联合应用错配PCR和交替延伸PCR法提高抗TNFα抗体亲和力

目的：通过突变方法提高抗TNFα单链抗体pscTNF的亲和力。方法：以pscTNF质粒为模板，应用错配PCR构建突变抗体库，筛选亲和力得到改善的变种，再以所获变种为模板，用交替延伸PCR技术，再次构建突变库，筛选活性得到改良的克隆。以斑点ELISA方法及硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力的改善。结果：从错配PCR抗体库中筛选得到7个活性有所增强的变种，再通过交替延伸PCR使这7个变种的突变位点交换重组，获得了亲和力进一步提高的克隆。结论：联合应用错配PCR和交替延伸PCR法可提高单链抗体亲和力。     

染尘大鼠早期肿瘤坏死因子-α、转生长因子-β变化规律研究

取雄性Wistar大鼠,随机分为4组,采用非气管暴露法分别注入15 mg/ml、30 mg/ml、60 mg/ml粉尘悬浮液和生理盐水各1 ml,每组7只大鼠分别在第1、3、7、14、21、28天6个时间点处死。离体进行支气管肺泡灌洗(BAL),BALF离心取上清液,然后采用酶联免疫吸附(ELISA)测定上清液中TNF-α、TGF-β含量。不同剂量的粉尘对TNF-α、TGF-β有显著影响(P<0.05),各剂量组在各时点TNF-α含量较对照组均有升高,除21 d高剂量组外差异均有统计学意义(P<0.05);TGF-β含量较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。提示矽尘所致的纤维化早期TNF-α、TGF-β含量变化规律明显,抑制一种或两种细胞因子可有效阻滞纤维化的发生发展。     

海水浸泡降低血管内皮细胞迁移能力并抑制血管生成

目的:观察海水浸泡对血管内皮细胞迁移和血管生成的影响,为探讨海水致伤机制、制定科学救治原则提供实验依据.方法:建立ECV304细胞划痕创伤模型,分别给予生理盐水和人工海水浸泡处理,划痕创伤愈合修复分析观察细胞迁移能力;建立人食管鳞癌EC0156裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予生理盐水和人工海水干预,监测肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线,观察肿瘤边缘血管的生成,免疫组织化学染色检测肿瘤组织内微血管密度.结果:海水浸泡后,ECV304细胞失去正常形态,并随浸泡时间的延长,呈明显"脱水"状态.在划痕后17 h,对照组划痕已基本愈合,而实验组仍可见清晰划痕,且以实验4 h组划痕尤其明显.与对照组相比,实验组细胞划痕愈合明显延迟,细胞迁移能力降低;与对照组相比实验组肿瘤边缘新生血管较少,前者肿瘤边缘新生血管较丰富,两者有显著性差异(微血管密度值:1.2±0.44 vs 3.2±0.83,P<0.05).实验组肿瘤生长缓慢,肿瘤体积较小(P<0.05).结论:海水浸泡能够降低血管内皮细胞迁移能力并抑制血管生成.     

HPLC法测定风热颗粒中黄芩苷的含量

目的:建立HPLC法测定风热颗粒中黄芩苷含量的方法.方法:采用反相色谱柱;流动相为甲醇-水-冰醋酸(50:50:1);检测波长为274 nm.结果:黄芩苷在0.1248～0.624 0 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为100.25%,RSD为0.36%(n=6).结论:本方法灵敏、准确,可作为风热颗粒的质量控制方法.     

HPLC法测定通脉养心丸中甘草酸的含量

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定通脉养心丸中甘草酸的含量。方法：采用反相色谱柱;流动相为乙腈-水-冰醋酸（42∶58∶2）;检测波长254 nm。结果：甘草酸在0.08093～2.02325μg范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为100.20%,RSD为0.89%（n=6）。结论：本方法可作为通脉养心丸的质量控制方法。     

HPLC法测定华山参滴丸中东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的含量

目的:建立HPLC法测定华山参滴丸中东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的含量。方法:采用资生堂CAPCELL-PAK C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-甲醇-磷酸氢二钠缓冲液(15∶4∶81)为流动相,流速1.0 mL·min-1,东莨菪碱、阿托品检测波长210 nm(0～15 min),东莨菪内酯检测波长为344 nm(15.1～30 min),柱温30℃。结果:东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的线性范围分别为0.04～3.95,0.04～4.10,0.05～0.54μg(r=0.9999);平均回收率(n=6)分别为97.58%(RSD=1.3%),98.65%(RSD=1.3%),98.42%(RSD=1.8%)。结论:本文方法简便、准确,可以用于华山参滴丸中东莨菪碱、阿托品及东莨菪内酯的含量测定。     

十味降糖胶囊葛根中葛根素的HPLC含量测定

目的建立HPLC法测定十味降糖胶囊中葛根素含量测定的方法。方法采用RP-HPLC法测定。用AgilentXDB C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-磷酸盐溶液(20∶80)为流动相,流速为1mL.min-1,检测波长250nm,柱温为室温,进样量为10μL。结果葛根素保留时间约为27min左右,与其他峰的分离度大于2.0。葛根素的线性范围为0.024~0.476μg,r=0.9999,平均加样回收率为98.81%(n=5)。结论该方法简便快速,结果准确可靠,可用于十味降糖胶囊中葛根素的高效液相色谱法含量测定。     

医院船海外人道主义救援不确定性的情景分析探讨

目的通过研究,找到医院船海外人道主义救援过程中的风险因素,提出对策,提升救援效率。方法通过对医院船执行海外人道主义救援任务人员总结的294篇文献的回顾,对海外人道主义救援所处内外部环境与救治流程的不同环节进行分析,在此基础上,运用情景分析方法,发现和识别可能影响救治效率的风险因子。结果根据对风险因子产生影响的因素作为情景分析的关键纬度,确定信息因素、技术因素、病源因素和语言因素为关键维度,依次构建不同情景,找出薄弱环节。结论提出采用智能化方法应对技术不确定性,构建一体化数字平台应对信息不确定性的策略。     

疗养员突发昏迷的几种常见情况及紧急处理

昏迷是脑功能的严重障碍，主要是大脑皮层下网状结构发生高度抑制的一种状态，临床上表现为意识丧失，运动、感觉和反射等功能障碍，以及任何刺激均不能唤醒疗养员。引起昏迷的原因较复杂，尤其在急性期症状重，疗养员不能诉述症状，也不能配合查体，常导致误诊，延误救治。针对疗养院工作特点，疗养员年龄偏大，对可能出现昏迷的几种常见情况作以下分析。     

硼替佐米基础化疗方案对初诊多发性骨髓瘤患者血小板聚集功能和血栓风险分析

目的 分析以硼替佐米(bortezomib,BTZ)为基础的化疗(不含免疫调节剂)方案治疗初治多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者的血小板聚集功能变化和血栓发生风险.方法 选取2018年1月～2020年1月在我院诊治的40例初治MM患者,使用以BTZ为基础的化疗(不含免疫调节剂)方案进行治疗.记录...