壳聚糖-明胶-碱性成纤维细胞生长因子三维大孔支架对骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景:干细胞的分化潜能与培养条件有密切关系,改变支架材料的表面特性,三维结构,增加生长因子均可实现对干细胞增殖分化的控制.目的:制备适合骨髓间充质干细胞附着生长的、具有最佳孔隙率和孔隙结构的药物缓释组织工程支架--三维大孔支架,提供能促进多能干细胞生长的微环境.设计:重复测量设计.单位:广州中医药大学基础医学院解剖教研室.材料:实验所用健康成年 SD 大鼠由广州中医药大学实验动物中心提供.壳聚糖、碱性成纤维细胞生长因子购自Sigma公司.方法:实验于2003-03/2006-12主要在广州中医药大学基础医学院解剖教研室完成.采用冷冻干燥的方法,用不同比例的壳聚糖.碱性成纤维细胞生长因子-明胶依次混匀,通过控制冷冻、复温和干燥时间处理使其具有最佳孔隙率和孔结构,制备具缓释碱性成纤维细胞生长因子功能的三维大孔支架.取SD大鼠股骨和胫骨骨髓,分离、培养骨髓间充质干细胞并移植于缓释碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架上进行三维培养,与无碱性成纤维细胞生长因子的支架对照.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.主要观察指标:用ELISA和扫描电镜观察支架的三维结构和缓释性能,用苏木精-伊红染色、MTT、细胞计数及扫描电镜方法观察缓释碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架对骨髓间充质干细胞生长状态和细胞活力的影响.结果:含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架有碱性成纤维细胞生长因子缓释性能,孔隙尺寸与不含碱性成纤维细胞生长因子的支架三维结构相比,差异无显著性意义(P＞0.05).含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架能提高在支架上立体培养的骨髓间充质干细胞存活率,促进骨髓间充质干细胞黏附、增殖和活力,与不含碱性成纤维细胞生长因子的支架相比,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架能缓释碱性成纤维细胞生长因子,有利于在支架上立体培养的骨髓间充质干细胞存活,为其在组织工程中的应用打下基础.     

龟板对脊髓损伤后大鼠功能和骨形态发生蛋白4表达的影响

目的　观察龟板对大鼠损伤脊髓骨形态发生蛋白 4 (BMP4 )表达和后肢功能恢复的影响。方法　应用改良Allen脊髓损伤模型 ,于术后 1、7、14、2 1、2 8d分别对大鼠进行Tarlov评分和斜板试验检查后肢功能。应用免疫组织化学技术检测BMP4的表达 ,观察龟板对脊髓损伤后BMP4的影响。结果　脊髓损伤后第 1d ,在两组受损伤脊髓灰质中都可见到BMP4的表达。第 14d时达到高峰 ,龟板组为 37 2 4± 5 73,损伤组 2 1 4 8± 6 83(P <0 0 5 )。龟板组可使损伤的脊髓BMP4持续高表达至术后第 2 8d ,而损伤组仅持续表达至术后 2 1d。增加的BMP4阳性细胞数与神经功能的改善平行。结论　龟板可减轻神经损伤症状和促进脊髓损伤后BMP4表达     

胰腺动脉的解剖学研究

<正> 用50具童尸的胰腺动脉塑料灌注腐蚀标本,调查了胰腺各动脉的起点、走行及分支特点。胰十二指肠上前动脉都是起自胃十二指肠动脉末端;胰十二指肠上后动脉88.0％起自胃十二指肠动脉,其它起自肝总动脉及其分支,胰十二指肠下动脉前、后支68.0％均起自肠系膜上动脉,两者共干占97.1％;胰背动脉最多起自脾动脉(占46％),14.0％     

激光穴位照射对冠心病人左心功能的影响及与针刺作用的比较

<正> 作者观察了36例激光照射内关穴后左心功能的变化情况。照射10分钟后,平均排血前时间(PEP)、等容收缩时间(ICT)、排血前时间/左室排血时间比(PEP/LVET)均较照射前减小,而LVET/ICT和心力系数均见增大,差异非常显著。36例中31例的收缩时间间期(STI)缩短,有效率为86.1％。还观察了10例针刺内关穴后左心功能的     

牛珀至宝微丸对内毒素休克肾组织诱生型一氧化氮合酶表达的影响

目的　探讨牛珀至宝微丸对内毒素休克肾组织iNOS表达的作用。方法　静脉注射内毒素 (LPS) 1 5mg/kg、腹腔注射D 氨基半乳糖糖 (D Ga1N) 10 0mg/kg造成内毒素休克模型 ,用牛珀至宝微丸干预处理 ,免疫组化方法检测诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)在肾组织内的表达。结果　牛珀至宝微丸可以使肾内iNOS表达减弱 ,肾损伤减轻。结论　牛珀至宝微丸可以减轻内毒素休克造成的肾损伤 ,这种保护作用可能是通过调节肾组织NOS表达而产生的     

