人博卡病毒病毒样颗粒研究进展

人博卡病毒（Human Bocavirus，HBoV）是 Allander 等2005年在呼吸道标本大量筛查中发现的一种新病毒，迄今为止 HBoV 共有4个基因型，分别命名为 HBoV1～4。目前HBoV 的致病机制尚未明确，研究结果 HBoV1主要存在于呼吸道分泌物中，引起婴幼儿呼吸道感染；HBoV2-4主要是在粪便标本中被检出，其中 HBoV2及 HBoV3被证实与急性胃肠炎有关，又以 HBoV2的检出率最高。     

shRNA沉默EIF4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞VEGF-C表达的影响

目的：探讨shRNA沉默EIF4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞EIF4E及VEGF-C基因表达的影响。方法： 制备针对EIF4E的三种小干扰RNA （small interfering RNA, siRNA）,分别是siRNA1、 siRNA2、 siRNA3, 筛选沉默最有效的siRNA, 据此设计短发夹RNA （short hairpin RNA, shRNA） 寡核苷酸链, 与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo克隆连接, 构建pGPU6/GFP/Neo-EIF4E重组质粒, 经酶切鉴定后利用脂质体LipofectamineTM2000将鉴定正确的重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞, 荧光显微镜观察转染效率, RT-PCR、 Western blot、 免疫细胞化学法检测EIF4E及VEGF-C mRNA和蛋白表达情况。结果： RT-PCR结果显示siR?NA1、 siRNA2、 siRNA3对乳腺癌MDA-MB-231细胞EIF4E基因表达均有抑制作用, 与空白对照组、 阴性对照组、 脂质体组比较差异显著 （P<0.05）, 尤以siRNA3抑制率最高达71.2%。利用针对siRNA3合成的shRNA与质粒载体pGPU6/GFP/Neo克隆连接构建的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E, 酶切鉴定表明构建成功, 并稳定转染MDA-MB-231细胞, 平均转染效率为80%。RT-PCR、Western blot结果显示, 稳定转染重组质粒后MDA-MB-231细胞EIF4E及VEGF-C mRNA和蛋白表达均明显下降 （P<0.05）, 抑制率分别为79.00%、 67.90% （EIF4E） 和77.01%、 62.94% （VEGF-C）。免疫细胞化学染色法显示重组质粒组EIF4E及VEGF-C蛋白表达均受到明显抑制 （P<0.05）。结论： 靶向EIF4E的shRNA不仅能有效沉默乳腺癌细胞MDA-MB-231中EIF4E的表达, 且能抑制VEGF-C的表达, 提示EIF4E可能参与诱导乳腺癌细胞VEGF-C的表达, 而EIF4E-shRNA可能成为抑制乳腺癌淋巴管生成的一种新的有效手段。MDA-MB-231 RNA EIF4E pGPU6/GFP/Neo     

高强度聚焦超声治疗对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的：研究高强度聚焦超声（HIFU）治疗后乳腺癌细胞代谢及生物学行为的变化。方法：23例乳腺癌患者改良根治术前1－2周接受HIFU治疗。术后对乳腺癌组织行：（1）NDAH－黄递酶（nicotinamide adenine dnucleotide-diaphorase)组织化学染色；（2）用单克隆抗体PCNA，CD44v6，MMP－9行免疫组织化学染色，（SP）法；（3）癌基因C－erbB-2mRNA原位杂交；（4）端粒酶TRAP－ELISA法行端粒酶活性进行测定。结果：（1）HIFU治疗靶区内NADH0－黄递酶阴性，但靶区外未损伤区酶染色为阳性；（2）对照组乳腺癌组织PCNA指数、CD44v6、MMP－9阳性率分别为44％、56％和60％，而HIFU治疗组其靶区内细胞无1例阳性；（3）对照组乳腺癌组织C－erbB-2mRNA阳性率为36％，而HIRU治疗组其靶区内细胞无1例阳性；（4）对照组乳腺癌组织端粒酶活性为1．87，HIFU治疗组其靶区内组织端粒酶活性为0．17， 接近阴性对照（P＜0．001）。结论：HIFU治疗靶区乳腺癌组织生长能力、侵袭转移能力丧失，端粒酶失活，癌基因C－erbB－2破坏或 转录下降,经HIFU治疗后乳腺癌组织是一团无任何功能的组织。     

