基于UPLC-Q-TOF-MS技术的白花蛇舌草干预结肠炎相关结肠癌小鼠血清代谢组学分析

目的:研究白花蛇舌草(HDW)对结肠炎相关结肠癌(CAC)模型小鼠的干预作用,并探索其作用机制。方法:采用致癌剂氧化偶氮甲烷(AOM)与致炎剂葡聚糖硫酸钠(DSS)协同作用建立CAC小鼠模型,通过疾病活动指数(DAI),结肠组织形态、病理损伤评分及成瘤率评价HDW对CAC小鼠的干预作用;采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)技术,结合多元统计分析方法,对小鼠血清进行代谢组学分析,探讨HDW干预CAC的作用机制。结果:HDW可以显著改善CAC小鼠一般状况,降低DAI,结肠大体形态和组织病理学评分、成瘤率显著降低。与正常组相比,模型组筛选得到差异代谢物38种,其中包括潜在生物标志物11种,涉及主要代谢通路11条;HDW可显著调节模型组差异代谢产物9种[烟酰胺,尿苷,4-吡哆酸,溶血磷脂酰胆碱(18∶0),溶血磷脂酰乙醇胺(0∶0/20∶0),肌肉肌醇,嘌呤,二氢鞘氨醇-1-磷酸,十四烷二酸],其中包括潜在生物标志物2种(肌肉肌醇、烟酰胺),可调控烟酸盐和烟酰胺代谢、肌醇磷酸盐代谢。结论:HDW对CAC具有治疗作用,其机制可能与调节能量代谢和糖代谢有关。     

重楼克感滴丸质量标准研究

目的:建立重楼克感滴丸的质量标准。方法:采用薄层色谱方法对重楼克感滴丸中重楼和贯叶金丝桃进行鉴别。采用高效液相色谱法对金丝桃苷进行含量测定,色谱柱为Hypersil C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸(20∶80),检测波长360 nm,流速1.0 m L·min-1,柱温35℃。结果:金丝桃苷在0.198~1.98μg范围内线性关系良好(r=0.999 9)。金丝桃苷的平均加样回收率为99.84%(RSD=1.13%)。结论:所建方法简便可行,重复性好,专属性强,可用于重楼克感滴丸的质量控制。     

HPLC法测定白花蛇舌草中槲皮素-3-O-β-d-吡喃葡萄糖苷的含量

目的:建立测定白花蛇舌草中槲皮素-3-O-β-d-吡喃葡萄糖苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1%冰醋酸(60∶40,V/V),检测波长为254 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为35℃。结果:槲皮素-3-O-β-d-吡喃葡萄糖苷的质量浓度在5.24⁵2.40μg/ml范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<1.97%;平均加样回收率为99.57%,RSD=1.28%(n=6)。结论:该方法操作简便,结果准确、可靠,可用于白花蛇舌草药材中黄酮类活性成分的含量测定。     

白花蛇舌草黄酮类成分大鼠在体肠吸收研究

目的考察白花蛇舌草醇提物中5种黄酮类成分在大鼠肠道的吸收特性。方法采用大鼠在体单向肠灌流模型,运用HPLC-DAD法测定肠灌流液中芦丁、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素和山柰酚,计算各黄酮类成分在大鼠小肠的吸收参数。结果白花蛇舌草黄酮类成分在大鼠肠道的有效渗透系数(Peff)均较小;白花蛇舌草总黄酮质量浓度为0.5~4.0 g/L时,吸收速率常数(Ka)、Peff值差异无显著性;在2.0 g/L下,芦丁、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素和山柰酚的Ka分别为0.011 3、0.015 4、0.010 2、0.030 5、0.027 5 min-1;芦丁和异槲皮苷在不同肠段的Ka顺序分别为回肠十二指肠空肠≈结肠,空肠十二指肠回肠≈结肠。结论白花蛇舌草中5种黄酮类成分吸收均呈一级动力学过程,提示为被动扩散吸收;各黄酮成分之间的吸收有差异性,黄酮苷类成分的Ka值小于黄酮苷元;各黄酮成分在不同肠段均有吸收,芦丁和异槲皮苷的最佳吸收部位分别为回肠和空肠。     

基于指纹图谱和网络药理学的白花蛇舌草质量标志物预测分析

目的：基于指纹图谱和网络药理学方法,分析预测白花蛇舌草[Oldenlandia diffusa（Willd.） Roxb,ODWR]的质量标志物（quality markers,Q-Marker）。方法：利用HPLC建立ODWR指纹图谱,确认共有峰;通过对照品比对和HPLC-ESI-Q-TOF-MS对共有峰进行鉴定;运用网络药理学筛选和分析ODWR共有成分及炎症、肿瘤作用靶点和通路,构建"药物-成分-靶点-通路"网络,预测ODWR潜在Q-Marker;使用Auto Dock Vina软件对ODWR潜在的Q-Marker与关键靶点进行分子对接验证。结果：槲皮素-3-O-[2-O-（6-O-E-阿魏酰基）-β-D-吡喃葡糖苷]-β-D-吡喃半乳糖苷、（E/Z）-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯、（E/Z）-6-O-阿魏酰鸡屎藤次苷甲酯成分为ODWR潜在的Q-Marker,主要通过作用于PIK3R1、NFKB1、HRAS等靶点,调控Pathways in cancer、Proteoglycans in cancer、Focal adhesion等信号通路,发挥抗炎、抗肿瘤等作用。结论：槲皮素-3-O-[2-O-（6-O-E-阿魏酰基）-β-D-吡喃葡糖苷]-β-D-吡喃半乳糖苷、（E/Z）-6-O-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯、（E/Z）-6-O-阿魏酰鸡屎藤次苷甲酯成分可作为ODWR潜在Q-Marker。本研究为ODWR质量控制和评价提供参考,同时也为其抗炎、抗肿瘤活性成分及作用机制研究奠定基础。     

