临床前基础医学综合实验课程的建设与思考

传统的以学科为中心的教学模式存在课程间横向联系松散,基础知识体系缺乏相互融合,不利于医学生临床疾病诊治技能的学习。建设一门适应五年制高等医学教育对实用型医学人才培养的基础医学综合实验课程是本研究目的。文章对五年制高等医学院校建设临床前基础医学综合实验课程的必要性和实施效果进行了分析和总结。     

实验大鼠动脉粥样硬化模型的建立

目的建立一种简单易行的动脉粥样硬化的大鼠模型。方法雄性SD大鼠在高脂饮食的基础上给予维生素D3肌注和尼古丁灌胃,4周后观察各组动物血浆总胆固醇、高密度脂蛋白的变化和主动脉斑块形成情况。结果模型组血浆总胆固醇比正常对照组增高652%,高密度脂蛋白降低44%,且有明显的动脉斑快形成。结论高脂饮食辅以维生素D3肌注和尼古丁灌胃是一种简单快速的大鼠动脉粥样硬化模型的复制方法。     

氧化苦参碱对脓毒症大鼠肺组织JAK/STAT信号通路的影响

目的:观察氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对脓毒症大鼠肺组织JAK/STAT通路的影响。方法:采用大鼠盲肠节扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠脓毒症模型,随机将56只清洁级、健康雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、OMT高、中、低(52,26,13 mg.kg-1)剂量组、阳性药地塞米松10 mg.kg-1)对照组。观察OMT对脓毒症大鼠肺组织W/D、肺系数等指标及肺组织病理学改变的影响。采用免疫组化法检测肺组织JAK2及STAT3的活性;放射免疫分析法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的含量改变。结果:不同剂量的OMT能使肺组织中JAK2及STAT3的阳性反应明显减弱,显著抑制了肺组织JAK2及STAT3的活性(P0.05);降低肺组织匀浆中TNF-α及IL-6的含量TNF-α:OMT高、中、低剂量组分别降低了36%,26%和16%(P0.05或P0.01);IL-6:OMT高、中、低剂量组分别降低了46%,39%和24%(均P0.01);降低肺组织W/D比值及肺系数(均P0.05),改善肺组织充血、水肿和中性粒细胞大量浸润及透明膜形成等病变,并且该作用在OMT高、中剂量组与阳性对照组的结果相一致。结论:OMT能通过抑制JAK-STAT信号通路的活化从而抑制细菌、病毒等对JAK2的激活作用,减少TNF-α,IL-6等促炎因子的表达,进而对脓毒症大鼠肺损伤性病变发挥治疗作用。     

miR-195-3p在同型半胱氨酸诱导的肝氧化应激损伤中的调控作用研究

目的 探讨miR-195-3p在同型半胱氨酸(Hcy)诱导的肝氧化应激损伤中的作用。方法 小鼠分为CBS^+/+组、CBS^+/-组、Lv-miR-195-3p组(CBS^+/-小鼠经尾静脉注射病毒滴度为2×10⁷ TU·mL^-1的miR-195-3p重组慢病毒)、Lv-GFP组(CBS^+/-小鼠经尾静脉注射等体积病毒滴度为1×10⁸ TU·mL^-1的绿色荧光蛋白慢病毒)和PBS组(CBS^+/-小鼠经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液),每组10只。体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol·L^-1 Hcy)、Hcy组(100μmol·L^-1 Hcy)、mimic-NC组(转染模拟物对照组)、mimic-NC+Hcy组(转染模拟物对照组+100μmol·L^-1 Hcy)、miR-195-3p-mimic组(转染miR-1...     

外源性硫化氢对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其可能机制

目的探寻外源性硫化氢对人脐静脉平滑肌细胞(HUSMC)钙化的影响及机制。方法在成功复制HUSMC钙化模型基础上,给予硫氢化钠(Na HS)进行培养,实验分为6组(n=6):对照组、钙化组、单纯Na HS组(8.0×10-6mol/L Na HS)、钙化+Na HS高剂量组(4.0×10-5mol/L Na HS)、钙化+Na HS中剂量组(8.0×10-6mol/L Na HS)、钙化+Na HS低剂量组(1.6×10-6mol/L Na HS)。对各组HUSMC进行Von Kossa染色、显微图像分析,并检测各组碱性磷酸酶活性、钙离子含量,荧光定量PCR法检测细胞中骨桥蛋白mRNA的表达,放射免疫法检测培养液中骨桥蛋白含量。结果硫化氢可明显减少HUSMC钙结节的聚集生长,Von Kossa染色显示细胞聚集处棕褐色钙结节较钙化组明显减轻,差异有统计学意义(P0.05);钙化+Na HS高剂量组、钙化+Na HS中剂量组、钙化+Na HS低剂量组钙化细胞百分比、细胞钙含量和碱性磷酸酶活性较钙化组明显降低,差异有统计学意义(P0.05),培养液中骨桥蛋白含量及其细胞内骨桥蛋白mRNA表达均较钙化组减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论硫化氢可以减轻HUSMC钙化的程度,其机制可能是通过下调细胞内骨桥蛋白mRNA的表达,进而导致骨桥蛋白生成减少而实现的。     

