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目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3在单侧输尿管梗阻大鼠模型中的表达及其意义。方法 2011年5—12月选取清洁级Wistar大鼠48只进行随机对照试验,采用随机数字表法分为两组,假手术组(sham组)和模型组(UUO组)各24只,sham组分离输尿管不结扎,UUO组行左侧输尿管结扎术。每组术后3、7、14 d分为3组,每组8只,生化分析仪检测大鼠尿β2微球蛋白和血肌酐水平;苏木素-伊红(HE)染色,光镜观察肾脏病理形态改变;免疫组织化学染色(SABC)法、蛋白印迹(Western blot)法检测PCNA和caspase-3的表达。采用SPSS 13.0统计软件进行统计学处理。结果术后3、7 d两组尿β2微球蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);术后14 d两组尿β2微球蛋白水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。术后3、7、14 d两组血肌酐水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。HE染色显示,sham组大鼠肾脏肾小管排列紧密、整齐;UUO组术后3 d,可见肾小管肿胀,部分肾小管轻度扩张,小管间质区域出现炎性浸润;术后7 d肾小管壁扩张,肾间质水肿;术后14 d肾小管结构已经完全被破坏,管腔塌陷。SABC法结果显示,两组术后3、7、14 d,肾小管内PCNA阳性细胞百分率比较,差异无统计学意义(P>0.05);肾间质内PCNA阳性细胞百分率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组术后3、7、14 d,肾小管内caspase-3阳性细胞百分率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);肾间质内caspase-3阳性细胞百分率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot法结果显示,sham组肾皮质中有微量PCNA、caspase-3表达;UUO组术后PCNA、caspase-3表达增加,梗阻时间延长表达增加。结论 PCNA表达增加导致肾间质细胞过度增殖,参与梗阻性肾病病理过程。caspase-3活性明显增强,加速细胞凋亡,在梗阻性肾病中对起着重要作用。细胞的增殖与凋亡参与UUO大鼠模型肾纤维化过程,PCNA和caspase 3是这一过程的两个重要参数。 相似文献
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[摘 要] 目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对肾小管上皮细胞表型标志物的影响,探讨PAX2诱导转分化的作用,为肾纤维化治疗提供依据。方法:正常肾小管上皮细胞株NRK52E分为对照组、空载组(转染pGC-Fu空质粒)和转染组(采用脂质体转染法将pGC-FU-GFP-PAX2质粒转染至细胞中)。转染72 h后应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态,应用Western blotting法和Real-time PCR法检测PAX2蛋白和mRNA表达水平;转染72 h后应用免疫组织化学法、Western blotting法和Real-time PCR法检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin) 和α-肌动蛋白(α-SMA)及其mRNA表达水平。结果:pGC-FU-GFP-PAX2转染72 h后,转染组细胞绿色荧光强度较对照组明显增强,且肾小管上皮细胞的形态伸长; Western blotting法检测,转染组PAX2蛋白表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05);Real-time PCR检测,转染组细胞的PAX2mRNA表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05);转染组细胞中的E-cadherin染色较空载组和对照组明显减弱;α-SMA染色较空载组和对照组明显增强。Western blotting法检测,转染组细胞中E-cadherin表达水平明显低于空载组和对照组(P<0.05);α-SMA表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05);Real-time PCR检测,转染组细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显低于空载组和对照组(P<0.05);α-SMA mRNA表达水平明显高于空载组和对照组(P<0.05)。结论:PAX2转染正常肾小管上皮细胞后E-cadherin表达减少,α-SMA表达增加,PAX2可能在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化。 相似文献
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肾纤维化是各种肾脏疾病进展到慢性肾功能衰竭的共同途径和主要病理基础.研究发现肾纤维化过程中存在Wnt信号传导通路,并且在肾纤维化的发生发展中起重要作用.该文就目前关于Wnt信号传导通路与肾纤维化研究的最新进展作一综述. 相似文献
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目的:研究VES对Her-2、p53共表达乳腺癌细胞株MDA-MB-453细胞的增殖、凋亡的影响、通过检测Her-2、p53探讨VES抑制乳腺癌细胞生长的机制。方法:应用MTT法检测VES对MDA-MB-453细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡;RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测Her-2基因mRNA和Her-2、p53蛋白表达水平。结果:VES能抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖,随VES剂量的增加,抑制作用增强。其中20μg/ml VES处理组在48h后受到明显抑制,抑制率达52.25%;经VES处理后细胞出现凋亡,5μg/ml处理48h后,凋亡率为39.52%;药物干预组使肿瘤细胞大量阻滞于G1期(P<0.01);RT-PCR和免疫细胞化学法结果表明,VES能抑制Her-2基因mRNA的转录水平,从而抑制其蛋白的表达,也能降低p53蛋白的表达。结论:VES可诱导Her-2、p53共表达乳腺癌MDA-MB-53细胞凋亡,抑制增殖。其机制可能是通过抑制Her-2基因mRNA及蛋白的表达和通过抑制突变型p53蛋白的表达使细胞停滞于G1有关。 相似文献