亚基结合肽与p65间相互作用的亲和常数,以及其对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.方法借助于生物传感器技术分析NF-κBp65亚基结合肽与p65相互作用的动力学,同时应用竞争性ELISA鉴定结合多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.结果生物传感器技术分析结果表明5条p65结合肽均能与p65发生相互作用,相互作用的亲和常数分别为GST-BPT1:2.67×10-7mol/L、GST-BPT2:9.02×10-6mol/L、GST-BPT3:1.07×10-6mol/L、GST-BPT4:8.03×10-6mol/L、GST-BPT5:9.83×10-7mol/L.竞争性ELISA检测结果表明5条p65结合肽均能在一定程度上抑制NF-κB与其顺式作用元件κB基序的结合,且这种抑制效应随多肽浓度的增加而增强.结论酵母双杂交筛选获得的5条p65结合多肽与p65间确实存在相互作用,且5条结合肽对NF-κBDNA结合活性均有一定的抑制效应,由此提示以这些多肽为先导物设计和开发靶向NF-κB的抗炎多肽药物将成为可能.     

创伤与核转录因子

许多转录因子与创伤密切相关，除了研究较多的核因子kB(NF-kB)，还有早期生长反应因子（EGR－1），活化T细胞核因子（NFAT），特殊蛋白1（SP－1）等核转录因子参与创伤反应，在创伤后的炎症，免疫反应和修复中起着重要作用。     

创伤后并发症及死亡结局的预测研究进展

尽管严重创伤后常见并发症的早期诊断和早期治疗已取得进展，但创伤后并发症如感染／脓毒症、急性呼吸窘迫综合征（ARDS）、多器官功能障碍综合征（MODS）等的发生率及其引发的病死率仍居高不下。其主要原因为上述并发症的发作凶险、发展极快，一经明确诊断，即使采用目前最先进的治疗手段与治疗措施也难以遏制其发展进程。如能早期预测创伤后并发症及死亡结局，并对高危创伤患者实施早期干预措施，则可有效降低创伤后并发症的发生率及病死率。由于颅脑损伤后其预后判定有其特殊性，笔者着重对非颅脑损伤后并发症及死亡结局的预测研究进展进行综述。     

创作对小鼠淋巴细胞IL—2R mRNA及IL—2R的影响

研究了创作后小鼠不同来源淋巴细胞自介素２受体（ＩＬ－２Ｒ）ｍＲＮＡ及ＩＬ－２Ｒ的变化，并观察了创作后血清，巨噬细胞、Ｔｓ细胞的抑制作用。结果显示：３种类型创作组小鼠不同来源淋巴细胞ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ水平无降低，淋巴细胞膜ＩＬ－２Ｒ的变化与此相一致，二者呈非常显著的正相关。     

吴茱萸碱对人结肠癌细胞自吞噬的影响

目的 观察吴茱萸碱对结肠癌Lovo细胞自噬的影响,探讨吴茱萸碱对Lovo细胞的生长抑制作用及其机制.方法 联合应用MTT法和形态学变化观察吴茱萸碱对Lovo细胞的生长抑制作用,借助激光共聚焦显微镜观察自噬现象,并用丹(磺)酰戊二胺染色测定对自噬进行定量分析,Western blot方法检测微管相关蛋白轻链3的表达,确认自噬的发生.同时检测吴茱萸碱和3-甲基腺嘌呤对Lovo细胞活力及凋亡的影响.结果 吴茱萸碱呈浓度依赖性抑制结肠癌Lovo细胞的生长活力(P＜0.05),尤其在浓度为60 μmol/L时最为明显(60%),且在光镜下形态表现为细胞裂解和细胞间隙增宽.吴茱萸碱可诱导结肠癌Lovo细胞发生自噬(P＜0.05),阻断自噬后,吴茱萸碱抑制结肠癌Lovo细胞生长活力的能力进一步增强(P＜0.01).结论 吴茱萸碱可诱导结肠癌Lovo细胞发生自噬,但自噬却拮抗吴茱萸碱的抗肿瘤活性.联合应用吴茱萸碱和自噬凋节剂可增强其抗肿瘤作用,逆转其对化疗药物的耐药性.

Abstract：

Objective To investigate the effects of evodiamine on autophagy of human colon a cleno carcinoma lovo cells, and to explore the role and mechanism of autophagy which was induced by evodiamine (EVO). Methods MTT assay combined with the morphologic changes were used to observe the cell viability. Monodansylcadaverine was used to detect autophagy by fluorospectrophotometer and the confocal laser fluorescence microscopy respectively. Immunoblotting assay was used to observe the microtubule-associated protein 1 light chain 3. Finally, evodiamine combined with 3-methyladenine to detect the cell viability with MTT assay and the apoptosis with the flow cytometry, respectively.Results Evodiamine inhibited the viability of Lovo cells in dose-dependent manner ( P ＜ 0. 05 ), especially in 60 μmol/L that was obviously(60% ). Further more, the cell lysis and cell gap widened was observed by the light microscope. Evo triggered the autophagy, and after inhibition the autophagy by 3-MA, the killing capacities of the Evo was enhanced ( P ＜ 0. 01 ). However, autophagy prohibited the apoptosis pathways.Conclusions Evodiamine can trigger the autophagy, which might play a self-defense role in evodiamineinduced cell death. The cytototoxicity of evodiamine can be augmented by the autophagy inhibitors. The joint application of autophagy regulators with the chemotherapeutic agents might enhance the cell killing effects of chemotherapeutic drugs and show a potent role in cancer drug resistance.     

NF-κB p50和p65蛋白保守结构域原核表达系统的建立

目的 为了获得具有DNA结合活性的人NF—κB p50和p65蛋白,建立人NF-κB p50和p65蛋白保守结构域的原核表达系统。方法 通过PCR法扩增获得人NF-κB p50和p65蛋白保守结构域的cDNA,后分别将其克隆到原核表达载体pET-22b( )上,转化E．coli BL-21,经诱导表达及包涵体的变性和复性处理,获得可溶性p50和p65,同时用Western—Blot鉴定NF-κB p50和p65蛋白的表达,EMSA实验检测NF-κB p50和p65蛋白的DNA结合活性。结果 构建了pET-22b／p50和pET-22b／p65原核表达质粒;p50、p65蛋白在大肠杆菌中的表达均为包涵体;变性、复性后得到了可溶性p50和p65蛋白,浓度达218μg／ml和158μg／ml;并证实可溶性p50和p65蛋白均具有DNA结合活性。结论 成功建立了pET-22b／p50和pET-22b／p65原核表达系统,获得了具有DNA结合活性的NF-κB p50和p65蛋白。     

创伤后免疫功能低下治疗措施的研究进展

如何纠正创伤后的免疫功能低下正成为人们研究的热门课题。本文从４个方面介绍了这一领域的研究进展。认为恢复机体的营养状态，纠正细胞缺氧及钙超载，拮抗免疫抑制因子有抑制细胞的作用，应用细胞因子均是纠正 后免疫功能低下的有效措施。