人分化抑制因子3基因原核表达载体的构建及融合蛋白的表达

目的:在大肠埃希菌中表达和纯化人分化抑制因子3(Id3),为进一步研究Id3的生物学活性打下基础. 方法:PCR扩增人Id3基因编码区的DNA片段,将PCR产物克隆至pGEM-T Esay载体中并测序鉴定.将Id3 cDNA片段重组入原核表达质粒pET-32a( ),转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,表达产物经Western blot 鉴定,并通过镍亲和层析柱纯化His-Tag标记的融合蛋白. 结果:成功地构建了Id3的原核表达载体.Western blot分析证实,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了His-Tag融合蛋白,亲和层析法纯化后获相对分子质量为34 000的Id3融合蛋白. 结论:重组质粒pET32a( )-Id3能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,镍亲和层析柱可纯化获得融合蛋白.     

关于免疫学检验定位的思考

在科学上提出一个正确的问题往往比找到正确的答案更困难[1],关于“免疫学检验的定位”可能就是这样一个问题。基础免疫学和临床免疫学构成医学免疫学这门学科,免疫检验学则是临床免疫学的重要组成部分。20世纪70年代以前,在我国各级医院的检验科,都没有设置免疫学检验的专业实     

抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物对类风湿关节滑膜细胞功能影响的研究

目的:研究类风湿关节炎(RA)患者血清抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物(ACPA-IC)对RA患者关节成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖和分泌细胞因子功能的影响。方法:用PEG沉淀法提取RA患者血清免疫复合物(IC),ELISA法检测IC中ACPA-IC水平。用G蛋白免疫亲和层析法从6份ACPA-IC(+)RA血清、4份ACPA-IC(-)RA血清及10份正常人血清中提取IC。体外培养RA关节FLS;分别用RA ACPA-IC(+)提取物、ACPA-IC(-)提取物及健康人血清IC(C-IC)刺激FLS,用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂检测FLS增殖情况,液态芯片技术检测不同来源IC刺激对FLS分泌IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、GM-CSF、EGF、VEGF等11种细胞因子水平的影响。结果:RA患者ACPA-IC(+)提取物能够显著促进FLS增殖,与对照组IC比较,在培养24小时时间里,四种浓度(25、50、75和100μg/ml)的ACPA-IC都能显著促进FLS增殖。RA患者血清ACPA-IC(+)和ACPA-IC(-)提取物刺激FLS 24小时后,可诱导细胞分泌大量IL-6、IL-8和GM-CSF;其中ACPA-IC(+)组刺激FLS分泌GM-CSF和IL-8量均显著高于ACPA-IC(-)组和C-IC组,ACPA-IC(+)组刺激FLS分泌IL-6水平显著高于C-IC组,但与ACPA-IC(-)组无显著性差异。三组间刺激分泌IL-1β、IL-2、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、EGF、VEGF等其他8种细胞因子含量均无显著性差异。结论:RA患者血清ACPA-IC可促进FLS增殖,并诱导其分泌IL-6、IL-8和GM-CSF等炎性细胞因子,进而进一步诱发滑膜炎症反应及骨质破坏。     

腹腔镜脐内侧襞瓣加强内环口疝修补术在儿童及青少年腹股沟斜疝中的应用

目的 探讨腹腔镜脐内侧襞瓣加强内环口疝修补术在治疗儿童和青少年腹股沟斜疝中的可行性及优越性.方法 从2001年10月至2005年1月,我院对110例(140侧)儿童实施了疝囊高位结扎术(A组).2005年1月至2011年2月,对于300例(405侧)患儿疝囊高位结扎术(B组)中,对有疝复发危险因素的47例患儿,加做脐内侧襞瓣覆盖加强内环口.结果 B组具有疝复发危险因素患儿47例,经腹腔镜脐内侧襞腹膜瓣加强内环口疝修补术均顺利完成.A组随访2～122个月,平均56个月,4例复发(2.8%).B组随访5～74个月,平均34个月,尚未见复发.二组患者随访期间均未见睾丸萎缩等并发症.结论 腹腔镜疝囊高位结扎合并脐内侧襞瓣覆盖内环口疝修补术是安全可靠的,对有选择的腹股沟斜疝患儿以及青少年腹股沟斜疝有进一步降低疝复发的作用.     

炎宁舒洗液定性鉴别研究

目的：制定炎宁舒洗液的质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC法）对该制剂品种中的蛇床子、紫花地丁、关黄柏三味药材进行定性方法研究。结果：建立了这三味药材的TLC鉴别方法,该方法专属性强,分离度良好,阴性样品无干扰,薄层色谱斑点清晰。结论：所建TLC鉴别方法专属性强,可用于炎宁舒洗液的质量控制。     

SEDL基因突变致迟发性脊柱骨骺发育不良机制的初步研究

目的迟发性脊柱骨骺发育不良（spondyloepiphyseal dysplasia tarda,SEDT）是一种X线表现明显的X连锁骨发育不良疾病,主要特征包括不成比例的短躯干型矮身材、大关节发育不良以及胸腰椎椎体扁平。文中初步研究SEDL基因突变致SEDT的机制。方法将野生型SEDL基因及其突变型（c.370-371insA）重组真核表达质粒分别转染COS-7细胞,通过流式细胞仪检测转染效率,激光共聚焦显微镜下观察重组蛋白表达的亚细胞定位,应用透射电镜观察转染细胞的超微结构。结果野生型和突变型重组质粒的转染效率分别为47.51%和46.39%。野生型重组Sedl-in蛋白主要定位于核周,而突变型Sedlin蛋白则主要分布于细胞核以及部分在胞质表达。超微结构显示转染SEDL突变型重组质粒的细胞溶酶体显著增多。结论SEDL基因c.370-371insA突变导致Sedlin蛋白细胞定位的变化可能是SEDT发病的分子机制。     

