鸡内金降脂、抗凝及改善血液流变学作用的实验研究

高脂饲料喂养家兔复制动脉粥样硬化模型 ,同时每日灌服鸡内金提取冻干粉 ,观察实验前后兔血脂、凝血及血液流变学指标的变化。结果表明鸡内金有抗凝及改善血液流变学的作用。动脉血管壁病理检查表明鸡内金能减轻动脉粥样硬化程度。1　材料1.1　药品及试剂　鸡内金冻干粉 ,本所孙考祥等提供。胆固醇 ,北京化学试剂分公司产。1.2　动物　健康新西兰大耳白兔 ,体重 1.5～ 2 .0ｋｇ ,哈尔滨制药厂动物室提供。2　方法与结果2 .1　动物模型的建立[1 ] 　家兔 2 4只 ,随机分 3组。 (1)正常组 :喂基础饲料。 (2 )高脂组 :喂 80 %基础饲料加 15%蛋黄…     

脉炎消口服液对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的:探讨脉炎消口服液在体外对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的影响及其作用机制。方法:体外组织贴块培养HUASMCs,并传2³代,免疫组化法进行鉴定;采用MTT法观察不同体积分数脉炎消口服液(0.4%、4%、40%)对HUASMCs细胞增殖的抑制作用;采用RT-PCR法检测不同体积分数脉炎消口服液(0.4%、4%、40%)对HUASMCs细胞IL-6 mRNA表达水平的影响。结果:组织块贴壁法原代培养HUASMCs,传3代后,阳性细胞率为90%;脉炎消口服液对HUASMCs的增殖具有明显的抑制作用,且体积分数在一定范围内(0.4%3代,免疫组化法进行鉴定;采用MTT法观察不同体积分数脉炎消口服液(0.4%、4%、40%)对HUASMCs细胞增殖的抑制作用;采用RT-PCR法检测不同体积分数脉炎消口服液(0.4%、4%、40%)对HUASMCs细胞IL-6 mRNA表达水平的影响。结果:组织块贴壁法原代培养HUASMCs,传3代后,阳性细胞率为90%;脉炎消口服液对HUASMCs的增殖具有明显的抑制作用,且体积分数在一定范围内(0.4%⁴0%)呈浓度依赖性。结论:脉炎消口服液抑制HUASMCs增殖的作用是通过下调细胞IL-6mRNA的表达水平而实现的。     

RP-HPLC法测定甲磺酸帕珠沙星原料含量及其有关物质

目的:反相高教液相色谱法测定甲磺酸帕珠沙星原料含量及其有关物质.方法:采用Hypersil C18(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,以0.1%磷酸(加0.0805g磷酸氢二钾):乙腈(85:15)为流动相,流速1.OmL·min-1,柱温30℃,于243nm波长处测定甲磺酸帕珠沙星含量及有关物质.40±2℃放置6个月、25±2℃放置12个月考察质量稳定性.结果:1.0-500μg·mL-1内峰面积与浓度线性关系良好.样品溶液室温放置24h稳定,RSD<1.0%.甲磺酸帕珠沙星保留时间为7.012min,与有关物质分离度>1.5.三批原料含量平均值为99.8%,有关物质含量<1.0%.加速试验及长期放置质量稳定.结论:RPHPLC法测定甲磺酸帕球沙星原料含量及其有关物质简便,结果可靠,可用于甲磺酸帕珠沙星原料及其制剂的质量控制.     

HPLC法测定甲磺酸帕珠沙星原料及其制剂含量

目的:采用高效液相色谱法测定甲磺酸帕珠沙星原料及其制剂含量.方法:Hypersil C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,0.1%磷酸溶液(加磷酸氢二钾80.5 mg)-乙腈(85:15)为流动相,流速1.0ml·min-1,柱温30℃,检测波长243 nm.结果:甲磺酸帕珠沙星在5～500μg·ml-1内与峰面积呈良好的线性关系.甲磺酸帕珠沙星原料(3批)加样回收率99.2%甲磺酸帕珠沙星注射液加样回收率均值为100.1%;甲磺酸帕珠沙星氯化钠注射液加样回收率均值为99.7%.结论:采用HPLC测定原料及其制剂中甲磺酸帕珠沙星含量方法简便,结果可靠.     