HPLC测定贯叶金丝桃滴丸中金丝桃苷含量

目的建立高效液相色谱法测定贯叶金丝桃滴丸中金丝桃苷含量的方法。方法采用Kromasil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸(16∶84),检测波长为360 nm,流速1.0 mL/min,柱温30℃。结果金丝桃苷在0.132~1.188μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均加样回收率为99.55%(RSD=0.78%)。结论本方法简便、准确、可靠,可用于贯叶金丝桃滴丸中金丝桃苷的质量控制。     

基于顶空气相色谱法测定的重楼总皂苷中有机溶剂残留质量控制研究

目的:建立重楼总皂苷中正己烷、苯、甲苯、间二甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯和1,2-二乙基苯等共8种有机溶剂残留的测定方法。方法:将重楼总皂苷溶解于25%N,N-二甲基甲酰中,应用顶空气相色谱法,采用石英毛细管柱和氢离子火焰检测器,以高纯氮气为载气,测定重楼总皂苷中8种有机溶剂的残留量。结果:该法可将8种有机残留完全分离,且线性关系良好,r=0.9987~0.9998,精密度RSD均小于5.0%,平均加样回收率为95.24%~98.57%。结论:此法简便、准确、可靠,可用于大孔树脂制备的重楼总皂苷中有机溶剂残的质量控制。     

水蛭提取方法及生理活性的研究

目的筛选较优的水蛭提取方法。方法采用原粉匀浆、水煎煮、水煎醇沉、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解等不同的方式提取水蛭,考察各提取方法的得膏率、对凝血酶原时间、纤溶活性、大鼠凝血时间及静脉血栓重量的影响。结果各项指标中以上六种工艺与空白对照组相比较均有显著性差异(P<0.05);各酶解工艺组与空白对照组相比有极显著性差异(P<0.01),其中仿生酶解液组与匀浆液组相比有极显著性差异(P<0.01),仿生酶解组明显优于其他酶解组,同时仿生酶解的得膏率最高。结论仿生酶解方法所得样品液的得膏率及生理活性作用较其他提取方法有极大提高,生物利用度更高,值得推广应用。     

胆宁片对胆汁33.5kDa泡蛋白含量和结构的影响

目的：探讨胆宁片对胆石症患者胆汁中33.5kDa泡蛋白含量及其结构的影响。方法：2008年1月—2010年3月对60例胆囊切除病例和40例胆总管探查病例进行前瞻性临床研究,其中60例胆囊切除病例随机分为3组：胆固醇结石胆宁片组（n=20）、胆固醇结石对照组（n=20）、胆色素性结石组（n=20）,另外设立正常对照组（n=20）。通过酶联免疫吸附法检测每份胆汁中33.5kDa泡蛋白含量,比较各组之间的差异。40例胆总管探查病例分为研究组和对照组（n=20）,通过蔓陀螺凝集素探针（DSA）介导的蛋白印迹法检测胆汁中33.5kDa泡蛋白糖链条带DSA结合率,比较2组糖链结构的变化。结果：胆固醇结石组胆汁中33.5kDa泡蛋白含量显著高于胆色素结石组和正常对照组,胆固醇结石胆宁片治疗组胆汁33.5kDa泡蛋白含量较对照组显著降低（P〈0.01）。胆固醇结石治疗组泡蛋白糖链条带DSA结合率较对照组显著下降（P〈0.05）。结论：胆宁片能降低胆固醇结石患者胆汁中33.5kDa泡蛋白含量,并通过改变糖链结构而使其促成核活性发生变化。     

白花蛇舌草多糖的提取纯化工艺研究

目的优选白花蛇舌草多糖的提取及纯化工艺。方法采用正交试验设计法优选白花蛇舌草多糖的最佳提取工艺;通过乙醇沉淀法、鞣酸沉淀法并联用活性炭对传统多糖的纯化工艺进行改进。结果最佳提取工艺为:白花蛇舌草药材预先加12倍量水浸泡2h,加热至70℃,提取3次,每次1.5h,采用鞣酸沉淀法联合活性炭可有效去除多糖中的蛋白质和色素等杂质。结论提取时间对多糖的提取效率影响较大;所优选的纯化工艺方法简便,蛋白去除率高,色素脱除完全,多糖损失少,工艺可行性强。