高强度超声治疗兔肺部早期肿瘤

目的：探讨高强度超声（high intensity ultrasound,HIU）治疗兔肺部VX2早期肿瘤的有效性和安全性。方法：将建立肺癌模型4d的32只实验兔随机分为三组，分别为手术组、HIU治疗组及假照组。HIU治疗组于术后7d随意处死2只取材作病理切片和电镜检查，观察局部及肺门淋结变化，另10只与手术组及对照组进行比较，监测各组肺部功能前后变化情况，平均生存时间，生存质量及治愈情况，结果：病理报告示肿瘤治疗区域均凝固性坏死，周围肺组织充血，肺门淋巴结未见肿瘤细胞浸润；电镜示肿瘤细胞膜被破坏，细胞核内染色质边集，分散，手术组与HIU治疗组术前，术后肺部功能无显著差异，平均生存时间均明显高于假照组，两组生存时间与治愈率无差别。结论：高强度超声治疗兔肺部VX2早期肿瘤是安全有效的，有效成为肺部肺肿瘤微创外科的又一治疗手段。     

高强度聚焦超声治疗在体人子宫腺肌瘤病理变化初探

目的研究高强度聚焦超声(high intensity focused ultrasound，HIFU)对在体人子宫腺肌瘤的杀伤作用。方法利用重庆海扶(Ⅲ-fu)技术有限公司研制提供的Jc型高强度聚焦超声治疗系统，对7例诊断为子宫腺肌瘤需要做全子宫切除术的病人，用HIFU定点照射充分暴露的子宫腺肌瘤120s，常规切除子宫后，沿照射点垂直切开瘤体，用靶区内的组织进行TTC(2，3，5-三苯基氯化四氮唑，2，3，5-Triphenyhetrazohum chloride)染色，并送HE光镜和电镜观察。结果7例子宫腺肌瘤照射靶区组织TTC染色不着色；光镜和电镜下，子宫腺肌瘤平滑肌细胞、腺上皮细胞及间质细胞均发生不可逆性凝固性坏死。结论HIFU对在体人子宫腺肌瘤的平滑肌细胞、腺上皮细胞和间质细胞具有杀伤作用。     

肝纤维化大鼠血清体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化

背景:近年来临床运用骨髓间充质干细胞移植治疗晚期肝纤维化取得了较好疗效,但由于肝源稀少,骨髓干细胞体外分化为成熟肝细胞的技术仍然不成熟.目的:探讨骨髓间充质干细胞体外诱导其分化为肝细胞的可行性.方法:构建大鼠肝纤维化模型,分离、纯化并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,制备正常及肝纤维化大鼠血清,取第3 代骨髓间充质干细胞分组培养,分别加入以下培养基:DMEM+体积分数10%胎牛血清;肝细胞生长培养基(HGM)+体积分数5%胎牛血清;HGM+5%正常大鼠血清;HGM+5%肝纤维化大鼠血清;HGM+5%肝纤维化大鼠血清+25 μg 肝细胞生长因子.观察各组细胞形态变化,MTT 法测定细胞生长曲线,采用Realtime-PCR 检测甲胎蛋白和细胞角蛋白18 的表达,溴甲酚绿法检测上清液中白蛋白水平,ELISA 法检测培养上清液中转化生长因子β1 表达.结果与结论:正常大鼠血清能促进骨髓间充质干细胞的增殖;肝纤维化大鼠血清对骨髓间充质干细胞促增殖作用最好,且能有效诱导其向肝细胞分化,联合使用肝细胞生长培养基能提高分化率.     

1535株非发酵革兰阴性杆菌的分布和耐药性分析

目的 了解非发酵革兰阴性杆菌在湖南省人民医院的临床分布及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物提供依据.方法 采用常规方法进行细菌培养,使用ATB Expression全自动细菌鉴定分析仪和配套的鉴定和药敏板鉴定菌种盒进行药敏试验,部分抗生素采用K-B纸片扩散法进行药敏试验.结果 2011年5月至2012年3月共分离出非发酵菌1 535株,依次为铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌,分别占42.8％、32.5％、8.6％.各种临床标本中以痰液标本的检出率最高(72.4％).药敏结果显示,分离的非发酵菌对所监测的抗菌药物均有不同程度耐药.ICU病房分离的非发酵菌的耐药率高于普通病房(P＜0.05).结论 铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌为医院感染的主要非发酵革兰阴性杆菌,对抗菌药物的耐药性广泛,各种细菌之间耐药性差异较大,应加强病原学检测及药敏试验,以减少细菌耐药性产生.     

