加拿大天然药品上市许可制度的研究与实践

目的:研究加拿大天然药品上市制度并加以实践,旨在为我国中医药企业提供另一种国际化战略的市场选择.方法:以加拿大卫生部天然药品相关政策法规和注册指南文件为基础,探索天然药品注册技术路径和标准规范,通过比较分析加拿大天然药品的定义、注册申请类别、注册技术标准,寻求突破加拿大市场准入政策壁垒和技术壁垒的策略方法.结果 与结论...     

遮阴对珠子参皂苷合成关键酶基因表达和皂苷积累的影响

为研究不同遮阴处理下皂苷合成关键酶表达对珠子参总皂苷合成与积累的影响,以全光照、30%遮阴和50%遮阴3种处理下的盆栽珠子参为材料,分别用实时荧光定量PCR法和紫外分光光度法测定了不同生长时期珠子参叶和根茎中3个关键酶基因(CAS,DS,β-AS)的表达和总皂苷含量。结果表明,在开花期CAS,DS,β-AS均在珠子参地上部分高表达,30%遮阴处理显著抑制了叶中CAS的表达而促进了茎,叶和花中DS,β-AS的表达,推测在此时期皂苷合成的主要部位为叶。整个生长周期内,DS,β-AS的表达与叶中总皂苷含量的变化均呈现出"低—高—低"的趋势,相关系数分析表明,两者之间为正相关关系。遮阴处理下DS,β-AS的总体表达水平和总皂苷含量远高于全光照处理,其中以30%遮阴处理对总皂苷积累的促进作用最明显。因此建议在人工栽培珠子参时,采取30%的遮阴处理,以利于珠子参皂苷的积累和品质的提升。     

秦艽WRKY转录因子家族生物信息学分析

目的 利用生信技术分析秦艽WRKY家族，为进一步研究GmWRKY转录因子对秦艽次生代谢产物生物合成的分子调控机制提供信息。方法 基于秦艽转录组注释结果挖掘WRKY家族成员，通过NCBI-tBlastx和SMART保守结构域预测进一步筛选得到41条WRKY序列并进行生信分析。基于getorf预测开放阅读框（open reading frame，ORF）区，对41条序列的ORF片段进行MEME保守基序分析和ClustalW比对，采用MEGAX构建邻接法（neighbor-joining，NJ）系统发育树。利用Omicshare GO对41个WRKY成员进行富集分析，利用String进行WRKY成员蛋白互作网络预测分析。通过转录组FPKM值对GmWRKY成员的基因表达情况进行热图分析，并对蛋白互作核心成员进行基因相对表达分析。结果 41个秦艽WRKY成员中大部分成员的保守基序为“WRKYGQK”，仅GmWRKY27保守基序发生氨基酸突变，为“WRKYGKK”。依据WRKY特征结构域将41条序列的51个结构域分为3大类和8个亚类型，第I大类为氮端（N）和碳端（C），第II大类下设5个亚类型，以及第III大类；此外，系统进化树可将51个WRKY结构域分成4大组，GroupI[I(N)]、GroupII（IIa＋IIb）、GroupIII[I(C)＋IIc]、GroupIV（IId＋IIe和III），该结果与经典的WRKY家族分类特点基本一致。GO分析发现秦艽WRKY家族成员广泛参与代谢调控过程。当茉莉酸甲酯（jasmonic acid methyl ester，MeJA）诱导秦艽后，蛋白网络互作的核心成员GmWRKY1和GmWRKY17表达显著提高，推测这些WRKY成员与秦艽次生代谢产物的调控关系密切。结论 为进一步开展秦艽WRKY转录因子功能研究奠定基础。     

聚乙二醇模拟干旱胁迫下半夏茎段转录组分析

目的 通过分析30%聚乙二醇（PEG）模拟的干旱胁迫处理下半夏茎段转录组数据，挖掘响应干旱胁迫的相关基因，探索干旱胁迫下半夏发生"倒苗"的分子机制。方法 以干旱胁迫下半夏发生"倒苗"时的茎段作为研究材料，采用Illumina Hiseq 2500平台进行转录组双向测序，并对数据进行生物信息学相关分析。结果 共获得23.00 Gb clean data，对照组与干旱胁迫处理组分别获得37 467 952和39 903 362个clean reads，经Trinity软件组装获得100 274个uingenes。通过将组装所得unigenes分别与Nr、eggNOG、Pfam、Swiss-Prot、KOG、GO、KEGG、COG等数据库进行比对分析，41 132个unigenes获得功能注释。最终筛选得到差异表达基因4 052个，其中2 080个DEGs表达上调，1 972个DEGs表达下调。KEGG通路富集分析显示，差异表达基因主要集中在核糖体、碳代谢、淀粉和蔗糖代谢、植物激素信号转导和氨基酸生物合成等过程；基因表达水平分析显示，半夏中编码植物激素代谢与信号转导、氧化还原相关酶、热激蛋白和液泡加工酶等基因在干旱胁迫处理后表达水平显著上升，多数编码水通道蛋白的DEGs表达水平下降。结论 通过对PEG模拟的干旱胁迫处理下半夏转录组测序结果进行分析，获得半夏水分代谢、激素代谢与信号转导、相关响应蛋白等候选基因，可为揭示干旱胁迫导致半夏"倒苗"的发生机制提供基因资源和理论依据。     

