脉炎消注射液抗炎抑菌作用的研究

目的:考察脉炎消注射液的抗炎抑菌作用.方法:取小鼠,尾静脉注射给脉炎消注射液7天,于末次给药后将二甲苯均匀滴于耳壳上,处死小鼠取下耳片,计算肿胀度.另取大鼠,尾静脉给脉炎消注射液7天,于末次给后灌胃给水10 mL,立即于大白鼠左足趾皮下注射新鲜蛋清0.1 mL,用千分尺分别于不同时间测定大白鼠左右足趾的厚度,以其差值计算肿胀度.脉炎消注射液浓缩溶液,采用微量试管法,对23株菌进行抑菌试验.结果:脉炎消注射液能够明显抑制二甲苯所致小白鼠耳壳肿胀(P＜0.05),抑制率为28.6%.亦能抑制由蛋清诱导大鼠足趾急性炎症(P＜0.05,P＜0.01).脉炎消注射液较高浓度有抑菌作用,平均MIC为581 mg·mL-1,对革兰氏阳性菌的抑制作用较强(MIC为108mg·mL-1).结论: 脉炎消注射液具有明显的抑制二甲苯所致小白鼠耳壳肿胀、蛋清诱导大鼠足趾急性炎症及体外抑菌作用,且未见明显毒性.     

扑热息痛咀嚼片的人体生物利用度研究

用紫外分光光度法，测定１０名男性健康志愿受试者单剂量交叉口服１ｇ扑热息痛片和扑热息痛咀嚼片后的血药浓度，以扑热息痛片为对照品，计算扑热息痛咀嚼片的相对生物利用度（Ｆ）。ＭＣＰＫＰ计算机程序拟合和统计学分析。结果表明，两制剂的Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、ＡＵＣ等药动学参数无显著差异（Ｐ＞００５），扑热息痛咀嚼片的Ｆ值为（１１４６５±１６１７）％。     

美托洛尔与卡托普利在老年人体内的药动学特性和相互作用

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表没食子儿茶素没食子酸酯对人脐带动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的: 考察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)对体外培养的人脐带动脉平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的抑制作用及作用机制,为临床治疗相关的心血管疾病提供参考。方法: 组织块贴壁法原代培养HUASMCs,选传至3代的细胞进行免疫组织化学染色法鉴定;MTT比色法,测定EGCG(109.08 μmol·L^-1)在不同作用时间(3~96 h)和不同作用浓度(1.09~1 090.75 μmol·L^-1)下对HUASMCs增殖的抑制作用;RT-PCR法,测定EGCG(2.18,21.82,218.15 μmol·L^-1)对HUASMCs表达IL-6 mRNA的影响;ELISA法,测定EGCG(2.18,21.82,218.15 μmol·L^-1)对HUASMCs分泌IL-6水平的影响。结果: EGCG在各个检测时间点均可抑制体外培养HUASMCs的增殖(P<0.01),3~48 h抑制作用随作用时间延长而增加,48 h增殖抑制最强,72 h,96 h与48 h增殖抑制作用相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EGCG各浓度对HUASMCs体外增殖均有抑制作用(P<0.05或P<0.01),EGCG呈剂量依赖性,IC₅₀为413.39 μmol·L^-1。EGCG(21.82,218.15 μmol·L^-1)对HUASMCs表达IL-6 mRNA有抑制作用(P<0.01)。EGCG(2.18,21.82,218.15 μmol·L^-1)可抑制HUASMCs分泌IL-6(P<0.05)。结论: EGCG对HUASMCs的体外增殖有抑制作用。EGCG可抑制HUASMCs IL-6 mRNA的表达和IL-6因子的分泌。     

高效液相色谱法测定人血浆中多潘立酮的浓度

目的:建立测定人血浆中多潘立酮浓度的高效液相色谱法。方法:以普萘洛尔为内标,取血浆样品用0.1 mol·L^-1氢氧化钠溶液碱化后乙醚提取,再用0.2 mol·L^-1盐酸溶液提取乙醚中药物,取20μl进行HPLC测定。色谱柱:Diamonsil C₁₈（200 mm×4.6 mm,5μm）,流动相:乙腈-0.02 mol·L^-1磷酸盐缓冲液（pH 3.5）（25:75）,荧光检测器激发波长:282nm;发射波长:326nm,流速:1.0 ml·min^-1,柱温:25℃。结果:标准曲线的线性范围为1.0～100.0μg·L^-1（r=0.999 2）,相对回收率在99.1%～108.8%之间,日内和日间RSD均小于10%。结论:该方法具有操作简便可靠,准确,稳定性高等特点,适用于多潘立酮血药浓度的测定。     

