17D_3pZP单克隆抗体对卵透明带及卵巢等组织的免疫学反应

目的: 观察单克隆抗体17D3pZP对猪卵透明带,人卵透明带及人卵巢等组织的免疫学反应。方法: ABC酶免疫组织化学技术。结果: 17D3pZP单克隆抗体能特异性识别猪卵透明带及人卵透明带抗原,而与人卵巢及其他各重要脏器组织无反应。结论: 17D3pZP单克隆抗体能识别卵透明带抗原,而与机体其他组织抗原无交叉反应。有望通过它进一步提取并纯化相应靶抗原,为制备卵透明带免疫避孕疫苗奠定基础。     

BA-ELISA检测透明带抗体的研究

本文用BA-ELISA定量方法检测透明带抗体,其敏感性是卵透明带间接免疫荧光试验的2,000～4,000倍,足常规ELISA的8倍。竞争抑制试验证明BA-ELISA检测透明带抗体具有特异性。抗血清稀释度与A490 OD值间呈S形曲线,有助于直接以OD值作为定量指标的研究。     

反复自然流产免疫病因分型及意义

目的 :探讨反复自然流产 (RSA)免疫病因分型及其临床意义。方法 :对 2 0 4例RSA患者进行封闭抗体、抗独特型抗体、细胞毒指数、透明带抗体、抗磷脂抗体、血型抗体进行检测及分型。结果 :在 2 0 4例RSA患者中 ,Ⅰ型患者 (母 胎免疫识别低下型 )占 5 4 90 % ;Ⅱ型患者 (母 胎免疫识别过度型 )占 5 88% ;Ⅲ型患者 (母 胎免疫识别紊乱型 )占 30 88% ;Ⅳ型患者 (不明原因 ) 8 33%。Ⅰ型、Ⅲ型患者的封闭抗体及其抗独特型抗体均呈明显缺乏趋势 ,且占病人总数的 85 8%。与Ⅰ型和Ⅳ型比较 ,Ⅱ型和Ⅲ型病人以自身抗体及同种血型抗体异常增高为其免疫学特征。结论 :反复自然流产免疫病因分型对选择针对性诊疗方案具有临床实际意义 ,即Ⅰ型和Ⅲ型患者可选择淋巴细胞免疫治疗 ,以增强母 胎免疫识别 ;Ⅱ型患者则应选择免疫抑制治疗方案 ,以缓解自身抗体及同种抗体对胚胎抗原的损伤 ;Ⅲ型患者还可选择淋巴细胞免疫加免疫抑制治疗方案 ,从而有助于提高反复自然流产的临床疗效     

实时超声对输尿管结石的诊断

输尿管结石在我国比较常见,其诊断,以往多依靠X线摄片及尿路造影等检查,本文在我院近5年来应用超声诊断189例输尿管结石的基础上,对其中有完整资料的78例,就输尿管结石的声像图特征,临床应用价值等分析如下.     

脱氢表雄酮对鼠成骨细胞及CD4+T细胞协同刺激分子表达的影响

目的探讨脱氢表雄酮（DHEA）对成骨细胞（osteoblasts，OB）及CD4^＋T细胞表达协同刺激分子的调控作用。方法颅骨酶解法培养鼠OB，体外模拟雌激素撤退；免疫磁珠细胞分选（rnagnetic cell soaing，MACS）法分离CD4^＋T细胞；将OB或CD4^＋T细胞分为对照组、E2及DHEA处理组，并以LPS刺激；以流式细胞术分析OB表面CD80、CD86以及CD4^＋T细胞表面CD28、CTLA-4的表达。结果经E2及DHEA处理后，OB表达CD80、CD86显著增加（P〈0．05，P〈0．01）；CSA可降低对照组及DHEA处理组OBCDS0、CD86的表达（P〈0．01）。除DHEA组CD28^＋T细胞百分比增加外（P〈0．05），其余各组CD4^＋T细胞CD28和CTLA-4的表达无显著改变（P〉0．05）。结论DHEA可上调鼠OB协同刺激分子CD80、CD86表达，该作用可被CsA阻滞；DHEA还上调CD4^＋T细胞CD28的表达，提示可改善骨．免疫调节网络。     

