川芎嗪对家兔膜性肾炎时血小板功能的影响

本实验观察川芎嗪对家兔实验性膜性肾炎时血小板功能变化的影响，并探讨血小板功能异常与膜性肾炎病理变化的关系。结果表明：川芎嗪对本型肾炎的发展有较明显的治疗作用。其作用机制可能是通过降低血小板聚集性，抑制血小板ＴＸＡ２生成和活性，增加血小板ｃＡＭＰ含量，抑制血小板内容物的释放，调节血浆和肾组织ＴＸＡ２／ＰＧＩ２的平衡，从而稳定血小板而减轻肾小球基底膜的损伤，阻抑渗出，减轻蛋白尿，从而改善肾功能，减轻肾     

川芎嗪对膜性肾炎家兔血清和肾组织锌、铜、钙、镁含量的影响

川芎嗪对膜性肾炎家兔血清和肾组织锌、铜、钙、镁含量的影响朱陵群，黄启福，魏民，许文忠，蒋玉凤，李伯光，贾旭（北京中医药大学病理教研室北京１０００２９）关键词：膜性肾炎；川芎嗪；锌；铜；钙；镁锌、铜、钙、镁四种元素与肾脏的关系比较密切、，许多肾脏疾病可...     

常规制备家兔血清对人脐静脉内皮细胞-304的影响

目的：探讨中药血清药理学研究中常规制备的正常家兔血清浓度变化对培养体系中细胞的影响。方法：常规制备无污染、无溶血正常家兔血清，通过细胞形态学、台盼蓝染色活细胞计数、细胞毒四唑盐（MTT）比色试验、乳酸脱氢酶（LDH）及血管紧张素转换酶（ACE）等指标，观察5％、10％、20％、40％、60％和80％家兔血清对人脐静脉内皮细胞（VEC）－304的影响。结果：5％和10％两浓度组各指标均无变化，对VEC－304没有损伤作用。40％、60％和80％3个浓度组家兔血清浓度对细胞均有不同程度的损伤，而且随着浓度的增加，呈现出损伤加重的趋势，而20％的浓度从细胞形态、台盼蓝染色活细胞计数、MTT及ACE方面没有表现出明显的损伤作用，只有LDH含量差异有显著性（P＜0．01）。结论：常规制备的家兔血清在无污染和无溶血的情况下，其对细胞的作用浓度是有一定限制的，当达到40％或更高浓度时有较为明显的损伤。所以，在中药血清药理学研究中，应进行常规制备正常血清及含药血清的细胞毒实验，以尽量减少血清本身带给实验的影响。     

几种中药有效成分对大鼠系膜细胞IL-6 mRNA表达的影响

目的与方法:体外培养大鼠系膜细胞,以脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激后,分别加入补肾活血泄浊汤有效成分川芎嗪、大黄素、灵芝多糖,应用Northern杂交技术,观察上述几种中药有效成分对系膜细胞IL-6基因表达的影响,以探讨补肾活血泄浊汤治疗肾小球肾炎的机制。结果:川芎嗪、大黄素、灵芝多糖均可抑制IL-6基因的表达,以大黄素最为显著。结论: 结果提示补肾活血泄浊汤可能通过抑制IL-6基因的表达,从而减轻系膜细胞增生。     

淋巴细胞免疫表型检测及其统计学分析

目的：以标准化质控及正确的统计学分析方法确定淋巴细胞免疫表型参考值。方法：用Simultest^TM IMK-Lympho-cyte Kit荧光抗体对93例健康中国成人血液进行双标染色,以FACS Calibur流式细胞仪进行分析,SimulSET获取数据并分析结果。符合质控标准的数据汇总进行统计学分析,结果：CD3^ 、CD3^ CD4^ 、CD3^ CD8^ 细胞呈正态分布,CD3^－CD19^ 、CD3^－CD16^ 和/或CD56^ 细胞及CD3^ CD4^ ／CD3^ CD8^ 比值呈偏态分布。CD3^ 、CD3^ CD4^ 、CD3^ CD8^ 细胞以正态分布法确定95％可信区间参考值,分别为：49．28％－80．52％、25．29％－48．11％、11．93％－44．77％;CD3^－CD19^ 、CD3^－CD16^ 和／或CD56^ 细胞及CD3^ CD4^ ／CD3^ CD8^ 比值以百分位数法确定95％可信区间参数值,分别为：4．74％－19．84％、10．63％－42．86％,0．65－3．05。结论：建立正常参考值应综合考虑使用正态分布法与百分位数法。建议以标准化质控及正确的统计学分析方法确定参考值,使得同种族,不同地区的实验室应用相同试剂、相同仪器所获取的参考值具有良好的一致性。     