脑心康注射液急性毒性实验研究

目的:观察脑心康注射液是否会对小鼠产生急件毒性反应.方法:记录小鼠尾静脉注射药物的最大浓度和最大体积,24 h内给药3次,连续观察14 d.结果:小鼠行动正常,未出现躁动、发声:未发生举尾、振颤、痉挛、运动失调、姿态异常等神经系统反应;无眼球突出、流涎、流泪、排尿、下泻、竖毛,皮肤变色等:眼、鼻、口腔无异常分泌物;饮水及食欲正常;体重变化正常;无死亡.结论:24 h内给予脑心康注射液0.841 8 g(生药量)/20 g(小鼠体重)对小鼠无明显毒性,该用药量是临床用药剂量的84～140倍.     

骨髓间质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注凋亡蛋白Caspase-3的影响

目的 研究静脉移植骨髓间充质干细胞 (MSCs) 对脑缺血再灌注模型大鼠神经功能及凋亡相关蛋白caspase-3的影响.方法体外培养及扩增 MSCs 后,用绿色荧光染料羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂 (CFSE) 标记,通过静脉途径移植给大脑中动脉缺血 2 h 再灌注的SD 大鼠,按不同时间点取材,荧光显微镜观察BMSCs在脑内的分布,免疫组织化学染色及RT-PCR检测大鼠脑内caspase-3蛋白表达情况.结果移植组在移植后第6天神经功能明显好于对照组 (P<0.05).移植组移植后3、 12、24、48、72 h caspase 3 免疫组化阳性目标面密度分别为 (1.34±0.31)%、(3.98±0.67)%、(5.58±0.92)%、(4.65±0.69)%、(3.51±0.63)%,对照组分别为 (2.09±0.19)%、(5.23±0.30)%、(6.89±0.57)%、(5.93±0.56)%、(4.39±0.57)%,移植组和对照组比较均 (P< 0.05).6 h 及 7 d 移植组 caspase 3 阳性目标面密度分别为 (2.81±0.35)%、(1.64±0.29)%,与对照组 (3.92±0.44)%,(2.29±0.21)% 比较差异显著 (P< 0.01).移植组相应时间点caspase-3的表达明显低于对照组 (P<0.05, P<0.01);移植组大鼠缺血侧皮层的caspase-3 mRNA相对量明显低于对照组 (P<0.01).结论经静脉注射骨髓间充质干细胞可明显改善神经功能.其可能通过下调caspase-3表达方式对脑缺血再灌注损伤起保护作用.     

反相高效液相色谱法测定甲磺酸帕珠沙星原料含量及其有关物质

目的建立测定甲磺酸帕珠沙星原料含量及其有关物质的反相高效液相色谱法。方法采用Hypersil C18（5 μm,4.6 mm×250 mm）色谱柱,以0.1%磷酸（加0.080 5 g磷酸氢二钾）：乙腈（85：15）为流动相,流速1.0 mL&#8226;min 1,柱温30 ℃,于243 nm波长处测定甲磺酸帕珠沙星含量及有关物质。（40±2）℃放置6个月、（25±2）℃放置12个月考察质量稳定性。结果1.0～500.0 μg&#8226;mL 1内峰面积与浓度线性关系良好。样品溶液室温放置24 h稳定,RSD＜1.0%。甲磺酸帕珠沙星保留时间为7.012 min,与有关物质分离度＞1.5。3批原料含量平均值为99.8%,有关物质含量＜1.0%。加速试验及长期放置质量稳定。结论反相高效液相色谱法测定甲磺酸帕珠沙星原料含量及其有关物质简便,结果可靠,可用于甲磺酸帕珠沙星原料及其制剂的质量控制。     

