冰黄肤乐软膏中24种机元素含量测定及重金属限量标准的建立

目的:测定冰黄肤乐软膏中无机元素的含量,提出重金属元素的限量标准,为冰黄肤乐软膏的质量标准的完善和中医临床用药安全提供参考。方法:通过采用微波消解-电感耦合等离子体质谱法对冰黄肤乐软膏的无机元素进行测定和分析。结果:建立了冰黄肤乐软膏中24种无机元素的含量测定方法,精密度、稳定性、重复性、加样回收实验结果均符合药典相关规定。结论:建立的冰黄肤乐软膏无机元素检测方法可行,为冰黄肤乐软膏的质量标准的完善和临床用药安全提供参考。     

基于蛋白质组学技术测定全蝎中β-肌动蛋白的含量

目的:通过蛋白质组学技术手段找到适用于药材全蝎含量测定的目标蛋白质及其特征肽段,用该特征肽段形成定量方法。方法:全蝎粉碎后经PBS缓冲溶液超声提取并过滤后,得到药材的蛋白质提取溶液。上述溶液经胰蛋白酶酶解后通过高分辨质谱进行分析,确定待测的目标蛋白质（β-肌动蛋白）和与之对应的特征肽段（IIAPPER）,并进行特征肽段及其同位素内标物（IIA*(13C3,15N)PPER）的合成。用得到特征肽段做对照品,同位素内标物做内标进行含量测定。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),流动相为0.1%甲酸溶液(V/V)-水和乙腈,梯度洗脱。质谱使用电喷雾离子源（ESI）正离子模式,采用多反应监测模式（MRM）进行信号采集。定量方法为内标法。结果:β-肌动蛋白的特征肽段在0.1~40 nmol/L浓度范围内线性良好,相关系数（r2）在0.999以上。方法检出限为0.04 mg/kg,定量限为0.13 mg/kg。加标回收率在87%～93%,重复性的RSD为5.2%,中间精密度的RSD为4.8%,供试品溶液在4 h内稳定。利用该方法对来自不同产地的37批次全蝎药材中的β-肌动蛋白进行含量测定,结果在4.66～100.26 mg/kg之间。结论:该方法灵敏度高,准确度较好和重复性较稳定,可以为全蝎药材药材的质量控制提供一种有效的手段。     

补肾阳中药治疗促性腺激素缺乏型男性不育的网络分子机制初探

目的初探补肾阳中药治疗促性腺激素缺乏型男性不育的潜在分子机制。方法结合生物信息学方法建立补肾阳中药的成分库、表征美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准用于治疗促性腺激素缺乏男性不育的药物靶标库;再应用通路分析软件(ingenuity pathway analysis,IPA)将成分库投影靶标库,筛选出可作用于靶标及通路的成分,预测分子成分功能,构建“成分-靶标”分子网络。结果分别建立了补肾阳中药成分库(242个化合物)与FDA批准药物靶标库(565个靶标),成分库与靶标库投影后发现补肾阳中药成分库中的30个化学成分可直接激活或抑制药物靶标库中的60个靶标,参与缺氧诱导因子1-α(hypoxia-inducible factor 1-alpha,HIF1α)信号途径,血小板反应蛋白1(thrombospondin 1,TSP1)抑制血管生成途径,芳基烃受体信号途径,孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)/类视黄醇X受体(retinoid X receptor,RXR)激活等18条通路的直接调控。结论本研究构建了补肾阳中药治疗促性腺激素缺乏型男性不育的“成分-靶标”分子网络,分析其治疗效应机制,为补肾阳中药治疗促性腺激素缺乏型男性不育奠定理论基础和实验依据,具有一定的科学意义。     

