灯盏花素对高糖联合低氧诱导人视网膜色素上皮细胞分泌VEGF的影响及其机制

目的 通过观察1 μmol/L灯盏花素对高糖、低氧,及高糖联合低氧环境下人视网膜色素上皮(RPE)细胞株D407细胞分泌VEGF的影响,PKCδ的转位激活变化,以及构建PKCδ的小分子干扰载体,探讨灯盏花素对RPE细胞在糖尿病环境下分泌VEGF的调节作用及机制.方法 常规培养D407细胞,分为对照组(5.56 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25.0mmol/L葡萄糖),低氧组(200.0 μmol/L CoC12),联合组(25.0 mmol/L葡萄糖+200.μmol/L CoCl2),灯盏花素干预联合组(25.0 mmol/L葡萄糖加200 μmol/L CoCl2加灯盏花素1.0μmol/L),ELISA检测VEGF浓度,Western blot检测PKCδ的转位激活水平;构建PKCδ小分子干扰载体转染D407细胞后,Western blot检测PKCδ表达水平,ELISA检测VEGF分泌水平.结果 高糖组、低氧组、联合组分别与对照组比较,细胞分泌VEGF与PKCδ转位激活均增加(均P＜0.05),联合组增加最明显(P＜0.01);灯盏花素在1 μmol/L的浓度下可以显著降低高糖联合低氧诱导的VEGF分泌;灯盏花素可以抑制高糖联合低氧引起的PKCδ转位激活;所构建的sh3-PKCδ干扰载体可以降低PKCδ表达水平,干扰PKCδ后联合组的VEGF分泌水平降低(P＜0.05).结论 灯盏花素可以抑制高糖联合低氧诱导RPE细胞分泌VEGF,这可能与灯盏花素抑制了PKCδ转位激活有关,提示PKCδ可能是DR的一个药物靶点,灯盏花素具有作为DR治疗药物的前景.     

丹参素配伍川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的研究丹参素配伍川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法采用线栓法制备SD大鼠永久性大脑中动脉阻塞（permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO）模型。实验SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组、模型组、丹参素组（1.2 mg·kg-1）、川芎嗪组（60mg·kg-1）、丹参川芎嗪注射液组[（1.2mg丹参素＋60mg川芎嗪）kg-1]、尼莫地平注射液组（1.2mg·kg-1）。造模24 h后,测定神经行为学评分、脑组织含水量、脑梗塞体积、血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性和兴奋性氨基酸谷氨酸（Glu）含量,并进行组织病理学检查。结果与模型组相比,丹参素组、川芎嗪组、丹参川芎嗪注射液组大鼠的神经行为明显改善,脑含水量和脑梗塞体积显著降低（P〈0.05或0.01）,血清中SOD活性升高,Glu含量降低（P〈0.05或0.01）,HE染色显示组织间隙较小,病理损伤小于模型组。丹参川芎嗪注射液组保护作用最优,说明两单味药配伍使保护作用增强。结论丹参素配伍川芎嗪对大鼠局灶性脑缺血有协同的保护作用。     

糖尿病大鼠视网膜血流变化的彩色多普勒分析

[目的]采用彩色多普勒超声检查对糖尿病大鼠视网膜中央动脉(CRA)血流进行测定,探讨糖尿病早期视网膜病变的血流动力学的变化规律。[方法]链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导而成糖尿病大鼠模型共66只并随机分为4周、8周及12周3组。采用彩色多普勒超声检查测定大鼠右眼CRA的血流参数,包括峰值血流速度(PSV)、舒张期最低流速(EDV)、平均血流速度、阻力指数(RI)、搏动指数(PI)以及血管内径。检查结束后,立即摘除大鼠右眼,进行视网膜血管消化铺片的制作。[结果]光镜下,糖尿病大鼠的视网膜血管消化铺片在12周,始观察到视网膜的早期病变,表现为毛细血管周细胞的形态学变化。4周时,糖尿病大鼠CRA的各血流参数与对照组无显著性差异;8周时,糖尿病大鼠的CRA的PSV及EDV显著下降;12周时,糖尿病大鼠的CRA的流速均显著低于对照组,而RI、PI则显著增高。[结论]在糖尿病早期,视网膜出现血管病变之前,视网膜血流动力学已经出现异常改变,并进行性加重。视网膜血流减少与血液灌注不良是糖尿病视网膜病变的重要发病原因。     

