膝骨性关节炎不同中医证型滑液中蛋白多糖和透明质酸含量的变化

目的:观察骨关节炎(OA)不同中医证型滑液中关节软骨基质蛋白多糖(PG)和透明质酸(HA)的变化为中医辨证分型提供参考依据。方法:60例膝骨性关节炎患者包括瘀血阻络(C组)、肾虚寒凝(D组)、肾虚髓亏(B组)3种证型各20例;10名正常人(A组)。收集以上患者和正常人的关节滑液,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法和放射免疫技术分别检测滑液样本中蛋白多糖和透明质酸的水平。结果:OA患者滑液中PG水平显著高于正常对照组,HA含量显著低于正常对照组(P<0·05)。C组滑液中PG水平最高,HA比另两组(B、D组)较高。D组PG水平次之,HA也降低。而在B组PG和HA均明显降低。结论:膝OA患者滑液中PG与HA含量在不同证型之间有差异,可将滑液中PG和HA含量作为中医分型的参考指标。     

白脉软膏含药血浆对大鼠退变滑膜细胞和软骨细胞共培养体系的作用及机制研究

【目的】观察白脉软膏含药血浆对大鼠退变滑膜细胞和软骨细胞共培养体系的干预作用,并从"滑膜—软骨"轴角度探讨骨关节炎(OA)的发病机制。【方法】取新生SD大鼠膝关节滑膜,经消化酶消化后获得原代滑膜细胞,取第1代(P1)细胞进行实验。实验设空白组、模型组、西药组、白脉组。模型组加入脂多糖(LPS)进行诱导,西药组与白脉组在模型组LPS诱导的基础上分别加入扶他林软膏、白脉软膏含药血浆干预。LPS诱导24 h后观察滑膜细胞形态变化,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测滑膜细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。此后,各组皆与正常软骨细胞进行共培养。共培养24 h后观察软骨细胞形态,实时定量PCR(qPCR)检测软骨细胞基质金属蛋白酶3(MMP3)、带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶4(ADAMTS4)、TNF-α、性别决定区Y框蛋白9(Sox9)mRNA表达情况,Westernblot法检测Ⅱ型胶原蛋白(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κBp65)表达情况。【结果】LPS诱导后滑膜细胞形态由原来的多角形变成长梭形。ELISA结果显示,模型组滑膜细胞上清中IL-1β、TNF-α含量较空白组升高(P 0.05),而白脉组IL-1β、TNF-α含量较模型组下降。软骨细胞与退变滑膜细胞培养24 h后由原来的多角形变为长梭形。qPCR结果显示:与空白组比较,模型组软骨细胞MMP3、ADAMTS4、TNF-αmRNA表达升高(P 0.05),Sox9mRNA表达降低(P 0.05);与模型组比较,白脉组软骨细胞MMP3、TNF-α、ADAMTS4 mRNA表达明显降低(P 0.05),Sox9 mRNA表达水平升高(P 0.05)。Western blot结果显示:与空白组比较,模型组软骨细胞MMP13、p-NF-κBp65表达升高(P 0.05),COL2A1表达明显降低(P 0.05);与模型组比较,白脉组软骨细胞MMP13、p-NF-κBp65表达降低(P 0.05),COL2A1表达升高(P 0.05)。【结论】退变滑膜细胞可导致软骨细胞退变并促进骨关节炎发展,白脉软膏对此病理过程有明显的抑制作用。     

胎牛血清和大鼠血清对体外软骨组织构建的影响

目的观察胎牛血清和大鼠血清对体外构建大鼠软骨组织的效应,为组织工程软骨筛选出合适的培养方法。方法取大鼠原代软骨细胞,离心后,培养箱中放置48 h,细胞团块会自发形成软骨小结。分为胎牛血清组和大鼠血清组。每隔一天换一次液,连续培养2周。取出软骨组织,称量重量,固定于4%多聚甲醛,经过脱水、石蜡包埋、切片后,经HE(苏木素-伊红)染色,甲苯胺蓝和藏红-固绿染色及细胞免疫荧光检测Ⅱ型胶原(Col2a1)、I型胶原(Col1a1)的表达。结果胎牛血清组的软骨组织重量比大鼠血清组的软骨组织明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。HE染色结果表明:大鼠血清组的组织形态呈纤维样结构,而胎牛血清组组织形态呈典型的软骨结构。胎牛血清组的组织甲苯胺蓝和藏红染色明显,而大鼠血清组的组织甲苯胺蓝淡染,固绿深染,提示软骨组织退变或非软骨组织。进一步免疫荧光检测软骨标志基因Ⅱ型胶原和Ⅰ型胶原,胎牛血清组Ⅱ型胶原高表达,而大鼠血清组低表达,Ⅰ型胶原在两组的表达和Ⅱ型的表达呈相反的结果,即在大鼠血清组高表达,在胎牛血清组低表达。结论胎牛血清可促进体外软骨组织的形成,而大鼠血清抑制了软骨组织形成。胎牛血清适合体外构建大鼠软骨组织。     

补肾、柔肝中药对软骨细胞生物功能的影响

目的:比较补肾方和柔肝方对体外软骨细胞生物学特征的影响.方法:用补肾方和柔肝方含药血清培养软骨细胞,以MTT法检测细胞增殖能力并确定相关血清药理学的主要参数,综合运用组织细胞学、组织化学和分子生物学等方法观察比较含药血清对软骨细胞生物学性能的影响.结果:补肾方和柔肝方均能促进体外软骨细胞的增殖;促进细胞外基质胶原和蛋白多糖的合成;对软骨细胞分泌的PGE2无抑制作用,同时也不诱导软骨细胞异常分泌MMP-3.结论:补肾方和柔肝方对体外软骨细胞生物学特征的影响具有相似的作用,即促进软骨细胞的增殖和基质的合成.因此,为中医药以调摄肝肾为治疗原则防治退行性骨关节炎提供了细胞学依据.     