HPLC法测定板蓝根和板蓝根颗粒中RS-告伊春和腺苷

目的 建立板蓝根颗粒及药材中腺苷和RS-告伊春的测定方法.方法 RS-告依春的测定采用Dikma Dia-monsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,μm);流动相:乙腈-水-三乙胺(10:90:0.2,用冰醋酸调PH值5.2);柱温:室温;体积流量:0.8 mL/min;检测波长:245 nm;腺苷的测定采用Dikma Diamonsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(5:95);柱温:室温;体积流量:1.0 mL/min;检测波长:260nm.结果 RS-告依春的线性范围为0.676～13.1μg/mL;板蓝根颗粒和药材的平均回收率分别为101.66%、99.74%,RSD分别为0.9%、1.4%(n=6);腺苷的线性范围分别0.005～0.05 mg/mL,板蓝根颗粒和药材的平均同收率分别为97.76%、97.32%,RSD分别为1.62%、0.62%(n=6).结论 所建立的方法准确、可靠,可用于板蓝根颗粒及药材的质量控制.     

三唑酮及其代谢产物在人参中的残留分析方法研究

目的 建立凝胶渗透色谱(GPC)和活性炭固相萃取柱(ENVI-Carb-SPE)结合的方法对样品进行净化处理,采用气相色谱.负化学电离源质谱联用(GC-NCIMS)的方法分析人参根及茎叶中三唑酮及其代谢产物三唑醇A、三唑醇B残留量的方法.方法 样品以丙酮为提取溶剂超声提取,并采用凝胶渗透色谱(GPC)和活性炭固相萃取柱(ENVI-Carb-SPE)～合的方法进行样品的净化,DB-5MS毛细管柱程序升温分离.采用气质联用负化学电离源(NCI)SIM方式检测.以空白样品提取液配制对照品溶液,以克服基质效应,外标法测定.结果 3种农药在10min内完全分离,根及茎叶样品在3个水平添加回收率在90%～105%,均小于6%(n=6),三唑酮和三唑醇的检测限分别为0.1和10μg/L,仪器进样精密度均小于2%(n=6).结论 本方法简便、快速、灵敏度高,适用于人参中三唑酮和三唑醇农药残留量测定与安全监控.     

天山堇菜化学成分研究

目的：研究堇菜属Viola植物天山堇菜Viola tianshanica的化学成分。方法：采用硅胶、葡聚糖凝胶、聚酰胺柱色谱等技术分离纯化化合物,并根据理化常数、UV,IR,ESI-MS,¹H-NMR和¹³C-NMR等鉴定其结构。结果：从天山堇菜正丁醇部分分离得到6个化合物,分别鉴定为：胡萝卜苷(1)、山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(2)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(3)、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(4)、山奈酚(5)、槲皮素(6)。结论：除胡萝卜苷外,皆为首次从该植物中分离得到。     

萝卜秦艽2个环烯醚萜苷研究

目的:研究萝卜秦艽的化学成分.方法:采用大孔树脂、薄层色谱、硅胶柱色谱和制备高效液相色谱,进行分离纯化,通过理化实验和波谱分析的方法进行结构鉴定.结果:从95%乙醇提取物的大孔树脂10%乙醇洗脱物中分离、鉴定了2个环烯醚萜苷类化合物,分别为7-epilamalbide(1),chlorotuberoside(2).结论:化合物1为新化合物;化合物2为首次从该植物中分得.     

HPLC法测定短柱肖菝葜中芒果苷

目的 建立HPLC法测定短柱肖菝葜药材中芒果苷的方法。方法采用C18色谱柱。乙腈-0．5％冰醋酸溶液（10：90）为流动相;体积流量1mL／min;柱温25C;检测波长316nm。结果芒果苷在6．26～50．08μg与峰面积积分值呈良好的线性关系。平均回收率为101．31％;RSI）为1．79％。绪论该法简便、准确,可作为短柱肖菝葜药材的测定方法。     