密度梯度离心法体外培养骨髓间充质干细胞的分化能力

背景：骨髓间充质干细胞具有多向分化能力,是目前极具潜力的种子细胞及基因治疗的靶细胞。目的：体外培养兔骨髓来源间充质干细胞,了解其生物学特性。方法：采用密度梯度离心法培养兔骨髓间充质干细胞,对细胞的形态及生长特性进行观察,应用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD29、CD34、CD44、CD45、CD166、HLA-DR表达,并进行相关生物学特性鉴定。结果与结论：密度梯度离心法能分离培养出纯度较高的骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表达CD29、CD44、CD166,不表达CD34、CD45、HLA-DR。在适当的条件下能够诱导分化成为成骨细胞、软骨细胞等。     

比较猪去氧胆酸与牛磺熊去氧胆抗神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的作用

目的：研究猪、熊胆粉的主要成分猪去氧胆酸及牛磺熊去氧胆对神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用。方法：实验于2000-07／2002-08在北京中医药大学中医内科学教育部重点实验室完成。培养人神经母细胞瘤细胞，以含连二亚硫酸钠的无糖Earle液模拟造成缺氧缺糖再给氧损伤，随机分为正常培养对照组，缺氧缺糖再给氧组，猪去氧胆酸3.125，1．563，0.781μmol／L浓度组，牛磺熊去氧胆3.125，1.563，0.781μmol／L浓度组。应用锥虫蓝染色测定细胞死亡率，应用比色法测定乳酸脱氢酶漏出率，四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞存活率，应用以Hoechst33342和碘化丙啶原位双染法荧光显微镜检测细胞坏死率和凋亡率。结果：①细胞死亡率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3．125，1563．0．781μmol／L浓度组细胞死亡率均明显低于缺氧缺糖再给氧组[(34．1&;#177;7.1)％，(32.8&;#177;8．2)％，(29.4&;#177;9．8)％，(27.7&;#177;6.9)％，(26.8&;#177;9．4)％，(26.2&;#177;11.1)％，(71.2&;#177;9.2)％，P&;lt;0.001]。②乳酸脱氢酶漏出率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3.125，1.563，0.781μmol／L浓度组乳酸脱氢酶漏出率均明显低于缺氧缺糖再给氧组[(46．6&;#177;5.6)％，(49.8&;#177;5.3)％，(47．0&;#177;4.0)％，(48.5&;#177;2.7)％，(44.1&;#177;4.3)％，(40．2&;#177;7.5)％，(66.4&;#177;7．6)％，P&;lt;0.001)。③细胞存活率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3．125，1．563，0.781μmol／L浓度组细胞存活率均明显高于缺氧缺糖再给氧组[(44.5&;#177;3.2)％，(45.3&;#177;2．0)％，(41.5&;#177;1．6)％，(41．6&;#177;2.4)％，(37.6&;#177;2．8)％，(40．1&;#177;18)％，(25.6&;#177;3．7)％，P(0.01～0.051。④细胞坏死率：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆3．125，1．563，0．781μmol／L浓度组细胞坏死率均明显低于缺氧缺糖再给氧组[(19.7&;#177;6.2)％，(23.9&;#177;7.0)％，(26.0&;#177;6.9)％，(21.8&;#177;5．6)％，(18.7&;#177;6.1)％，(25.4&;#177;5．8)％，(46.8&;#177;10.4)％，P&;lt;0.01]。⑤细胞凋亡率：猪去氧胆酸3．125，1．563μmol／L浓度组和牛磺熊去氧胆3．125，1.563，0.781μmol／L浓度组明显低于缺氧缺糖再给氧组[(7.4&;#177;2.7)％，(8.3&;#177;4.0)％，(6.9&;#177;3.8)％，(9.2&;#177;4.5)％，(8．7&;#177;3.6)％,(16．0&;#177;4.8)％，P&;lt;0．05]。结论：猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸均可明显地降低神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤时的细胞坏死率、凋亡率，显著提高细胞存活率，显著减少乳酸脱氢酶的漏出，表明猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸均具有显著的抗神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的作用，并且猪去氧胆酸与牛磺熊去氧胆酸之间没有显著差异。     

