核转染对成体骨髓源性干细胞的影响

背景:成体骨髓源性干细胞是实施细胞治疗的重要细胞来源。对成体骨髓源性干细胞的示踪,是研究其移行、分化的规律与机制并进一步阐明再生潜能、疗效的关键。目的:探讨经转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,在细胞表型、增殖能力、心肌分化潜能是否存在的影响。方法:应用核转染技术利用U-23程序将编码maxGFP报告基因的载体对成体骨髓呈克隆样干细胞进行转染,应用MTT法对核转染前后的生长曲线进行测定,使用3μmol/L5-氮胞苷对核转染前后成体骨髓呈克隆样干细胞进行向心肌分化诱导,并利用RT-PCR对向心肌分化的特异性标记物GATA4与MLC-2v的表达进行测定。使用成年SD大鼠心肌梗死左前降支结扎模型,对使用经maxGFP转染的成体骨髓呈克隆样干细胞施心内注射并于注射后的第2天和第7天对经注射心脏行冰冻切片并观察maxGFP在体内的表达情况。结果与结论:经核转染24h后,第47代及第119代成体骨髓呈克隆样干细胞的转染率为49.4%和43.1%,转染后5h,开始出现呈绿色荧光阳性的细胞,经核转染后仍能保持小圆球形、可贴壁、呈克隆样生长。MTT检测结果显示:核转染前后第47代及第119代均具有相似的生长曲线。核转染前第47代及119代细胞平均群体倍增时间分别为8.57,10.28h;核转染后分别为9.42,10.42h,各代前后比较差异无显著性意义(P=0.551,P=0.774)。RT-PCR检测结果显示:核转染前5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强;核转染后5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强,上述2个向心肌分化指标于转染前后变化并不明显。体内实验结果:心内注射经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,第2天及第7天可在经注射心肌中发现有少量绿色荧光阳性的细胞。提示,核转染可快速地将外源基因导入细胞,经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞仍能保持其细胞形态、增殖能力及向心肌分化潜能,然而,经maxGFP基因核转染的成体骨髓呈克隆样干细胞,移植入心肌后只有少数细胞能表达经转染基因。     

振幅整合脑电图在新生儿重症监护病房中的应用与护理

通过对40例脑损伤的高危足月新生儿进行振幅整合脑电图（ aEEG）监测,得出选择正确的记录电极,合适的监测持续时间,监测过程中正确识别惊厥发作并及时报告医生处理,排除监测过程中的伪差,减少干扰因素,是监测成功的关键因素。     

泽泻提取物改善游离脂肪酸诱导的HepG2脂肪变性细胞模型的脂质代谢及氧化应激异常

目的 研究泽泻提取物（Alisma orientale extract,AE）及其3种主要单体成分对游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）诱导的HepG2脂肪变性细胞模型的脂质代谢及氧化应激异常的改善作用及机制。方法 利用FFA（油酸-棕榈酸2∶1）建立稳定的HepG2脂肪变性细胞模型,CCK-8法测定AE、泽泻醇A、泽泻醇A-23-乙酸酯及泽泻醇A-24-乙酸酯对HepG2细胞的安全剂量;在FFA诱导同时给予AE(25.00、12.50、6.25 mg/L)、泽泻醇A(50.0、25.0、12.5μmol/L)、泽泻醇A-23-乙酸酯（25.00、12.50、6.25μmol/L）、泽泻醇A-24-乙酸酯（50.0、25.0、12.5μmol/L）处理24 h,检测细胞内脂滴的形成情况,利用生化试剂盒测定各组细胞内三酰甘油（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）水平,DCFH-DA检测药物对细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）生成的影响,采用试剂盒检测细胞内氧化应激关键指标丙二醛（malo...     

