病毒颗粒中氢氘置换的证实

已知重水(D2O)能增加某些病毒的热稳定性，但其机理不清。用基质辅助气体同位素质谱法，研究了日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)和甲型肝炎病毒(hepatitis A virus，HAV)用D2O处理后，测定病毒及其RNA结构中的氘氢比值(D／H)，以δDSMOW表示。结果说明，与正常病毒相比，上述D2O处理后的病毒样品中δDSMDW值明显升高，其升高值与病毒样品的加入量呈良好的线性关系。实验还指出，D2O处理后的病毒δDSMOW值的升高与其热稳定性的升高是相关联的。实验结果证明，D2O处理导致病毒及其RNA结构中发生氢氘置换，氢氘置换可导致病毒生物学性状(热稳定性增加)的表型改变。     

用人腺病毒作表达载体

以病毒为载体表达外源基因是发展重组活疫苗的一个有效的重要途径.人腺病毒(Ad)由于其本身的特性也已发展成为一种新的极有发展前途和应用前景的重组疫苗载体.本文对人Ad表达载体的构建和应用加以阐述.     

抗狂犬病毒核蛋白荧光标记抗体的制备和初步鉴定

目的 建立抗狂犬病毒（ＲＶ）核蛋白（ＮＰ）荧光标记抗体的制备方法并进行初步鉴定。方法 采用两种方法制备该试剂：１．从ＲＶ感染的细胞中提纯ＲＶ核糖核蛋白（ＲＮＰ）作抗原,免疫动物然后制备荧光标记抗体;２．直接用本室原制备的４株抗ＲＶ ＮＰ的单克隆抗体混合进行标记。结果 制备的试剂有较高的敏感性和特异性,经与法国巴斯德诊断用品公司的相应产品进行比较,所得结果的符合率为１００％。特别是用后一种方法制备的     

构建以痘苗病毒为载体的人用狂犬病基因工程疫苗株的研究

构建了一个可以适于人用的表达狂犬病病毒糖蛋白的重组痘菌病毒疫苗株。构建的方法是：先构建一个表达β－半乳糖苷酶基因（简称ｌａｃ基因）的不经传代细胞的重组痘苗病毒，以此为亲本株，再与载体ＰＴｋ１１ｋＲＧ（狂犬病病毒糖蛋白基因插在胸苷激酶Ｔｋ区，并置于痘苗病毒１１ｋ启动子下游，Ｔｋ侧冀序列和启动子均来自痘苗病毒天坛株），在鸡胚细胞中同源重组，以蓝色空斑中挑白斑的方法筛选阳性重组病毒，用免疫荧光方法和ＡＰＡＡＰ免疫酶法证明，该病毒能较好地表达狂犬病病毒糖蛋白。动物实验表明，该病毒能较好地诱导小鼠和狗的抗狂犬病毒的中和抗体，并对狂犬病病毒ＣＶＳ株和ＳＲＶ（街毒）的攻击有保护作用。     

包裹破伤风类毒素蛋白的聚乳酸及聚乳酸/聚乙醇酸共聚微球的制备和体外释放特性

 目的探索包裹破伤风类毒素蛋白（TT）的聚乳酸(PLA）及聚乳酸/聚乙醇酸(PLG)共聚微球的制备及其体外释放特性。方法采用溶剂蒸发技术,先以一种小分子量生物染料 伊文思蓝为包裹物模型,通过显微镜观察和比色分析探索微球的制备特性和最佳条件。在此基础上制备包裹TT的PLA和 PLG微球。结果微球的制备过程中存在着内水相蛋白朝外水相的流失,当聚合物浓度加大到25%～30%时可使蛋白流失大大减少。包裹蛋白在微球中的分布与微球粒径的重量分布成正相关关系;随着微球粒径的增大,微球所载蛋白的体外释放高峰期延迟。结论通过本模型条件可制备外观高质量的微球,并可通过制备不同粒径大小的微球来控制包裹蛋白在体外和体内的释放高峰期。     

狂犬病毒分子生物学和各类疫苗的研究进展

<正> 狂犬病是由狂犬病毒引起的世界性人兽共患性疾病。我国发病率高,一旦发病,100％死亡。目前控制该病只有依赖疫苗。由于该病潜伏期长,疫苗既可用于预防,亦可用于被带狂犬病毒的动物(中国以犬为主)咬伤后的防制发病。 一、狂犬病毒的分子生物学 (一)病毒的形态、结构和基因:狂犬病毒(RabiesVirus,RV)属弹状病毒科(Rbaldo Viridae),LyssaVirus 属。病毒形态似子弹,长约 180nm,直径为75nm,其头端为半球形,末端为平行。病毒外壳为一紧密完整的脂蛋白双层包膜,表面嵌有 1000多个     

用单克隆抗体和遗传方法鉴别人用甲型流感疫苗高产重组株

本文介绍用单克隆抗体和RNA杂交两种方法鉴别7株人用流感灭活疫苗高产重组株血凝素的差异。     

缺失IFN-γ受体基因的天坛株减毒重组痘苗病毒载体的构建

目的 构建缺失WN-7受体基因的天坛株重组痘苗病毒载体，初步研究其毒力的改变及B8R缺失区插入外源基因表达的稳定性。为研制表达多价抗原重组痘苗病毒载体、提高痘苗病毒载体安全性进行探索。方法 采用PCR技术、多步克隆构建带有天坛株痘苗病毒B8R基因外左右侧同源臂、痘苗病毒启动子序列pE/L、p7．5及下游LacZ序列的转移质粒pSKB8R、pSKB8RLacZ。将痘苗病毒VTT与转移质粒pSKB8RLacZ共转染CEF细胞进行同源重组，经蓝白斑筛选、连续单斑纯化、鉴定获得B8R基因(IFN-7受体基因同源序列)缺失为LacZ所取代的重组病毒vIT△B8RLaeZ。结果经酶切、测序鉴定转移质粒构建正确，核酸水平、外源基因生物学活性检测表明VIT△B8RLacZ在CEF细胞连续培养传代中B8R基因的缺失和插入外源基因LacZ表达均很稳定。VTTΔB8RLacZ在细胞中的繁殖复制水平与VTT相当。兔皮内毒力实验表明B8R基因缺失显著降低VTT的毒力。结论 本研究表明B8R基因缺失可显著降低痘苗病毒天坛株的毒力并可作为外源基因的插入区，缺失B8R基因的重组痘苗病毒可能作为新一代的表达多价抗原痘苗病毒载体。     

狂犬病毒糖蛋白及核蛋白在非复制型痘苗病毒天坛 …

目的 提高重组痘苗病毒狂犬疫苗的有效性和安全性。方法 利用ＴＫ区表达狂犬病毒糖蛋白（ＲＧ）的重组痘苗病毒作为亲本株，通过两步同源重组，删除痘苗病毒基因组ＣＫ片段间与毒力和宿主范围相关的核酸片段，同时将狂犬病毒核蛋白（ＲＮ）基因插入Ｃ－Ｋ片段之间，获得了含有ＲＧ基因和ＲＮ基因的非复制型重组痘苗病毒ＶＴＫＲＧ△ＣＫＬａｃＺＲＮ。结果 经ＰＣＲ鉴定，ＲＮ基因已插入ＣＫ区；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示     

细菌重组蛋白的表达及分离纯化

细菌是外源基因表达的重要载体之一,重组蛋白的分离和纯化是基因工程后处理的关键步骤。本文概述了重组蛋白在细菌中的不同表达方式及其对重组蛋白分离纯化的影响,和近年来重组蛋白分离纯化方法的研究进展和存在的问题。