丹参素和川芎嗪对血管紧张素Ⅱ致心肌间质成纤维细胞增殖相关基因的影响

目的通过研究活血药对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致心肌间质成纤维细胞增殖相关基因的影响,从分子生物学角度探讨活血中药的有效组分丹参素和川芎嗪在AngⅡ诱导心肌肥大反应中的作用机制。方法以胶原Ⅰ和胶原Ⅲ基因表达为心肌间质指标,采用一步法,应用TRIZOL Reagent提取总RNA,然后用RT-PCR方法测定胶原Ⅰ和胶原Ⅲ的mRNA表达。结果AngⅡ可显著增加胶原ⅠmRNA的表达(P<0.01),而Losartan可明显抑制AngⅡ所诱导的胶原ⅠmRNA的表达(P<0.01),而丹参素也可减少胶原ⅠmRNA的表达(P<0.01),川芎嗪虽无统计学意义,但也有减少胶原ⅠmRNA的趋势。AngⅡ同时也增加胶原ⅢmRNA的表达,Losartan可明显抑制AngⅡ所诱导的胶原ⅢmRNA的表达(P<0.01),而丹参素和川芎嗪也可减少胶原ⅢmRNA的表达(P<0.05)。结论活血药的有效组分丹参素和川芎嗪可抑制AngⅡ致心肌间质成纤维细胞胶原Ⅰ和胶原Ⅲ基因表达的增加,具有防止心肌细胞肥大和抗心肌间质纤维化作用,从而防治心脏肥厚。     

人脐静脉内皮细胞黏附分子1表达与活血中药对单核-血管内皮细胞黏附性能的干预

目的:观察活血注射液对氧化型低密度脂蛋白损伤人脐静脉内皮细胞后血管细胞黏附分子1的表达及与人单核细胞黏附的影响,探讨中药复方制剂防治动脉粥样硬化的作用机制。方法:实验于2004-03/12在北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室完成。①实验材料:活血注射液由丹参、川芎、红花、赤芍组成,比例为丹参2,其余药物为1,含生药2000g/L。新生儿脐带(由中日友好医院妇产科提供,产妇及其家属知情同意,实验符合赫尔辛基宣言中的伦理学标准)。②实验过程:以培养人脐静脉内皮细胞作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入氧化型低密度脂蛋白制备细胞损伤模型。③实验评估:采用蛋白定量法检测人脐静脉内皮细胞与单核细胞的黏附率[将人脐静脉内皮细胞,用M199培养液(对照组)和含不同浓度(10,20,40ml/L)的活血注射液、氧化型低密度脂蛋白等实验因子的培养液(实验组)温育12,24h,再加含单核细胞的M199培养液];反转录聚合酶链反应检测人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的mRNA表达;用流式细胞仪测定人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的蛋白表达[(将人脐静脉内皮细胞,分为对照组、氧化型低密度脂蛋白组与氧化型低密度脂蛋白 活血注射液(终浓度分别为10,20,40ml/L)组,分别作用12,24h)。结果:①人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率在氧化型低密度脂蛋白作用12,24h后升高,均明显高于对照组(P<0.01),不同剂量活血注射液可明显抑制人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率,与氧化型低密度脂蛋白组相比差异均有显着性(P<0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。②氧化型低密度脂蛋白能明显上调人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的mRNA和蛋白表达水平,而不同剂量活血注射液能显著下调血管细胞黏附分子1的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01),与氧化型低密度脂蛋白组相比差异均有显着性(P<0.05,P<0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。结论:氧化型低密度脂蛋白促进内皮细胞的血管细胞黏附分子1表达,活血注射液能通过下调血管细胞黏附分子1的表达抑制单核-血管内皮细胞黏附,保护人内皮细胞免受氧化型低密度脂蛋白所致毒性损伤,从而减少或抑制动脉粥样硬化的形成。     

片仔癀对局灶性脑梗死大鼠炎性相关因子IL-6、IL-1β含量的影响

目的:观察片仔癀对局灶性脑梗死大鼠模型炎性相关因子IL-6、IL-1β含量的影响。方法:采用改良的Longa法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将SD大鼠随机分为7组:假手术组、模型组、片仔癀大、中、小剂量组、尼莫地平组和脑得生组。提前给药3天,造模后给药4天取材,采用ELISA法检测IL-6、IL-1β的含量。结果:模型组血清IL-6、IL-1β水平较假手术组显著升高(P<0.01);各给药组较模型组均有不同程度的降低,其中片仔癀大剂量组、脑得生组与尼莫地平组血清IL-6水平较模型组显著降低(P<0.01或P<0.05);各给药组血清IL-1β水平较模型组均显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论:片仔癀胶囊可以降低局灶性脑梗死后大鼠IL-1β、IL-6的含量,减轻脑梗塞后的炎症病理过程,从而对于神经功能起保护作用。