老年肺癌患者胸腔镜手术后肺不张发生影响因素

目的 探讨老年肺癌患者胸腔镜手术后肺不张发生的影响因素。方法 选取120例老年肺癌患者,均行胸腔镜手术治疗,术后观察4～5 d,统计患者胸腔镜手术后肺不张发生情况;设计基线资料调查表,查阅并记录患者入院时基线资料,分析老年肺癌患者胸腔镜手术后发生肺不张的影响因素。结果 120例老年肺癌患者胸腔镜手术后发生肺不张8例,发生率为6.67%;发生组术前白细胞计数(WBC)水平、术后疼痛程度[视觉模拟评分(VAS)]均高于未发生组,手术时间长于未发生组,有吸烟史占比高于未发生组,差异有统计学意义(P<0.05);经多元Logistic回归分析发现,术前WBC水平高、术后VAS高、手术时间长、有吸烟史均可能为老年肺癌患者胸腔镜手术后发生肺不张的影响因素(OR>1,P<0.05)。结论 老年肺癌患者胸腔镜手术后肺不张发生风险较高,对于术前WBC水平高、术后VAS高、手术时间长、有吸烟史的老年肺癌患者应展开相应防治措施,降低术后肺不张发生率。     

核转染对成体骨髓源性干细胞的影响

背景：成体骨髓源性干细胞是实施细胞治疗的重要细胞来源。对成体骨髓源性干细胞的示踪,是研究其移行、分化的规律与机制并进一步阐明再生潜能、疗效的关键。目的：探讨经转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,在细胞表型、增殖能力、心肌分化潜能是否存在的影响。方法：应用核转染技术利用U-23程序将编码maxGFP报告基因的载体对成体骨髓呈克隆样干细胞进行转染,应用MTT法对核转染前后的生长曲线进行测定,使用3μmol/L5-氮胞苷对核转染前后成体骨髓呈克隆样干细胞进行向心肌分化诱导,并利用RT-PCR对向心肌分化的特异性标记物GATA4与MLC-2v的表达进行测定。使用成年SD大鼠心肌梗死左前降支结扎模型,对使用经maxGFP转染的成体骨髓呈克隆样干细胞施心内注射并于注射后的第2天和第7天对经注射心脏行冰冻切片并观察maxGFP在体内的表达情况。结果与结论：经核转染24h后,第47代及第119代成体骨髓呈克隆样干细胞的转染率为49.4%和43.1%,转染后5h,开始出现呈绿色荧光阳性的细胞,经核转染后仍能保持小圆球形、可贴壁、呈克隆样生长。MTT检测结果显示：核转染前后第47代及第119代均具有相似的生长曲线。核转染前第47代及119代细胞平均群体倍增时间分别为8.57,10.28h;核转染后分别为9.42,10.42h,各代前后比较差异无显著性意义（P=0.551,P=0.774）。RT-PCR检测结果显示：核转染前5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强;核转染后5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强,上述2个向心肌分化指标于转染前后变化并不明显。体内实验结果：心内注射经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,第2天及第7天可在经注射心肌中发现有少量绿色荧光阳性的细胞。提示,核转染可快速地将外源基因导入细胞,经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞仍能保持其细胞形态、增殖能力及向心肌分化潜能,然而,经maxGFP基因核转染的成体骨髓呈克隆样干细胞,移植入心肌后只有少数细胞能表达经转染基因。     

应用电视胸腔镜手术诊治肺部疾病67例分析

目的：探讨电视胸腔镜手术在肺部疾病诊治中的应用价值。方法回顾分析该科2009年1月—2013年6月,采用电视胸腔镜手术诊治肺部疾病67例。结果本组无围术期死亡,均治愈或好转出院。手术并发症发生率3．0％（2／67）。自发性气胸、肺大疱、肺部良性肿瘤术后随访均无复发。结论电视胸腔镜手术在治疗肺部疾病中与传统开胸手术相比,在保证手术安全与根治的同时又有创伤小、疼痛轻、疗效可靠、术后恢复快、术后并发症少及符合美观要求等优点。     

基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术的七味通痹口服液化学成分分析

目的 采用高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术(HPLC-Q-TOF-MS/MS)对七味通痹口服液中的化学成分进行定性表征.方法 色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-0.1％甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温25℃;采...     