一种获取具有旺盛增殖力的大鼠软骨细胞培养方法

目的探讨大鼠软骨细胞的培养方法。方法采用单纯胶原酶消化配合吹打法,从新生(出生24 h内)SD大鼠的膝、肩、肘关节和股骨头处的软骨中提取软骨细胞进行原代培养,在显微镜下观察并对甲苯胺蓝染色、阿利新蓝染色、II型胶原免疫荧光染色和增殖细胞核抗原免疫荧光染色进行鉴定;针对不同批次的实验观察结果,进行一致性检验。结果原代细胞培养第3天即可传代,前3代细胞表型稳定,增殖力良好;第4代开始出现细胞分化的迹象。不同批次实验的一致性检验结果稳定。结论采用单纯胶原酶消化配合吹打法能够在短时间内获取大量纯化且增值能力旺盛的软骨细胞。     

女性头部内伤(脑震荡)恢复期的证型特点及中医辨证治疗的前瞻性队列研究

目的:观察女性头部内伤(脑震荡)恢复期的证型特点,并采用前瞻性队列研究观察中医辩证治疗的效果。方法:对68例女性脑震荡恢复期患者的证型表现进行辨证分型,根据辨证后的证型采用对证中药方治疗1～3月。对所用68张处方的用药进行收集,并归纳分析在方剂中使用频率最高的前6位药物;根据中医病症诊断疗效标准进行疗效评价,采用SF-36简化量表进行中医治疗前后的生活质量评估。结果:根据本组患者的临床表现,主要分为气滞血瘀、肝气不舒,肝血不足、心神不安和脑气震动、脑肾失济三个证型;经治疗1～3个月后统计疗效,结果显示总有效率81%;治疗后各证型组SF-36——躯体健康和精神健康评分评分均有不同程度改善。结论:女性头部内伤(脑震荡)恢复期的证型以气滞血瘀、肝气不舒证多见,中医辨证治疗可有效缓解症状,并对生活质量状况有改善。     

退肿通痹汤治疗膝骨关节炎积液性滑膜炎(脾失健运证)的疗效观察

目的:观察退肿通痹汤治疗膝骨关节炎积液性滑膜炎的临床疗效.方法:选取2019年6月至2020年6月就诊的膝骨关节炎积液性滑膜炎(脾失健运证)患者66例,采用随机信封法分为治疗组和对照组(各33例).对照组口服双氯芬酸钠胶囊,治疗组口服退肿通痹汤.两组均连续治疗2周后观察临床疗效.结果:两组患者治疗前膝关节周径和积液转移...     

仲景通腑导滞三方创伤后治验

<正>严重多发性创伤,是指在同一致伤因素作用下,机体同时或相继有两个以上的解剖部位或脏器受到严重损伤,即使这些创伤单独存在,也属于严重创伤者[1]。该病症具有伤情重、死亡率高、并发症多、卧床时间长、波及多个器官系统、治疗时间长且复杂等特点。笔者在长期从事中西医结合骨伤科临床工作     

补肾方、柔肝方与化痰方对膝骨关节炎滑膜细胞增殖及COMP表达的影响

目的：探讨补肾方、柔肝方和化痰方对膝骨关节炎滑膜细胞增殖及COMP表达的影响。方法：补肾方、柔肝方和化痰方含药血清培养早期和晚期滑膜细胞，MTS／PMS法测定OD值，hCOMP定量试剂盒测定COMP含量。结果：通过MTS／PMS法观察确定补肾方、柔肝方和化痰方含药血清培养滑膜细胞观察点在第5～7天；三方培养滑膜细胞OD值低于正常血清对照组（P≤0．05）。结论：补肾方、柔肝方与化痰方可以抑制体外培养早期和晚期膝骨关节炎患者滑膜细胞增殖，柔肝方可以降低体外培养滑膜细胞分泌液中COMP的浓度。     

T淋巴细胞在骨关节炎中作用的研究进展

骨关节炎是以关节软骨破坏、滑膜炎症和骨改建为特征的慢性肌肉骨骼疾病.T淋巴细胞在胸腺内发育成熟后进入血液,在外周淋巴器官中接受抗原呈递后激活并增殖为不同的效应T淋巴细胞,导致辅助性T细胞(Th)1/Th2、Th17/调节性T细胞比例失衡,并通过释放不同的细胞因子,激活相关细胞凋亡通路,造成软骨丢失、降解以及软骨下骨骨重...