生肌象皮膏对糖尿病大鼠溃疡创面肉芽组织的终末糖基化产物及受体的影响

[目的]通过对糖尿病大鼠溃疡创面肉芽组织的终末糖基化产物及受体的含量的动态观察,探讨生肌象皮膏促进糖尿病大鼠难治性溃疡愈合的机制。[方法]制备糖尿病溃疡动物模型,按照血糖和体质量分层随机分为糖尿病空白对照组、凡士林组、生肌象皮膏组。生肌象皮膏组外用生肌象皮膏纱条外敷,凡士林组用凡士林纱条外敷,空白组、糖尿病对照组均以生理盐水纱条外敷,分别于1、7、14、21d每组处死动物10只,手术取新鲜肉芽组织160例。采用实时荧光定量PCR法检测终末糖基化产物受体的含量,免疫组化法检测终末糖基化产物的含量。[结果]终末糖基化产物的含量于糖尿病各组与空白组比较无显著性差异,均呈强阳性表达。糖尿病各组间比较无统计学意义。糖尿病各组终末糖基化产物受体（RAGE）于7d有升高的趋势,14d达到高峰,各组间无统计学意义。从均数趋势上看生肌象皮膏组明显低于凡士林组、糖尿病对照组,在均数趋势上看生肌象皮膏组可以抑制RAGE的产生,随时间的延长,更为明显。第21天糖尿病各组的RAGE呈低表达,生肌象皮膏组、凡士林组与空白组比较有统计学意义。糖尿病各组组间比较,无统计学意义。[结论]生肌象皮膏对终末糖基化产物无明显影响,可以减少终末糖基化产物受体的产生,随时间的延长,更为明显。     

冻干皮内注射用卡介苗的临床观察

目的  对两个工作种子批菌种D2-甲12制备的两批冻干卡介苗接种人体后的安全性和效果进行临床考核。 方法  对100名结核杆菌纯化蛋白衍生物（PPD）皮肤试验阴性的3月龄~50岁健康对象和205名新生儿分别接种上述两个批次的观察疫苗和一个对照疫苗。观察接种后的局部和全身反应,测量卡痕,并对新生儿进行PPD皮肤试验。采用χ²检验和t检验对新生儿各组间的卡痕和PPD试验结果进行比较。结果  所有对象接种后均未发现接种部位和全身不良反应。新生儿卡痕均值≥4.6 mm,PPD硬结均值≥6.8 mm。卡痕和PPD试验阳性率均超过90%,两者在新生儿各组间的差异均无统计学意义（χ² =0.001~1.713,P=0.191~1.000）。卡痕均值和PPD硬结均值在两个观察疫苗组间的差异无统计学意义（t=0.773,P=0.441;t=0.226,P=0.822）,而对照疫苗组与两个观察疫苗组间的差异均有统计学意义（t=2.645~3.361,P=0.001~0.010）。  结论  两个工作种子批菌种D2-甲12制备的卡介苗接种人体是安全的,并具有良好的接种效果。     

自身免疫病患者及肿瘤患者血清干扰素抗体的测定

用ｒＩＦＮ－α２ｂ和ｒＩＦＮ－γ作为抗原建立了检测血清中相应抗体的间接ＥＬＩＳＡ法。在１８８佝健康体检者中检出１例抗ｒＩＦＮ－α２ｂ阳性，２例抗ｒＩＦＮ－γ阳性。类风湿性关节炎患者。全身性红斑狼疮患者。混合性结缔组织病患者以及肿瘤物这二种ＩＦＮ抗体水平明显高于对照者。抗体检出率为２．９－６．３％。     

牙周状况、血清白细胞介素-1β水平与妊娠关系初探

目的探讨牙周状况、血清白细胞介素- 1β（IL- 1β）水平与妊娠间的关系。方法以40例先兆早产孕妇（TPL组）和40例正常孕妇（Non- TPL组）为研究对象，检查全口牙齿的牙周状况，记录菌斑指数（PLI）、探诊深度、临床附着丧失和出血指数（BI），并计算牙周炎位点率。酶联免疫吸附试验检测血清IL- 1β水平。对各项检查指标进行统计分析。结果①TPL组40例孕妇中26例足月产（TPL- TB小组），14例早产（TPL- PB小组）；Non- TPL组40例孕妇皆足月产。TPL组和Non- TPL组、TPL- TB小组和TPL- PB小组的分娩孕周、新生儿出生体重、PLI、牙周炎位点率和血清IL- 1β水平间的差异均有统计学意义（P<0.05）。②分娩孕周和牙周炎位点率、BI、IL- 1β水平呈负相关（P<0.05），IL- 1β水平与牙周炎位点率和BI呈正相关（P<0.05）。结论牙周感染可能是早产的原因之一。