三种剂量国产盐酸塞利洛尔片健康人体内药物动力学及参数相关性研究

 目的:测定盐酸塞利洛尔在人体内药代动力学特性及其3种不同剂量的药代动力学参数变化规律?方法:健康志愿者9名,3×3拉丁方设计,单剂量po 100,200,400mg盐酸塞利洛尔片,采用反相高效液相色谱法测定不同时间的血药浓度,在计算机上以MCPKP程序拟合,求算药代动力学参数?结果:100,200,400mg国产盐酸塞利洛尔片的t_1/2K,K,t_max,c_max,AUC_0～∞分别为3.37,3.45和3.56h,0.24,0.21和0.20h^-1,3.64,3.38和3.87h,177.55,501.4和1188.58ng·ml^-1,1615.41,4508.38和10828.55μg·h^-1。结论:经方差分析,三剂量组的t_1/2k,K,t_max等参数无显著差异(P>0.05),c_max,AUC_0～∞均不呈倍数变化?     

高效液相色谱法测定普利沙星片含量及有关物质

目的采用高效液相色谱法建立普利沙星片含量及有关物质的测定方法。方法色谱柱：Hypersil C18 (5 μm，4.6 mm×250 mm)，流动相：乙腈 0.1%磷酸-1 mol·L-1戊烷磺酸钠溶液（31∶69∶0.2），流速：0.8 mL·min-1，检测波长：276 nm，柱温：（35.0±0.1）℃。结果制剂中辅料对普利沙星测定无干扰，普利沙星与有关物质完全分离，酸、碱及氧破坏均有降解产物生成，降解产物能够与普利沙星分离，不干扰测定。在5～500 μg·mL-1浓度范围内，峰面积（A）与浓度（C）线性关系良好，r＝0.999 9；平均回收率99.40%（n＝9）；日内，日间精密度RSD＜0.5%；溶液室温放置24 h稳定（RSD＜0.5%）。结论该方法简便，准确，重现性好，专属性强，可用于普利沙星片的含量及有关物质测定。     

重组pcDNA3．1-BMP7转染兔膝关节软骨细胞及其表达

目的：将重组pcDNA3.1-BMP7真核表达载体转染至培养的兔膝关节软骨细胞中，观察BMP7基因在兔关节软骨细胞中的表达。 方法：实验于2003-08／2004-08在哈尔滨兽医研究所完成。①选取清洁级健康成年家兔1只，兔膝关节软骨切碎后取2．0-2．5kg软骨组织，进行关节软骨细胞的分离与培养。②脂质体与pcDNA3.1-BMP7 DNA质粒形成脂质体-DNA质粒复合物，复合物的最佳比例为脂质体10μL、pcDNA3.1-BMP7质粒4μg。用含G418的正常培养液筛选转pcDNA3.1-BMP7质粒μg400mg／L的正常培养液筛选转染pcDNA3.1-BMP7DNA质粒的软骨细胞，显微镜观察细胞的形态及活性。③软骨细胞转染后7d和28d，分别用聚合酶链式反应、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western blot、免疫荧光、原位杂交检测等方法测定BMP7蛋白在软骨细胞中的表达。 结果：①家兔膝关节软骨细胞的分离与培养情况：家兔膝关节软骨切碎后用胰蛋白酶／Ⅱ型胶原酶进行消化，能使细胞与细胞外基质很好地分离。接种24h，部分细胞开始贴壁生长，72h后分裂增殖，7d时细胞融合率为90％～100％。贴壁初期细胞呈圆形或三角形，以三角形为主，每7d传代1次。②脂质体介导下pcDNA3.1-BMP7质粒转染兔软骨细胞情况：转染后的软骨细胞用G418筛选，4d转染效率约15％，阳性克隆细胞七八天融合率约为90％。G418连续筛选28d，阳性克隆细胞仍然存活，细胞融合率为100％。未转染pcDNA3.1-BMP7质粒的细胞，G418筛选4d时细胞全部死亡。③转染后兔软骨细胞聚合酶链式反应检测结果：聚合酶链式反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分离，结果在1．3kb处可见DNA条带，作为对照的软骨细胞未见此DNA条带。④转染后软骨细胞BMP7蛋白表达电泳检测结果：在十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶上可见相对分子质量约为18000的电泳条带。⑤转染后软骨细胞BMP7蛋白表达的Western blot检测结果：可见相对分子质量约为18000的特异性条带。⑥转染后软骨细胞蛋白表达的免疫荧光检测结果：转染7，28d的软骨细胞核周围均可见绿色荧光，未转染的软骨细胞未见BMP7蛋白表达。⑦转染后软骨细胞原位杂交检测结果：转染pcDNA3.1-BMP7质粒且G418筛选7，28d的软骨细胞细胞核周围均呈黄褐色，未转染的软骨细胞未见BMP7表达。 结论：用脂质体将pcDNA3.1-BMP7 DNA质粒转染至兔关节软骨细胞。BMP7在关节软骨细胞中获得表达，为软骨损伤的基因治疗及用作种子细胞构建组织工程软骨奠定实验基础。     