柱前衍生-HPLC法对水蛭的指纹图谱及其16种氨基酸含量测定研究

目的建立18批水蛭药材游离类氨基酸柱前衍生-高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的分析方法,并完成对水蛭中16种游离和水解氨基酸成分的同时定量。方法加水超声提取游离氨基酸,以6 mol/L盐酸提取水解氨基酸;基于异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生法,以氨基酸分析专用色谱柱(4.6×250 mm,5μm);流动相A为0.1 mol/L无水乙酸钠(pH 6.5)-乙腈(93∶7),B为乙腈-水(4∶1);流速0.8 mL/min,检测波长254 nm,柱温40℃进行梯度洗脱。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012 A版)”、SAS和SIMCA-13.0进行药材的相似度评价和聚类分析。结果建立了18批水蛭药材中游离氨基酸HPLC指纹图谱的共有模式,确定25个共有峰,并指认16种氨基酸成分;18批药材相似度均高于0.960;聚类分析与主成分分析结果一致,均将药材分为3类;含量测定结果表明不同批次的药材中氨基酸含量差异较大,水解氨基酸中含量最高的谷氨酸范围为7.26~18.36 mg/g,游离氨基酸含量最高的丙氨酸范围为1.43~4.39mg/g。结论建立了18批水蛭药材中游离类氨基酸的HPLC指纹图谱,同时测定了18批水蛭药材中游离和水解氨基酸的含量,该方法准确,重复性好,可全面反映水蛭药材的氨基酸信息,为该药材的质量控制提供一定的参考依据。     

马钱子对斑马鱼幼鱼肝脏毒性的初步研究

目的利用斑马鱼模型探讨马钱子的肝毒性机制。方法考察马钱子对受精后4天(day post fertilization,dpf)斑马鱼幼鱼死亡率的影响。此外,通过与对照组相比,以肝脏表型和肝脏功能、生理指标为评价标准确认马钱子的肝脏毒性,并利用荧光实时定量PCR(Q-RT-PCR)技术从转录水平对肝毒性相关的基因,如超氧化物歧化酶1基因(superoxide dismutase 1,sod1)、醌氧化还原酶1基因(nad(p)h quinone oxidoreductase 1,nqo1)、线粒体解偶联蛋白2基因(uncoupling protein 2,ucp2)、谷胱甘肽S-转移酶P 2基因(glutathione s-transferase p 2,gstp2)、B细胞淋巴瘤2基因(b-cell lymphoma-2,bcl-2)、骨髓细胞白血病-1B基因(myeloid cell leukemia-1b,mcl-1b)、BCL 2关联X蛋白基因(Bcl-2 associated X,apoptosis regulator,bax-2)、BH3互动死亡激动剂基因(recombinant BH3 interacting domain death agonist,bid)、脂肪酸合酶基因(fatty acid synthase,fasn)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa reductase,hmgcra)、成纤维细胞活化蛋白α基因(fibroblast activation protein alpha,fap)、瘦素受体基因(leptin receptor,lepr)、视黄醇结合蛋白4基因(retinol binding protein 4,rbp4)、转化生长因子基因(transforming growth factor beta 1,tgf-β1)、转化生长因子β受体2基因(transforming growth factor beta receptor 2,tgf-βr2)基因的表达水平进行评价。采用SPSS24.0进行组间单因素方差分析和Dunnett’s t检验对不同处理组之间的数据进行差异分析。结果(1)在亚致死浓度(<76.523μg/mL)暴露条件下,马钱子能够引起斑马鱼幼鱼肝脏形态发生改变、引起细胞凋亡和脂质积累。(2)低中高浓度马钱子暴露24小时,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)相比对照组降低42.5%~67.3%、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性降低22.1%~60.8%,同时丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量相比对照组增加17%~105%、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性相比对照组分别增加30.49%~34.05%、13.42%~15.18%。(3)实时PCR结果显示,Sod1、Bcl-2、Gstp2、Nqo1、Bid、Bax-2、Hmgcra、Mcl-1b和Tgf-βr2的表达水平受到显著影响。结论马钱子对斑马鱼的肝毒性与氧化应激损伤和脂肪代谢失衡有关。