不同栽培年限珠子参在不同生长期的光合特性及保护酶活性研究

目的:为珠子参高效优质人工栽培技术提供研究基础。方法:在一个生长周期内对不同栽培年限珠子参主要农艺性状、叶片光合特性、叶绿素和丙二醛含量、保护酶活性进行测定,用Excel与SPSS软件处理数据。结果:3年生珠子参地上部分生长旺盛,叶绿素含量和保护酶活性高,对光能的捕获、有机物的同化、以及对环境的适应能力高于2年生和苗期珠子参。结论:人工栽培珠子参,应根据栽培年限和生长阶段的不同采取相应的遮阴措施。     

腹腔镜治疗结直肠癌的临床疗效及安全性

目的：探讨腹腔镜治疗结直肠癌的临床疗效及安全性。方法：选取2009年6月～2011年5月于本院进行治疗的96例结直肠癌患者为研究对象,将其随机分为对照组和观察组各48例,对照组采用开腹手术进行治疗,观察组采用腹腔镜手术进行治疗,后将两组患者的手术时间、出血量、排气时间、住院时间、并发症发生率及手术前和手术后1d及3d的外周血T淋巴细胞亚群进行检测及比较。结果：观察组在手术时间、出血量、排气时间、住院时间、并发症发生率等方面均优于对照组,术后1d及3d观察组的CD3＋、CD4＋及CD4/CD8水平均高于对照组,而CD8＋水平较对照组却呈降低趋势,两组比较,P均〈0.05,差异均有统计学意义。结论：腹腔镜治疗结直肠癌临床疗效较好,安全性较高,对患者的免疫状态影响也较小。     

三镜不同组合微创治疗胆囊结石并肝外胆管结石

目的探讨以肝外胆管结石直径的大小来选择运用不同的内、腔镜组合方式,对胆囊结石并肝外胆管结石进行微创治疗的可行性和应用价值。方法分析总结随机抽取的60例胆囊结石并肝外胆管结石患者,前瞻性选择不同的内腔镜组合进行治疗的资料。结果58例病例通过不同的内、腔镜组合完成微创手术,无中转开腹,无明显出血、穿孔、返流性胆管炎、胆道狭窄等并发症,治愈率96.7%。同时介入操作时间大大缩短。2例内镜下治疗失败改开腹手术,占全组3.3%。结论根据肝外胆管结石直径的大小选择运用不同的内、腔镜组合方式,是治疗胆囊结石并肝外胆管结石的一种安全、高效、简明的方式。     

基于转录组的防风SSR分子标记开发及应用

采用转录组测序的方法挖掘防风SSR位点信息并设计特异引物,以期为防风的种质资源遗传多样性研究提供有力依据。对防风种子净度、千粒重、发芽率、活力等种子特性进行统计,并对转录组数据库中长度1 kb以上的12 606条unigene,利用MISA软件搜索SSR位点信息,使用Primer 3设计引物,以筛选得到的43对SSR引物分析28份不同来源防风材料的多态性。结果显示不同种源防风在净度、千粒重、发芽率、活力、种子长宽等方面存在差异,其中发芽率、活力的差异较为明显,HB-ZJK1、NMG-CF4、NMG-BT、NMG-HLE1、NMG-CF2的千粒重、发芽率、活力方面明显高于其他种源。在得到的86 233条unigene序列中利用MISA软件发现有12 606条unigene序列上共包含了15 958个SSR位点,SSR位点unigene数占unigene总数的14.62%,平均每5 009 bp出现1个SSR位点,SSR位点的重复类型以单核苷酸和二核苷酸为主,G/C、TC/AG是单核苷酸和二核苷酸的优势基元,利用28个不同产地防风材料对所有引物进行筛选,得到条带清晰、稳定多态性好的引物。聚...     

以肝外胆管结石的大小选择不同的内镜组合治疗胆囊结石并肝外胆管结石

目的 探讨以肝外胆管结石直径的大小来选择运用不同的内镜组合方式,对胆囊结石并肝外胆管结石进行微创治疗的可行性和应用价值.方法 分析总结2006年6月～2008年6月对该院随机抽取的43例胆囊结石并肝外胆管结石患者进行前瞻性的选择不同内镜组合进行治疗的资料.结果 41例病例通过不同的内镜组合完成微创手术,无中转开腹,无明显出血、穿孔、反流性胆管炎、胆管狭窄等并发症,治愈率95.3%.同时介入操作时间大大缩短.2例内镜下治疗失败改开腹手术,占全组4.8%.结论 根据肝外胆管结石直径的大小选择运用不同的内镜组合方式,是治疗胆囊结石并肝外胆管结石的一种安全、高效、简明的理想方式.     

胃恶性肿瘤术后肠漏原因分析

目的探讨胃恶性肿瘤术后出现肠漏的原因。方法回顾性分析76例胃恶性肿瘤患者的临床资料。结果2例出现十二指肠残端漏，1例出现吻合口漏，均积极治疗后痊愈。结论防治十二指肠残端漏的关键是保持胃肠减压管的引流通畅，注意负压吸引管的压力不要太大，要经常观察引流量的情况；另外纠正患者营养状态也可减少吻合口漏发生。