应用转BMP7基因软骨细胞构建组织工程软骨

目的:利用转BMP7基因软骨细胞构建组织工程软骨,测定BMP7基因在构建的组织工程软骨中的表达,探讨与未转BMP7基因软骨细胞构建的组织工程软骨的生物学差异。方法:实验于2004-06/2005-01在哈尔滨医科大学附属第二医院临床药学药物研究所完成。应用转染重组pcDNA3.1-BMP7真核表达载体质粒并用G418筛选14d的阳性克隆软骨细胞,以胶原-纤维蛋白凝胶为支架,构建转BMP7基因组织工程软骨。以未转BMP7基因组织工程软骨作为对照,软骨细胞的接种密度为5×109L-1。用甲苯胺蓝、苏木精-伊红染色对组织工程软骨培养物组织学分析;原位杂交法检测Ⅱ型胶原mRNA的表达;透射电镜观察组织工程软骨培养物的超微结构;原位杂交和免疫组化法测定体外培养物BMP7mRNA和蛋白的表达。结果:①BMP7基因转染软骨细胞情况:G418筛选7d时大量细胞死亡,约30%的细胞存活,且贴壁生长。G418连续筛选14,28d均有阳性克隆细胞生成,贴壁生长率100%,存活的阳性克隆细胞为转染成功的软骨细胞。②组织工程软骨培养物大体形态及显微镜观察结果:构建的组织工程软骨培养物呈浅粉红色胶冻样圆盘状,透明,体积约为16mm×16mm×3mm。显微镜下只能观察到呈圆形的浅层细胞。③组织工程软骨培养物组织学分析结果:组织工程软骨培养物体外培养7,14,28d,细胞周围有丰富的细胞外基质,转BMP7基因组织工程软骨培养物细胞基质较多,体外培养14d软骨细胞合成和分泌最为活跃。④组织工程软骨培养物Ⅱ型胶原表达mRNA原位杂交检测结果:软骨细胞核周围呈棕黄色,有mRNA表达。⑤不同培养时间下组织工程软骨培养物DNA含量的测定情况:DNA含量随着培养时间的推移逐渐增加,21d时达到高峰,转BMP7基因比未转染BMP7基因的组织工程软骨培养物DNA含量高(P<0.05)。⑥不同培养时间下组织工程软骨培养物糖胺多糖含量的测定情况:转BMP7基因组织工程软骨培养物体外培养14d时糖胺多糖含量最高,且各时间点糖胺多糖含量均高于未转BMP7基因组织软骨培养物(P<0.05)。⑦组织工程软骨培养物的超微结构观察:与未转BMP7基因组织工程软骨培养物比较,体外培养7d,转BMP7基因组软骨培养物内软骨细胞细胞器发达,内质网、线粒体和高尔基体相对较丰富,细胞基质合成较旺盛;体外培养21d,转BMP7基因组织工程软骨培养物中软骨细胞粗面内质网仍较发达,线粒体和高尔基体相对减少,细胞基质合成能力减弱。⑧BMP7mRNA表达原位杂交测定结果:体外培养7,14,21d,转BMP7基因组织工程软骨培养物软骨细胞中均有BMP7mRNA表达,而未转BMP7基因组织工程软骨培养物未见软骨细胞表达BMP7mRNA。⑨BMP7蛋白表达免疫组化测定结果:体外培养7,14,21d,转BMP7基因组织工程软骨培养物软骨细胞中均有BMP7蛋白表达,而未转BMP7基因组织工程软骨培养物未见软骨细胞表达BMP7蛋白。结论:成功构建转BMP7基因组织工程软骨,其生物学特性优于未转BMP7基因软骨细胞构建的组织工程软骨,作为移植物修复软骨组织缺损具有一定的可行性和优越性。     

乌梅透骨口服液抗炎镇痛活血作用的药效学

目的：观察乌梅透骨口服液（WTOL）的抗炎、镇痛和活血化淤作用。方法：采用二甲苯致耳肿胀实验、腹腔毛细血管通透性实验、角叉菜胶致足跖肿胀实验和棉球肉芽肿实验观察该药的抗炎作用；采用扭体实验和热板实验观察WTOL的镇痛作用；建立血淤模型观察该药的活血作用。结果：WTOL能显著抑制二甲苯所致的耳肿胀、降低腹腔毛细血管通透性、抑制角叉菜胶引起的足跖肿胀和棉球所致的肉芽肿（P〈0．05）；对醋酸引起的扭体反应有显著的抑制作用，并能明显提高小鼠热板痛阈（P〈0．05）；能降低血淤模型大鼠的血液黏度及红细胞压积（P〈0．05）。结论：WTOL对实验动物模型具有明显的抗炎、镇痛及活血作用。