抗人神经肽Y单克隆抗体的制备及鉴定

目的：建立抗人神经肽Y（NPY）的单克隆抗体细胞株。方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,用ELISA法筛选出阳性克隆,经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株,并对得到的单抗进行亚类、效价、纯度、亲和常数以及结合位点的测定和分析。结果：获得了3株稳定分泌抗hNPY单抗杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定分别为IgG3、IgG2b、IgG1,腹水效价为1：20万～1：200万,纯化抗体效价为0．05μg／ml-0．0005μg／ml,4A8抗体纯度达到95％以上,抗体亲和常数分别为5．27×10^6L／mol、3．39×10^6L／mol、1．05×10^7L／mol,不同单抗配对经时间分辨免疫荧光法检测结果提示3株单抗是针对不同抗原决定簇。结论：成功制备了3株抗hNPY单抗,为研究NPY及其抗体在脂肪移植及肥胖治疗中的机制和应用奠定基础。     

重组人神经肽Y融合蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备与鉴定

目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS—PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化,以纯化后的融合蛋白pET28a—NPY为抗原免疫家兔,获得抗血清,Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果经IPTG诱导含有pET28a—NPY重组质粒的DE3菌,表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni^2＋-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体,Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功表达了人NPY蛋白并获得了其多克隆抗体,为进一步研究人NPY蛋白的功能奠定了基础。     

与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y5基因的克隆及序列分析

目的 克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y5(NPY5R)基因,并鉴定该克隆基因序列的正确性.方法 从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录,以此为模板用PCR扩增NPY5R基因的cDNA,然后与pET28a+载体重组,筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定,测序后与CeneBank中NPY5R基因进行同源性比较和序列分析.结果 PCR扩增出-个1 300 bp左右的DNA片段,与载体重组和DNA序列分析鉴定,DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY5R基因,且所克隆的基因共编码445个氨基酸,分子量为50KD,与CeneBank中NPY5R基因序列同源性达100%.结论 克隆的人NPY5R基因与CeneBank中NPY5R序列完全一致,通过对其相关生物学信息的明确分析,为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY5R与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础.     

脑血管意外患者的观察护理

脑血管意外是一种常见病、多发病,也是致死率、致残率高的一种疾病.随着社会的发展和生活水平的提高,其发病率越来越高.近几年来,诊断、治疗此病有了新的进展,这就需要在护理方法上必须有所提高,并要求对脑血管意外患者采用一般护理常规同时,还要着重做好以下几点.     

PF/DX肺功能仪故障检修两例

PF／DX肺功能仪是美国麦加菲公司的产品，可完成呼吸量测定、功能残气量及肺容量测定、单次呼吸弥散功能测定、最大呼吸压力测定。我院使用该仪器多年，在使用中遇到过两例较为典型的故障，现从其工作原理上对这两例故障进行分析。一、DLCO标准曲线偏高准确范围即进入DLCO项后，产生不准确的标准曲线，致使弥散功能无法测定。主要产生图1所示的两种非标准曲线。PF／DX肺功能仪采用气体层析技术作弥散分析。即通过He气的推动，依次对Ne、OZ、N。、CO四种气体进行热相分析，以此测定肺的弥散功能。工作原理如图2所示。其工作过程如…     

ABL300 血气分析仪管路系统常见故障的排除

ABL300 是丹麦雷度公司生产的一种血气分析仪.我们在使用中遇到的一些故障,大都与其管路系统相关.现从管路系统的工作原理入手,对常见的故障进行分析、排除.     

重组人神经肽Y受体Y5融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究

目的 在大肠杆菌中表达人神经肽Y Y5受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析.方法 取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y5转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化.然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y5受体蛋白.结果 经IPTG诱导含有pET28a-Y5重组质粒的DE3菌,表达出重组人Y5融合蛋白.重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白.经相关在线软件分析后获得了Y5受体的相关生物学特性.结论 重组质粒pET28a-Y5在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对Y5受体蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础.     

自体血清(血浆)疗法在临床医疗和护理中的应用

白体血清(血浆)因其含有人体所需最基本、较齐全的营养成分和生物活性物质及细胞生长因子等,加上其是抽取患者的静脉血经立即离心分离后所获得的自体成分,来源方便、制备简便、安全有效、新鲜无污染、无刺激、无过敏、无毒副作用等特点,在现代医学研究及临床医疗和护理中的应用越来越广泛.为了不断探索自体血清(血浆)疗法在临床应用的新途径、新方法和新技术、进一步阐明白体血清(血浆)在临床应用过程中的治疗方法、作用机制和实际疗效等,本文通过对自体血清(血浆)在临床治疗和护理等领域中应用的检索文献进行综述,揭示自体血清(血浆)疗法充分利用其生物化学成分的广谱性及其生物学特性的多样性,在眼科、骨科、神经内外科、血液科、口腔科等相关疾病的临床治疗方面发挥着积极作用、且其有效性、安全性、稳定性在临床医学应用方面具有明显优势和独到之处.     

与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y1基因的克隆及序列分析

目的 克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y1(NPYlR)基因,并鉴定该克隆基因序列的正确性.方法 从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录,以此为模板用PCR扩增NPY1R基因的cDNA,然后与pET 28a+载体重组,筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定,测序后与GeneBank中NPY1R基因进行同源性比较和序列分析.结果 PER扩增出一个1100 bp左右的DNA片段,与载体重组后DNA序列分析鉴定,DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY1R基因,且所克隆的基因共编码384个氨基酸,分子量为44 KD,与GeneBank中NPY1R基因序列同源性达100%.结论 克隆的人NPY1R基因与GeneBank中NPY1R序列完全一致,为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY1R与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础.     

神经肽Y及其受体与某些老年病及作用机制的研究

高血压、冠心病、肺心病、支气管哮喘、慢性阻塞性肺病、糖尿病、老年性痴呆、帕金森氏病、老年抑郁症与焦虑症、骨质疏松、肿瘤等均是老年人较为常见的疾病,它们直接或间接地威胁甚至危害着老年人的健康和生命。然而,大量基础医学和临床研究发现,神经肽Y及其受体在机体的分布、含量、合成、分泌及表达水平和调控功能等,不仅有可能介导或影响着这些老年性疾病的发生、发展、加重或预后,而且还有可能与治疗这些疾病的生物学效应、作用靶点、用药途径及治疗对策等密切相关。因此,本文就神经肽Y及其受体与这些老年病之间的关系及其作用机制方面的研究进展作一综述,为今后探索以神经肽Y及其受体为靶点的有效治疗方式奠定基础,也为老年医学的科学研究和临床防治提供一些理论和实验依据。