基于小鼠子宫平滑肌收缩活性测定的桂枝茯苓胶囊质量评价研究

目的 从桂枝茯苓胶囊（Guizhi Fuling Capsules,GZFLC）临床用于治疗痛经的功效出发,探索建立基于子宫平滑肌收缩活性测定的GZFLC质量生物活性评价方法。方法 通过注射雌激素增加小鼠子宫敏感性,建立缩宫素诱导的小鼠离体子宫平滑肌收缩模型,采集给药前后小鼠子宫平滑肌的收缩频率、幅值和峰面积,以收缩峰面积为指标进行统计并对药效进行归一化处理。考察小鼠离体子宫平滑肌收缩模型的主要影响因素如雌激素注射方式与天数、缩宫素浓度、动物周龄和GZFLC前处理方法。建立GZFLC质量生物活性评价方法并进行方法学考察,测定10个批次GZFLC合格样品及2个GZFLC高温破坏样品的生物活性。结果 连续3 d ip雌激素10 mg/（kg·d）后小鼠子宫平滑肌收缩峰面积较高且收缩节律较好;最适缩宫素造模质量浓度为0.050 μg/mL;将GZFLC配制成质量浓度为0.125 g/mL的药液并超声溶解60 min有利于药效发挥;重复性考察RSD为11.298%,日内精密度RSD为12.452%,日间精密度RSD为10.438%;10批次GZFLC半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC₅₀）为1.526～1.631 mg/mL,高温破坏后GZFLC的IC₅₀明显增大。结论 基于子宫平滑肌收缩活性测定的GZFLC质量评价方法重复性和精密度较好,为后续GZFLC的综合质量评价标准建立提供了科学依据。     

杏贝止咳颗粒对豚鼠感染后咳嗽的治疗作用

目的 探讨杏贝止咳颗粒对豚鼠感染后咳嗽（post-infectious cough,PIC）的治疗作用。方法 除对照组外,将3～4周龄SPF级雄性Hartley豚鼠采用鼻滴脂多糖、烟熏、辣椒素雾化激发来构建PIC豚鼠模型。造模成功后分为模型组及杏贝止咳颗粒低、中、高剂量（0.93、1.86、3.72 g/kg）组、阿斯美（21.62 mg/kg）组和苏黄止咳胶囊（313.88 mg/kg）组,末次给药后24 h,通过辣椒素雾化诱咳测定咳嗽次数及潜伏期,采用ELISA法检测血清、肺泡灌洗液和肺组织中P物质（substance P,SP）、降钙素相关基因肽（calcitonin gene related peptide,CGRP）、神经肽A(neurokinin A,NKA)、神经肽B(neurokinin B,NKB)、神经生长因子（nerve growth factor,NGF）、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)和缓激肽（bradykinin,BK）含量,血液分析仪测定肺泡灌洗液中白细胞分类,并用苏木素-伊红（HE）染色法观察肺组织病理变化。结果 与对照组比较...     

环烯醚萜总苷对Ⅱ型糖尿病大鼠血脂及视网膜毛细血管病变的影响

目的：观察Ⅱ型糖尿病大鼠血脂的变化、视网膜毛细血管病变及环烯醚萜总苷对其影响。方法：自制高脂饲料喂养Wistar大鼠4周后，按25mg／kg一次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)，2周后用口服糖耐量试验(Oral glucose tolerancetest，OGTT)筛选造模成功大鼠。随机分为糖尿病模型组(Model)、降糖通脉胶囊组(Jiangtang Tongmai Jiaonang，JTTM)及环烯醚萜总苷组(Iridoid glycosides of Cornus officinalis，IGCO)，并设正常对照组(Control)。饲养16周，观测血清总胆固醇(CHOL)、甘油三脂(TG)、载脂蛋白A(Apo-A)及B(Apo-B)、高密度脂蛋白(HDL-C)及低密度脂蛋白(LDL-C)，并运用视网膜消化铺片和图像分析方法，观测糖尿病大鼠视网膜微血管结构改变及环烯醚萜总苷对其影响。结果：模型组大鼠血清Apo-A水平明显降低，血清CHOL、TG、LDL-C、Apo-B水平明显升高。环烯醚萜总苷组能显著升高糖尿病大鼠Apo-A水平，降低糖尿病大鼠CHOL、TG、LDL-C、Apo-B水平。模型组视网膜毛细血管内皮细胞(EC)数目明显增加，而周细胞(PC)数目明显减少，导致E／P值上升。环烯醚萜总苷组均能显著降低糖尿病大鼠视网膜毛细血管的E／P值。结论：环烯醚萜总苷对糖尿病血脂改变及视网膜毛细血管病变具有一定的改善作用。