美多洛尔与卡托普利在健康人体内的药代动力学相互作用

 目的探讨健康人单用美多洛尔(Met)、卡托普利(Cap)及合用两药时体内的药代动力学过程并进行比较,考察两药同时服用后其药代动力学特性和相互作用。方法对12名健康志愿受试者进行随机交叉实验,分3组,每组4人,每组先后分别给予Met50mg,Cap50mg,Met+Cap各50mg。采用HPLC测定血药浓度。用3P87药代动力学程序对受试者药,时数据进行处理,拟合房室模型,求算药代动力学参数。结果 美多洛尔的Ke值较单用时明显减少(P<0.01);而t 1/2K,C_max和AUC则明显增大。卡托普利在单用及合用时药代动力学参数无明显变化。结论两药合用后美多洛尔的肝脏代谢受到抑制。提示临床联合用药时应监测患者体内美多洛尔血药浓度,避免不良反应发生。     

头孢拉定胶囊的人体生物等效性研究

目的研究国产头孢拉定胶囊的相对生物利用度,评价其生物等效性.方法18名健康受试者单剂量口服受试制剂(A)和参比制剂(B)500mg后,采用HPLC法测定血浆中的药物浓度.结果A和B的Cmax分别为16.32±2.30和14.70±3.98mg·L-1;tmax分别为0.86±0.21和1.04±0.33h;AUC0-,ξ分别为22.75±3.11和22.84±3.92mg·h·L-1;AUC0∞分别为23.88±3.44和24.02±4.16mg·h·L-1.经统计学分析,A和B两药的制剂间和周期间均无显著性差异(P>0.05),A的相对生物利用度为100.43%±10.02%.结论两种头孢拉定胶囊具有生物等效性.     

高效液相色谱法测定盐酸氟桂得嗪血浆浓度及其药物动力学

以高效液相色谱法测定血浆中的盐酸氟桂利嗪浓度。色谱条件：紫外检测波长２１０ｎｍ；柱ＳｐｈｅｒｉｓｏｒｂＣ８１５０×４．６ｍｍ；流动相；甲醇（８０％）；水（１５％）：（０．０５ｍｏｌ．Ｌ＾－１ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４＋０．０２５ｍｏｌ．Ｌ＾－１Ｈ３ＰＯ４）缓冲液（５％）。最低检测限１０ｎｇ．ｍｌ＾－１。药物动力学一室模型，其参数（Ｔ１／２（Ｋ）２．３８－２．６４ｈ，Ｔｍａｘ２．３０－２．４３ｈ，Ｃｍａｘ１３