分子佐剂C3d3增强hCGβ3蛋白疫苗的体液免疫效应

目的：通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法：采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ，在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALB／c与C57BL／6小鼠进行免疫，共免疫两次，间隔4周，ELISA测定血清中的抗体滴度，比较各组的免疫效果。结果：无论是BALB／c小鼠还是C57BL／6小鼠，hCGβ-C3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组。在BALB／c小鼠，初次和再次免疫结果显示，C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍。C57BL／6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALB／c小鼠，但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1259倍。结论：通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性，在个性差异很大的不同品系小鼠，C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力。     

hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达

目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3　cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的CMV启动子下游,以产生pcDNA3-hCGβ-C3d3。将此融合质粒转染瞬时表达系统 COS-7细胞表达相应产物。其无血清培养上清液用免疫亲和层析法纯化重组蛋白。Raji细胞免疫细胞化学技术鉴定表达产物准确性。结果:真核细胞瞬时表达系统 COS-7细胞经转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒后,可分泌hCGβ重组蛋白。1.0×105个 COS-7细胞转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,经72h培养后,可产生152ng的hCGβ重组蛋白,且表达量随时间延长而增高。在有血清培养基中的分泌量明显高于无血清培养基。同时,用Raji细胞免疫细胞化学分析表达产物显示,纯化的表达产物既有C3d结合受体活性,亦有hCGβ抗原性。结论:利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接,构建了pc-DNA3-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒,为提高hCGDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。     

环孢素A诱导妊娠失败模型孕鼠外周母-胎免疫耐受

目的探讨环孢素A(cyclosporin A,CsA)能否诱导妊娠失败模型CBA/J×DBA/2孕鼠外周母-胎免疫耐受。方法分别使用CBA/J×DBA/2及CBA/J×BALB/c作为妊娠失败模型和正常妊娠模型,CBA/J小鼠于妊娠第4天(着床期)腹腔注射不同剂量(0、5、10、15mg/kg)CsA,妊娠第9天和第14天时分别采用单向混合淋巴细胞反应分析孕鼠外周脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力,并用RT-PCR分析细胞IL-2mRNA含量以研究脾脏细胞母-胎免疫耐受状态;妊娠第14天观察两组的胚胎吸收率。结果(1)于妊娠第4天腹腔注射5、10、15mg/kg CsA后,妊娠失败模型胚胎吸收率分别下降至2.86%、5.75%及11.24%,明显低于对照组(P<0.001,P<0.01,P<0.01);而对妊娠成功模型胚胎吸收率无显著性影响(P>0.05)。(2)混合淋巴细胞反应研究显示,于妊娠第4天腹腔注射CsA,可使妊娠第9、14天的妊娠失败模型孕鼠外周脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力显著下降(P均<0.01);RT-PCR分析显示,孕鼠脾细胞受父系抗原刺激后IL-2转录显著下降(P均<0.01)。结论于孕早期腹腔注射CsA可诱导妊娠失败模型孕鼠外周免疫细胞对父系抗原的特异性免疫耐受,从而使自然流产模型孕鼠的妊娠结局达到正常妊娠水平,提示CsA可能成为治疗妊娠失败的有效药物。     

过继转输胚胎抗原耐受T细胞对宿主母-胎界面细胞因子表达的影响

目的探讨过继转输胚胎抗原耐受性T、B细胞对宿主孕鼠妊娠预后及母胎界面TH1TH2型细胞因子表达的影响。方法♀CBAJ×♂DBA2为自然流产模型,于孕4d(着床期)分别腹腔注射大鼠抗小鼠CD80和CD86McAb或大鼠同型IgG。于孕9d,分选脾脏T细胞和B细胞,并过继转输至孕4d的自然流产模型♀CBAJ×♂DBA2孕鼠,孕第14天测定宿主母胎界面组织体外培养上清液中TH1TH2型细胞因子(IL4、IL10、TNFα、IFNγ)水平,并比较各组宿主孕鼠胚胎吸收率。结果转输胚胎抗原耐受T细胞和转输正常妊娠模型孕鼠的T细胞均使宿主孕鼠母胎界面IL4和IL10表达显著增加,而IFNγ和TNFα表达则显著下降,且胚胎吸收率也显著下降(P<0.05)。结论于孕早期过继转输胚胎抗原耐受T细胞和正常妊娠模型孕鼠的T细胞可通过调节宿主孕鼠母胎界面TH1TH2型细胞因子的平衡,从而诱导母胎免疫耐受。     

补肾宁心方对去势高脂血症家兔主动脉血管细胞粘附分子1表达的调节

为了探讨补肾宁心方对去势雌兔动脉粥样硬化形成的影响及其可能的机制，将26只3月龄新西兰雌兔随机分为正常对照组、假手术组、去势对照组和治疗组(卵巢切除并灌以补肾宁心中药复方)，除正常对照组外均于术后2周给予高脂饮食，治疗组同时灌胃给药，连续3个月。12周末测定血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平；取主动脉行组织形态学及扫描电镜观察，并应用免疫组织化学方法检测主动脉血管细胞粘附分子1的蛋白表达。结果发现，与去势对照组比较，补肾宁心方对血脂变化无明显影响，但能明显降低主动脉粥样斑块面积与动脉内膜比值，降低内膜中膜厚度比，减轻主动脉病理损害，抑制主动脉血管细胞粘附分子1的蛋白表达。结果提示，补肾宁心方可能通过抑制主动脉血管细胞粘附分子1的表达从而阻止动脉粥样硬化的发生发展。