羊膜间充质干细胞移植治疗急性肾损害

BACKGROUND:Recent researches have reported that bone marrow mesenchymal stem cells transplantation can be used for the treatment of acute kidney injury, and human amnion-derived mesenchymal stem cells have a good therapeutic effect in repairing other tissues and organs injury. OBJECTIVE:To investigate the effect of the human amnion-derived mesenchymal stem cells transplantation on cisplatin-induced acute kidney injury. METHODS:Human amnion-derived mesenchymal stem cells were isolated, cultured and identified in vitro. Male ICR mice were randomly divided into three groups: normal control group, model group, human amnion-derived mesenchymal stem cells group, and mices in the model group and human amnion-derived mesenchymal stem cells group were used to establish acute kidney injury models. In the human amnion-derived mesenchymal stem cells group, 0.3 mL human amnion-derived mesenchymal stem cells with the concentration of 1.0×1010/L were injected into the mice via tail vein at 8 days; mice in the model group and normal control group were injected with normal saline in the same dose. RESULTS AND CONCLUSION:At 17 days after the establishment of cisplatin-induced acute kidney injury model by human amnion-derived mesenchymal stem cells transplantation, renal function examination results demonstrated that compared with model group, the blood urea nitrogen and serum creatinine levels in human amnion-derived mesenchymal stem cells group were significantly increased, and reached to the levels in normal control group. Hematoxylin-eosin staining results showed the clear and complete renal organizational structure with rich tubules in the human amnion-derived mesenchymal stem cells group, the integrity and structure were similar to those of the mice in the normal control group, but the pathological changes of the human amnion-derived mesenchymal stem cells group were significantly improved when compared with model group. At 7 days after human amnion-derived mesenchymal stem cells transplantation, double labeling immunofluorescence results showed there was a large number of humanamnion-derived mesenchymal stem cells colonization and distributionin in the nephridial tissue, a few MAB1281-FITC positive cells derived from human amnion-derived mesenchymal stem cells also found in the epithelium of kidney tubules. The human amnion-derived mesenchymal stem cells transplantation could promote the recovery of acute kidney injury.     

斑秃患者外周血CD4~+ CD25~+ Treg细胞计数及TGF-β_1的表达

目的通过检测斑秃患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞计数、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达水平,探讨斑秃的发病机制。方法采用流式细胞技术检测50例未治疗的斑秃患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞的水平变化,ELISA法检测血清中TGF-β1含量,并进行相关性分析,以30例健康者作为正常对照。结果斑秃患者组外周血CD4+CD25+Treg细胞占T淋巴细胞的比率和血清TGF-β1浓度均低于正常对照组(P均<0.01),且重型患者组显著低于正常对照与局限型患者组(P<0.01),局限型患者组低于正常对照组(P<0.05)。斑秃患者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平,血清中TGF-β1含量均与SALT评分呈显著负相关(r=-0.566,-0.471;P均<0.01),而两者呈显著正相关(r=0.584,P<0.01)。结论斑秃患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞与血清中TGF-β1呈一定相关性,且两者与斑秃病情的严重程度相关;CD4+CD25+Treg细胞的数量减少和TGF-β1表达降低可能与斑秃的细胞免疫失调有关。     

人VEGF基因腺病毒表达载体修饰大鼠骨髓间充质干细胞

目的 探讨含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因腺病毒表达载体Ad-VEGF转染大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的可行性.方法 采用贴壁培养筛选法富集大鼠BM-MSCs.将HEK293细胞中扩增并经效价分析后的Ad-VEGF转染大鼠BM-MSCs,通过对细胞转染效率、生长和活力的观察分析,以确定理想的感染复数(MOI)值.结果 本实验经HEK293细胞扩增制备的Ad-VEGF的病毒效价达8×108 pfu/ml;当MOI值为50时,Ad-VEGF转染大鼠BM-MSCs效率可达最高值53％;而MOI值高于50时,Ad-VEGF转染对BM-MSCs活性抑制明显.结论 成功实现Ad-VEGF转染大鼠BM-MSCs,其最适MOI值为50.     

我院加强设备管理的做法及体会

在医院硬件建设中,医疗设备的合理使用与宏观管理对医院的影响举足轻重.医疗设备作为医院相互竞争、提高自身价值的手段,已普遍得到重视.现就我院设备管理谈几点体会.     

杜仲叶通过Shp2激活Erk1/2促进BMSCs增殖的研究

目的 研究杜仲叶提取物对大鼠BMSCs的增殖作用及其分子机制.方法 使用密度梯度离心和贴壁培养法从SD大鼠股骨骨髓中获取BMSCs,通过流式细胞仪检测细胞表面抗原；分别用0,5,20,60,100 mg/ml的杜仲叶提取物和20mg/ml杜仲叶提取物+10 μmol/L Shp2抑制剂NSC87887处理BMSCs,2d后BrdU检测细胞增殖情况；用无血清无酚红培养基饥饿大鼠BMSCs 6 h后,一组分别加入0,5,20,60,100 mg/ml的杜仲叶提取物处理15 min,另一组用10 μmol/LShp2抑制剂处理预处理2h后加入20 mg/ml杜仲叶提取物处理15 min,Western blot检测p-Shp2(Tyr580)和Erk1/2磷酸化水平的变化.结果 流式细胞仪细胞表面抗原检测显示CD29、CD90呈阳性,CD34、CD45呈阴性；BrdU结果显示杜仲叶提取物促进BMSCs增殖,并具有浓度依赖性,NSC87887可以抑制其促进作用；杜仲叶提取物可以诱导BMSCs的p-Shp2 (Tyr580)和Erk1/2磷酸化水平升高,而对诱导Erk1/2磷酸化的促进作用是通过激活Shp2来完成的.结论 杜仲叶提取物通过Shp2/Erk途径促进大鼠BMSCs增殖.     