血清转化生长因子β对大鼠肝纤维化影响的研究

目的观察转化生长因子β(TGF-β)对肝纤维化模型SD大鼠肝功能的影响。方法将60只SD大鼠随机平均分为3组:正常对照组不做任何处理;生理盐水对照组腹腔注射生理盐水;肝纤维化模型组腹腔注射10%四氯化碳(CCl4)建立肝纤维化模型。造模6周后采集血清全自动生化仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测TGF-β的含量,实时荧光定量PCR法检测肝纤维化相关基因血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)和结缔组织生长因子(CTGF)表达情况。结果生理盐水对照组ALT、AST和TGF-β含量与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05);肝纤维化模型大鼠血清ALT、AST较正常对照组及生理盐水对照组大鼠明显增高(P<0.01),TGF-β的含量明显增高(P<0.05),肝纤维化模型组肝纤维化相关基因PDGF-BB、CTGF表达明显,而生理盐水组与对照组均无表达。结论血清中TGF-β与大鼠肝纤维化密切相关,在大鼠肝纤维化模型中明显增高,同时肝纤维化组织中PDGF-BB、CTGF表达也增高。     

脂蛋白相关磷脂酶A2检测在急性冠脉综合征中的应用

目的 探讨脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）对急性冠脉综合征（ACS）的预测价值.方法 选择ACS患者48例为研究对象,ACS患者中稳定型心绞痛患者（SAP组）27例不稳定型心绞痛组（UAP组）22例,急性心肌梗死组（AMI组）26例,健康对照组选取同期该院体检未发现心血管疾病者21例.采用酶联免疫吸附法（ELISA）,检测血浆Lp-PLA2水平.采用西门子7600-20全自动生化分析仪测定血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌红蛋白（MYO）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）.结果 不同组别中的Lp-PLA2水平明显不同（F=10.801,P=0.000）.多重比较显示,SAP组、UPA组和AMI组的Lp-PLA2水平明显高于健康对照组（P〈0.05）,AMI组的Lp-PLA2水平明显高于SAP组或UAP组（P〈0.05）.AMI组TG、HDL、LDH、CK、CK-MB和MYO水平明显高于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;而LDL和TC水平差异无统计学意义（P〉0.05）,Lp-PLA2水平与LDL、LDH、CK-MB和MYO正相关,与HDL负相关.受试者工作特征（ROC）曲线分析,Lp-PLA2水平在诊断ACS过程中曲线下面积为0.834（P=0.000）,95%CI为0.740～0.928.结论 高水平血浆Lp-PLA2对ACS患者发生心血管事件有一定的预测价值.     

249株流感嗜血杆菌的分离与耐药性分析

目的了解流感嗜血杆菌（Hi）的检出状况与耐药情况,指导临床合理用药。方法统计分析2007-2010年我院Hi的分离与耐药情况。结果在1 052份痰及咽拭子标本中分离出Hi 210株,在242份胆汁标本中分离出Hi16株,在203份胸腹水标本中分离出Hi 12株,在163份眼、耳拭子标本中分离出Hi 11株。体外药敏结果显示Hi对复方磺胺甲恶唑耐药性最高为63.5%,氨苄西林次之为46.2%,而对阿莫西林/棒酸、利福平、头孢呋辛、头孢噻肟、亚氨培南敏感,耐药率≤2.0%。结论 Hi在呼吸道标本中的检出率最高,眼、耳拭子标本中次之,在胆汁、胸腹水中亦有检出。建议眼、耳拭子及胆汁、胸腹水标本作细菌培养时也应同时接种哥伦比亚血平板（COS）、淋球菌选择性平板（VCA）及嗜血杆菌选择性平板（HAE）,Hi感染的治疗应首选复方阿莫西林、头孢二代或三代类抗生素。