稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株的构建及其受体拮抗剂的初筛

目的:构建稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株,并初筛具有CysLT2受体拮抗活性化合物。方法:采用Lipofectamine 2000将质粒pcDNA3.1(+)-hCysLT2转染至HEK293细胞中,用96孔板有限稀释法挑选阳性单克隆细胞株,以RT-PCR和免疫荧光法检测hCysLT2基因的表达。稳定表达hCysLT2受体的HEK293细胞株,以激动剂LTD4诱导细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)增高为指标,初步筛选有拮抗作用的化合物。结果:转染后的HEK293细胞中挑选12个单克隆细胞株,11株高表达hCysLT2受体。阳性刺激物ATP为50μmol/L及LTD4 100 nmol/L能升高[Ca2+]i。AP-2100984抑制LTD4诱导的hCysLT2-HEK293细胞[Ca2+]i升高,CysLT1受体选择性拮抗剂无抑制作用。新合成化合物DXW2、DXW3、DXW4、DXW5、DXW9、DXW25、DXW26、DXW29、DXW35在1μmol/L能显著抑制LTD4引起的[Ca2+]i升高,其中DXW4和DXW5的IC50分别为0.25μmol/L和7.5μmol/L。结论:成功构...     

大鼠GPR17基因真核表达载体的构建及其功能鉴定

目的:构建大鼠GPR17(rGPR17)基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并对其功能进行初步研究.方法:从大鼠脑组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增rGPR17 cDNA,与载体pcDNA3.1(+)连接,并转化到大肠杆菌DH5α以获得重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,以PCR、双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1(+)-rGPR17通过脂质体转染方法,转染HEK293细胞,RT-PCR、免疫荧光法检测rGPR17的表达,Fluo-4测定激动剂LTD_4处理后细胞内钙变化.结果:RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17构建成功,并在HEK293细胞获得表达,加入外源性激动剂LTD_4可诱导细胞内钙的增加.结论:成功构建了rGPR17的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rGPR17,并在HEK293细胞功能性表达,为GPR17受体及其拮抗剂的研究提供了基础.     

臂外侧皮瓣修复手部皮肤缺损12例疗效观察

目的 探讨臂外侧皮瓣修复手部皮肤缺损的临床效果.方法 收集12例手部皮肤缺损患者,采用游离臂外侧皮瓣修复皮肤缺损,术后随访其疗效.结果 皮瓣一期全部成活,供区伤口直接缝合或植皮,一期愈合;所有12例均得到随访,随访时间8个月至3年,平均12个月,皮瓣外观稍臃肿,质地和感觉恢复较好;优6例,良4例,可1例,差1例.结论 臂外侧穿支皮瓣营养血管解剖恒定,皮瓣质地和感觉恢复好,是修复手部外伤后中、小面积皮肤缺损的一种有效可行的方法.     

参麦总皂甙抗肿瘤作用的实验研究

[目的]观察参麦总皂甙的抗肿瘤作用和化疗增效作用。[方法]通过建立小鼠移植性S180肿瘤模型,观察参麦总皂甙对肿瘤生长的抑制作用,并且观察其对环磷酰胺抗肿瘤的增效作用。[结果]参麦总皂甙低、中、高剂量组均能抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长,抑瘤率分别达21·34%、35·37%、42·69%,呈量效关系;对S180肉瘤小鼠生存期有明显延长作用,延长率分别为31·62%、33·76%、61·75%;参麦总皂甙低、高剂量合用环磷酰胺,对小鼠肉瘤S180有显著的化疗增效作用,并减轻环磷酰胺的免疫抑制作用。[结论]参麦总皂甙对移植性肿瘤有明显的抑制和化疗增效作用。     

参麦注射液对老年大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡干预作用

目的:观察参麦注射液对缺血再灌注致老年大鼠心肌损伤与细胞凋亡的干预作用。方法:采用结扎冠状动脉左前降支后再通的方法,复制老年大鼠心肌缺血再灌注的动物模型,观察心肌的病变程度;DNA电泳及原位末端标记法检测心肌细胞凋亡。结果:参麦注射液治疗组的梗死面积小于再灌注组;DNA电泳发现再灌注组呈凋亡的典型表现,参麦治疗组梯形条带中DNA含量较心肌缺血再灌注明显减少;TUNEL染色发现再灌注组有大量的阳性标记,且积聚成团,参麦治疗组较再灌注组明显减少。结论:参麦注射液对缺血再灌注心肌损伤具有显著的保护作用,参麦可抑制缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡发生,并具有量效关系。     