ClC-3在糖尿病大鼠主动脉平滑肌、肾脏及脑组织中的表达及其变化

【目的】在糖尿病发展的不同时期探讨容积依赖性氯通道蛋白-3(ClC-3)的表达及其变化。【方法】用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病模型后,在第2、4、8、12和16周,用蛋白印记法检测主动脉、肾脏(皮质、髓质)及脑组织上ClC-3蛋白的表达。【结果】各组织上均检测到内源性ClC-3蛋白的表达,分子量在80KDa-110KDa之间;与对照组相比,糖尿病时大鼠主动脉平滑肌及脑组织上ClC-3蛋白的表达在第8周后显著性升高(P<0.05),肾髓质上ClC-3蛋白的表达显著性降低(P<0.05),而肾皮质上ClC-3蛋白的表达未见显著性差异。【结论】除肾皮质外,在糖尿病第8周开始,ClC-3蛋白在主动脉平滑肌及脑组织上表达显著性增加,而肾髓质表达显著性降低。     

灯盏花素对人脐静脉内皮细胞胞内Ca~(2+)水平的调控作用

目的探讨灯盏花素对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)胞内Ca2+水平([Ca2+]i)的调控作用。方法采用新一代Ca2+荧光探针Fluo-3/AM标记培养的HUVECs,激光共聚焦显微镜检测细胞胞内钙荧光信号,观察灯盏花素对培养的HUVECs胞内Ca2+水平的调控作用。结果在胞外有Ca2+或无Ca2+的情况下,灯盏花素均可引起[Ca2+]i的短暂性升高;灯盏花素的Ca2+释放作用与钙泵抑制剂CPA存在着交迭;灯盏花素能够抑制由KCl所引起的[Ca2+]i的升高;灯盏花素对胞内Ca2+池耗竭后胞外复Ca2+所引起的钙内流无明显阻断作用。结论灯盏花素可引起胞内Ca2+池的Ca2+释放,其释放的Ca2+来自CPA敏感的Ca2+池。灯盏花素也可抑制经电压依赖性Ca2+通道的Ca2+内流,对Ca2+池耗竭后引起的Ca2+内流通道无明显阻断作用。     

酪氨酸激酶抑制剂对cyclopiazoni cacid引起的大鼠主动脉血管环收缩效应的影响

目的　探讨酪氨酸激酶在Ca2 +池操纵性Ca2 +内流中的作用。方法　记录大鼠胸主动脉环收缩反应。结果　①不同剂量酪氨酸激酶抑制剂 genistein (1～ 10 0 μmol·L-1)和tyrphostin 2 5 (Tyr 2 5 ,1～ 30 μmol·L-1)均以浓度依赖性抑制cyclopiazonicacid (CPA)引起的平滑肌收缩平台期。Tyr 2 5的最大作用浓度为 10 μmol·L-1,抑制率为 42 %±11%。② 10 μmol·L-1Tyr 2 5和 1μmol·L-1nifedipine(Nif)对CPA引起电压依赖性Ca2 +通道 (VDCC)开放过程的抑制作用存在部分交叉。③ 1μmol·L-1Nif预处理阻断VDCC作用后 ,10 μmol·L-1Tyr 2 5只能部分阻断CPA引起的Ca2 +池操纵性Ca2 +通道 (SOCC)开放过程 ,再加入 6 0 μmol·L-1SK&F96 36 5可完全阻断SOCC的开放过程。结论　CPA引起平滑肌的收缩过程中 ,蛋白质酪氨酸激酶参与了开启VDCC和SOCC的信号转导过程     