枸杞多糖对高脂血症大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究枸杞多糖（LBP）对高脂血症大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法采用高脂饲料喂养的方法建立高脂血症大鼠模型,将普通饲料喂养的大鼠设为正常对照组,成模大鼠随机分为高脂血症组、LBP（40、80、120mg/kg）组,药物干预4周后处死大鼠,取主动脉测定平滑肌细胞凋亡率。结果 LBP各剂量组主动脉平滑肌细胞凋亡率均明显下降（P〈0.05或P〈0.01）。结论 LBP能够降低高脂血症大鼠平滑肌细胞凋亡率,延缓动脉粥样硬化的发生。     

组织块重复贴壁使用在原代细胞培养中的实验意义

目的旨在提高采用人脐静脉组织块贴壁法进行平滑肌细胞原代培养组织块的重复利用率,进而缩短采用细胞培养进行实验的培养周期。方法以改良人脐静脉平滑肌细胞贴壁培养法为基础,当原代培养细胞(对照组)进行第1次细胞传代后,将培养组织块再次接种于新培养瓶中继续培养(实验组),分别记录两组细胞爬出时间、第1次传代时间、以及第1次传代后24、48、72、96h的细胞计数,通过倒置显微镜对两组细胞进行形态学观察,采用抗α-actin免疫细胞化学方法,对两组传代细胞的类型和性质进行鉴定。结果与对照组比较,实验组细胞爬出时间及第1次传代时间均明显缩短(P<0.05);两组第1次传代后24、48、72、96h细胞计数差异均无统计学意义(P>0.05);两组细胞形态经α-actin鉴定差异无统计学意义。结论人脐静脉组织块重复贴壁培养后,经传代其细胞数量、细胞形态与原代组织块贴壁培养的细胞差别均无统计学意义。     

FoxO1在同型半胱氨酸诱导的肾脏足细胞损伤及凋亡中的作用研究

摘要：目的　探讨叉头状转录因子O1（FoxO1）在同型半胱氨酸（Hcy）诱导的肾脏足细胞损伤及凋亡中的作用。方法　采用高蛋氨酸饮食喂养胱硫醚β-合成酶（Cbs）基因正常Cbs+/+小鼠和单基因敲除Cbs+/-小鼠各10只。8周后处死,收集肾组织,PAS染色观察小鼠肾小球形态学变化。体外培养足细胞,分为Control组和Hcy组（用含80 μmol/L Hcy的细胞培养液干预48 h）。将携带绿色荧光蛋白（GFP）的过表达FoxO1腺病毒（Ad-FoxO1）和干扰FoxO1腺病毒（Sh-FoxO1）转染足细胞,分为对照组、Ad-GFP组、Ad-FoxO1组、Sh-NC组、Sh-FoxO1组、Ad-GFP+Hcy组、Ad-FoxO1+Hcy组、Sh-NC+Hcy组、Sh-FoxO1+Hcy组。Western blot检测小鼠肾组织和足细胞裂隙膜蛋白（Podocin和Nephrin）、FoxO1及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶12（Caspase12）蛋白表达;qPCR检测小鼠肾组织和足细胞中FoxO1 mRNA的表达。结果　PAS染色结果显示,Cbs+/+组小鼠肾小球结构正常,基底膜清晰且分布均匀,而Cbs+/-组小鼠肾小球基底膜则呈现节段性增厚,系膜基质增多;与Cbs+/+组小鼠比较,Cbs+/-组小鼠肾组织中Podocin、Nephrin和FoxO1蛋白、FoxO1 mRNA的表达明显降低（P＜0.01）。与Control组比较,Hcy组FoxO1 mRNA和蛋白表达显著降低（P＜0.01）;过表达FoxO1后,与Ad-GFP+Hcy组相比,Ad-FoxO1+Hcy组Podocin和Nephrin蛋白表达均明显升高,Bax/Bcl-2比值、Caspase12蛋白表达均明显降低（P＜0.05）;而干扰FoxO1后,与Sh-NC+Hcy组相比,Sh-FoxO1+Hcy组Podocin和Nephrin蛋白表达均明显降低,Bax/Bcl-2比值、Caspase12蛋白表达均明显增高（P＜0.05）。结论　FoxO1可减轻Hcy诱导的小鼠肾脏足细胞损伤及凋亡。     

冠心病患者血浆生长素水平与心功能和预后的相关性研究

目的探讨冠心病患者血浆生长素水平与心功能和预后的关系。方法选择连续入院的冠心病患者83例为冠心病组,按疾病亚型又分为:急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)31例,非ST段抬高急性冠状动脉综合征(NSTF-ACS)31例,稳定性心绞痛(SAP)21例。另选25例健康者为对照组。ELISA法检测患者入院1周内生长素水平,并与临床病史、血浆生化指标、心肌损伤标记物水平以及心功能指标进行相关性分析。结果冠心病组患者入院第1天生长素水平明显低于对照组。STEMI患者生长素水平随发病时间逐步升高,但至发病第7天仍未恢复至对照组水平。冠心病患者生长素水平与心肌损伤标记物峰值呈正相关,其中STEMI患者在发病1周内生长素水平与LVEF呈负相关。随访发现STEMI和NSTE-ACS惠者入院第3天,生长素在发生心功能不全和死亡患者中水平更高。结论冠心病患者低水平的生长素可能参与冠状动脉粥样硬化过程;急性心肌梗死后逐步升高的生长素反映了机体的代偿机制,并可能具有预后价值。