半胱氨酰白三烯受体CysLT1 R和CysLT2 R以及GPR17在帕金森病模型小鼠脑内的表达分布

目的:探讨MPTP小鼠帕金森病(PD)模型脑内半胱氨酰白三烯受体CysLT1R、CysLT2R和GPR17表达分布特征。方法:C57BL/6小鼠连续5 d皮下注射MPTP 25 mg/kg诱导PD模型,第10 d处死动物。应用免疫组化方法,观察CysLT1R、CysLT2R和GPR17在黑质表达的变化,并用免疫双标方法进行细胞定位。结果:正常小鼠黑质中有CysLT1R、CysLT2R和GPR17表达,主要表达在TH阳性多巴胺能神经元以及小胶质细胞,CysLT2R还表达于星形胶质细胞;其中,在多巴胺能神经元中91%表达GPR17,77%表达CysLT1R,52%表达CysLT2R。与对照组比较,PD模型组小鼠黑质中TH阳性细胞数显著减少;同时CysLT1R、CysLT2R和GPR17阳性细胞数以及表达CysLT1R、CysLT2R和GPR17的多巴胺细胞数均显著减少。在正常小鼠纹状体中有CysLT1R、GPR17表达,主要表达于神经元;而CysLT2R表达很少,主要表达于星形胶质细胞。PD模型组小鼠纹状体中CysLT1R、GPR17阳性细胞数减少;但CysLT2R表达升高,主要表达于增生的星形胶质细胞。结论:CysLT1R、CysLT2R和GPR17可能参与MPTP所致的小鼠PD损伤过程。     

参麦注射液对移植性肿瘤血管生成的影响

目的：研究参麦注射液(红参，麦冬)对肿瘤组织内血管生成和细胞增殖核抗原表达的影响，探讨参麦抗肿瘤的机理。方法：通过建立小鼠移植性S180肿瘤模型，从整体水平上观察参麦对肿瘤生长的影响，并采用免疫组织化学方法，检测肿瘤组织中第Ⅶ因子相关抗原(vWF)和细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果：参麦具有抑制肿瘤生长作用；参麦能降低肿瘤组织中微血管密度，能减少PCNA的表达。结论：抗血管生成是参麦抗肿瘤机理之一。     

半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂普鲁司特调节SK-N-SH细胞分化

目的:观察半胱氨酰白三烯受体激动剂LTD4以及受体1(CysLT1)拮抗剂普鲁司特对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞分化的影响。方法:以维A酸为阳性对照,观察LTD4、普鲁司特、LTD4 普鲁司特诱导SK-N-SH细胞形态学变化;用免疫印迹法观察SK-N-SH细胞CysLT1和CysLT2受体的表达;用免疫荧光法观察神经元分化标记物微管相关蛋白(MAP-2)的表达。结果:免疫印迹显示,SK-N-SH表达CysLT1受体和CysLT2受体,CysLT2受体表达较多。形态学结果显示,维A酸、普鲁司特、LTD4 普鲁司特诱导SK-N-SH细胞发生形态学改变,表现为胞体变小,有明显的突起生长;而LTD4无明显作用。免疫荧光结果显示,在对照组和普鲁司特组MAP-2主要分布于胞体;在维甲酸组MAP-2除了分布于胞体外,还分布于突起。普鲁司特增加MAP-2阳性细胞数。结论:CysLT1受体拮抗剂普鲁司特参与SK-N-SH细胞分化的调节。     

参麦有效部位对血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨参麦中提取的总皂苷、总多糖对血管内皮细胞增殖和迁移的影响。方法:用MTT法检测不同浓度的总皂苷、总多糖及总皂苷 总多糖对ECV-304、胃癌SGC-7901细胞增殖及SGC-7901条件培养液诱导ECV-304增殖的影响;用琼脂糖刮除法检测它们对血管内皮细胞迁移的影响。结果:当参麦总多糖浓度为0.18~2.44mg/mL时,对ECV-304、胃癌SGC-7901增殖及SGC-7901诱导ECV-304增殖均无影响;当参麦总皂苷浓度为0.05~0.8mg/mL时,对胃癌SGC-7901增殖无影响,而对ECV-304及SGC-7901条件培养液诱导ECV-304增殖有抑制作用,抑制率为13.16%~62.77%。参麦总多糖对ECV-304迁移没有影响,参麦总皂苷对ECV-304迁移有明显抑制作用,抑制率为42%~80%。总皂苷 总多糖抑制ECV-304增殖和迁移作用与参麦总皂苷相比差异无显著性。结论:参麦中提取的总皂苷对血管内皮细胞和胃癌细胞条件培养液诱导的血管内皮细胞增殖具有抑制作用,并能抑制血管内皮细胞的迁移,是参麦抗血管生成的有效部位。     

米诺环素对大鼠和小鼠脑外伤的部分保护作用

目的：研究半合成四环素类药物米诺环素对中枢神经损伤的保护作用。方法：在大鼠开放性脑外伤、小鼠闭合性脑外伤和脑冷冻伤3种脑损伤模型，于手术前2d开始，每天2次预先给予米诺环素45mg／kg ip；手术前30min及手术后1h，各给药1次；手术后第1、2天，每天给药1次。观察手术后行为学变化，14d后计算脑损伤面积及神经元数量。结果：米诺环素对大鼠开放性脑撞击伤，除了加快肢体功能（爬板角度）恢复外，对其他指标无明显作用；对小鼠脑闭合伤，能抑制神经元减少，但对行为学变化无明显作用；对小鼠脑冷冻伤，能减少死亡率及损伤面积，对神经元减少的作用不明显。结论：米诺环素对不同动物的不同脑外伤有部分保护作用。