糖尿病大鼠视网膜血流变化的彩色多普勒分析

【目的】采用彩色多普勒超声检查对糖尿病大鼠视网膜中央动脉(CRA)血流进行测定，探讨糖尿病早期视网膜病变的血流动力学的变化规律。【方法】链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导而成糖尿病大鼠模型共66只并随机分为4周、8周及12周3组。采用彩色多普勒超声检查测定大鼠右眼CRA的血流参数，包括峰值血流速度(PSV)、舒张期最低流速(EDV)、平均血流速度、阻力指数(RI)、搏动指数(PI)以及血管内径。检查结束后，立即摘除大鼠右眼，进行视网膜血管消化铺片的制作。【结果】光镜下，糖尿病大鼠的视网膜血管消化铺片在12周，始观察到视网膜的早期病变，表现为毛细血管周细胞的形态学变化。4周时，糖尿病大鼠CRA的各血流参数与对照组无显著性差异；8周时，糖尿病大鼠的CRA的PSV及EDV显著下降；12周时，糖尿病大鼠的CRA的流速均显著低于对照组，而RI、PI则显著增高。【结论】在糖尿病早期，视网膜出现血管病变之前，视网膜血流动力学已经出现异常改变，并进行性加重。视网膜血流减少与血液灌注不良是糖尿病视网膜病变的重要发病原因。     

人参皂苷Re对人脐静脉内皮细胞 PARP-1表达的抑制作用

目的：筛选对多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1（PARP-1）有潜在抑制作用的中药单体,研究中药单体对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）PARP-1表达的抑制作用。方法在中国天然产物数据库中通过计算机虚拟筛选初步得到对PARP-1有潜在抑制作用的6种中药单体,对加入中药单体的细胞分设高、低剂量组,浓度分别为1×10-4、1×10-6 mol/L,另将加入3-氨基苯甲酰胺（3-AB）的细胞作为阳性对照组、只加2×10-4 mol/L ONOO -的细胞作为模型组。Western blotting检测PARP-1表达。若待筛药物对PARP-1表达有抑制作用,则以1×10-4～1×10-8 mol/L的药物进行浓度依赖性实验。结果1×10-4、1×10-6 mol/L人参皂苷Re与1×10-4 mol/L人参皂苷Rb1对ONOO -引起的PARP-1激活有抑制作用。1×10-4～1×10-8 mol/L人参皂苷Re对 PARP-1的表达有明显的抑制作用,且呈现出剂量依赖性（P＜0．05）。结论人参皂甙Re对HUVEC上ONOO -激活的PARP-1蛋白表达有抑制作用,对ONOO -引起的细胞损伤具有保护作用,其效应呈现出剂量依赖性。     

糖尿病视网膜病变前期 NOS亚型的蛋白表达及其在血流变化中作用的实验研究

[目的]探讨在糖尿病大鼠视网膜病变 (DR)前期,3种亚型一氧化氮合酶 NOS在视网膜不同组织细胞中蛋白表达的变化,及其与视网膜血流变化的关系.[方法] 将 Wistar大鼠随机分成正常对照组与链脲佐菌素 (STZ)腹腔注射诱导的糖尿病组各 10只,采用彩色多谱勒对大鼠视网膜中央动脉 (CRA)进行血流参数的测量,运用免疫组织化学技术观察视网膜 eNOS、 iNOS、 nNOS蛋白表达的变化.[结果] 8周糖尿病大鼠视网膜尚未出现病变,但血流参数已显著异常,表现为糖尿病组大鼠 CRA的血流速度较对照组显著降低 (P< 0.05),而阻力指数则显著增高 (P< 0.05),搏动指数高于对照组,但尚未有显著意义. 3种亚型 NOS在糖尿病与正常对照组视网膜中表达部位一致;但与正常对照组比较,iNOS免疫反应的强度在糖尿病大鼠视网膜中的内核层显著增强,而 eNOS与 nNOS的免疫反应强度则未见显著变化.[结论]在 DR前期,糖尿病大鼠视网膜已开始出现血流灌注不良,此时 NOS亚型中 iNOS在视网膜中的表达上调可能与之相关.     

A comparison between 5-hydroxytryptamine and carbachol on fundic smooth muscle strips isolated from streptozocin-induced diabetic rats

AIM: To study the 5-HT responses in stomach fundus from Steptozotocin (STZ)-induced diabetic rats in comparison with carbachal (Car) and some antagonists. METHODS: Male, 8-wk old Wistar rats were injected STZ (60mg·kg~(-1), iv) were to induce diabetes. After injection, the stomach fundus was dissected and Ca~(2 ) contraction