氯胺酮-异丙酚复合麻醉在小儿手术中的应用

异丙酚具有起效快、时效短和苏醒迅速等特点，特别适合短小手术的麻醉。但异丙酚镇痛作用弱，大剂量或注射速度过快对呼吸、循环系统有明显的抑制作用。为此，我们观察连续静脉滴注异丙酚，配合小剂量氯胺酮用于外科短小手术的麻醉，对循环功能血氧饱和度及麻醉苏醒的影响。１资料与方法１．１一般资料。ＡＳＡＩ级（外科）小儿腹股沟斜疝和鞘膜积液３０例，年龄４～９岁，病儿术前１Ｗ内无上呼吸道感染，心肺疾病或贫血，手术时间 ２５～４０ ｍｉｎ。１．２方法。麻醉前常规禁食、禁饮１２ ｈ，术前１ｈ肌注阿托品 ０．０１～０．１５ ｍ…     

β-榄香烯诱导小鼠肝癌细胞早期凋亡

目的 观察β－榄香烯诱导小鼠肝癌HcaF细胞早期凋亡的作用。方法 Annexin－V-FTTC标记后FCM分析细胞早期凋亡,结果 50μg/mlβ－榄香烯作用2h可诱导HcaF细胞早期亡,而大剂量（100－200μg/ml）则呈现明显细胞毒作用。结论 β－榄香烯诱导小鼠肝癌细胞早期凋亡呈剂量依赖性;Annexin－V标记法是判断细胞早期凋亡敏感而特异的指标。     

人脐血清对人脐带血间充质干细胞生物学特征与衰老的影响

目的：探讨人脐血清（human umbilical cord blood serum,CBS）对体外培养人脐血间充质干细胞（human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCB-MSCs）基本生物学特征的影响。方法：密度梯度离心分离脐带血单个核细胞,以含3%CBS加7%胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）（CBS组）或10%FBS（FBS组）的完全培养基培养hUCB-MSCs,流式细胞术检测细胞表面分子与细胞周期,显微镜下测定细胞表面积和表达β-半乳糖苷酶细胞百分率,MTT法检测光密度值、绘制生长曲线。结果：CBS组和FBS组均表达CD44、CD105、CD90、CD73,不表达CD45、CD34、CD11b、CD19和人白细胞DR抗原（human leukocyte antigen DR,HLA-DR）,但与FBS组比较,CBS组表达CD90细胞百分率更低,G0/G1期细胞比例较少,细胞增殖指数较高（P<0.05）且细胞表面积也明显更小（P<0.05）。CBS组生长曲线较FBS组左移,峰值更高,细胞倍增时间48.37 h,FBS组则为54.43 h。FBS组β-gal染色阳性细胞百分率明显高于CBS组（P<0.05）。结论：部分CBS合用FBS培养hUCB-MSCs能更好地促进细胞增殖,并更好地保持hUCB-MSCs的基本生物学特征和延缓细胞的衰老。     

习惯性流产伴染色体核型异常21例分析

采用培养的外周血淋巴细胞,对76对习惯性流产夫妇152例样品进行染色体核型遗传学分析.发现异常染色体核型21例,其中女18例、男3例,总检出率为13.8%.在检出的21染色体异常核型中含片段易位17例(包括平衡易位11例,罗氏易位6例)、插入2例、缺失和臂间倒位各1例,平衡易位和罗氏易位分别占全部异常核型的52.4%和28.6%,提示习惯性流产夫妇染色体畸变发生率高.认为降低习惯性流产的发生率和提高其病因诊断率,应重视婚前遗传学筛查并对流产夫妇进行遗传学检测.     

罗格列酮经PPARγ受体介导HL-60细胞成熟分化

目的：研究人过氧化物酶体增殖物激活受体1（PPARγ）在白血病HL-60细胞分化中的作用．方法：采用Li—pofectamine2000脂质体进行HL-60细胞质粒转染．实验分单纯HL-60细胞培养组,空载体pIRES2-EGFP转染组,10μmol／L罗格列酮干预组和10μmol／L罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染组．荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达．流式细胞仪检测转染效率,并对转染细胞成熟粒．单细胞特异性标志CD11b和CD14的表达进行分析．结果：转染的HL-60细胞可见绿色荧光表达,phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染效率为55％．流式细胞仪检测结果表明,罗格列酮干预组和罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染组的CD11b＋和CD14＋细胞检出率均显著高于未转染细胞组与空载体转染组（P〈0．05）,且罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染具有协同效应;而未转染细胞组与空载体转染组2种表型细胞百分率差异均无统计学意义（P〉0．05）．结论：罗格列酮可通过激活PPARγ促进HL-60细胞向粒-单细胞成熟分化,有望成为治疗白血病的候选药物．