脊髓损伤后水通道蛋白-4的时程变化

探讨脊髓损伤后水通道蛋白-4及其mRNA的变化规律,应用改良Allen脊髓损伤的模型,于术后1、3、7和14 d取脊髓组织,采用免疫组织化学和原位杂交技术检测AQP-4的表达。结果表明,AQP-4及其mRNA表达丰富的部位主要集中在损伤脊髓的后索、前索和后角,以小胶质细胞和少突胶质细胞为主。AQP-4及其mRNA表达在脊髓损伤后1 d开始增加,在脊髓损伤后3 d达到高峰。随后下降,对应的病理改变为细胞内水肿。本研究结果提示:胶质细胞AQP-4表达增强与早期损伤性脊髓水肿密切相关,它可能是形成早期细胞内水肿的重要因素之一。     

牛珀至宝微丸诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的研究

牛珀至宝微丸系由中医急症三宝之一的至宝丹化裁而来 ,前期临床研究表明对脑梗死急性期有较好疗效 ,实验研究可减轻脑缺血后神经损伤和病理改变 ,并增强神经干细胞增殖[1～ 3 ] 。本文研究了牛珀至宝微丸对大鼠骨髓间充质干细胞 (MSC)分化的影响。1　材料与方法1 .1　实验材料　纯种SD大鼠 2 0只 ,清洁二级 ,雌雄各半 ,月龄 4～ 7个月 ,体重 2 5 0～ 3 0 0 g,由广州中医药大学实验动物中心提供。牛珀至宝微丸 (1 g/支 )由江西中医学院热病研究室提供 ,主要药物为水牛角、玳瑁、麝香、琥珀、血竭、藏红花、大黄、石菖蒲等 ,将微丸溶于水 ,…     

电针内关对内毒素休克大鼠模型肺组织中一氧化氮合酶活性的影响

目的 观察电针内关(PC6)对内毒素休克时肺损伤的保护作用和肺一氧化氮合酶(NOS)表达的影响。方法 SD大鼠尾静脉注射内毒素(LPS)1．5mg／kg、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GaIN)100mg／kg造成内毒素休克模型，用电针PC6和氨基胍(AG)作对照干预处理，用免疫组化方法检测诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在肺组织内的表达。结果 电针PC6可以使肺内iNOS表达减弱，eNOS表达增强，肺损伤减轻。结论 电针PC6可以减轻内毒素休克造成的肺损伤，这种保护作用可能是通过调节肺组织NOS表达而产生的。     

龟甲提取物对骨髓间充质干细胞增殖过程中核受体的影响

【目的】观察龟甲(也称龟版或龟板)提取物对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖过程中核受体 (nuclear receptor,NR)表达的影响。【方法】采用密度梯度法分离大鼠MSC进行培养,经5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)标记和 CD44免疫组化染色鉴定后,分别以高、中、低剂量的龟甲提取物(3 333、333．3、33．33μg／mL)加入到体外培养的MSC中, 与龟甲提取物作用12、24、72、120 h后,采用免疫组化法和免疫荧光细胞化学法检测MSC的视黄酸受体(retinoic acid receptor-α,RARα)、维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、雌激素受体(estrogen reeepror,ER)、糖皮质激素受体 (glucocorticoid receptor,GR)、甲状腺激素受体(thyroid hormone receptor-α,TRα)和过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisome proliferator activated receptor-δ,PPARδ)的表达。【结果】高、中、低剂量龟甲提取物组的MSC的RARα、VDR表达阳性细胞均高于对照组(P<0．05或P<0．01),且呈剂量依赖性;作用24 h后RARα表达达峰值,作用72 h后VDR表达达峰值。未检测到ER、GR、PPARδ、TRα阳性反应细胞。【结论】视黄酸受体α和维生素D受体可能为龟甲提取物促MSC增殖的药理靶点。     

龟板促进Parkinson病大鼠黑质骨形态发生蛋白信号分子的表达

为了进一步探讨骨形态发生蛋白(BMP)/分化抑制因子(Id)通路在龟板抗PD大鼠多巴胺能神经元凋亡中的作用,本实验用6-羟基多巴胺(6-OHDA,0.2%)于大鼠左侧黑质致密带注射2μl造成PD模型,设立正常对照组、模型组和龟板组,用免疫组织化学染色方法观察PD大鼠中脑黑质骨形态发生蛋白IB受体(BMPR-IB),Smad8和Id1阳性细胞数目;用Western-blotting检测BMPR-IA、BMPR-IB、BMPR-Ⅱ、Smad1、Smad5、Smad8和Id1蛋白表达水平的变化。免疫组化染色显示龟板组PD大鼠中脑黑质BMPR-IB,Smad8和Id1的阳性细胞数明显多于模型组(P<0.05)。Western-blotting结果显示龟板组PD大鼠中脑黑质BM-PR-IB,Smad8和Id1的蛋白表达水平高于模型组,而BMPR-IA,BMPR-Ⅱ,Smad1和Smad5没有被检测出。以上结果表明龟板能上调6-OHDA诱导的PD大鼠中脑黑质BMPR-IB,Smad8和Id1的表达,这可能是其抗PD大鼠多巴胺能神经元凋亡的分子机制。