Runt相关转录因子3在人结肠癌HCT-116/5-FU耐药细胞株中的表达及其与耐药的相关性

目的 建立耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的人结肠癌细胞株HCT-116/5-FU,初步探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)与结直肠癌耐药的关系。方法 采用低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击法建立人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,CCK-8法检测5-FU对亲本株HCT-116及耐药株HCT-116/5-FU的半数抑制浓度(IC₅₀值),绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间(TD);qRT-PCR和Western blot法检测亲本株HCT-116细胞及耐药株HCT-116/5-FU细胞中RUNX3、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药蛋白(LRP)的mRNA和蛋白表达。采用siRNA技术敲低HCT-116细胞中RUNX3的表达,分为RUNX3敲低组(si-RUNX3-1组、si-RUNX3-2组)和阴性对照组(si-NC组),qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平验证RUNX3的敲低效率;CCK-8法测定si-RUNX3组和si-NC组的IC₅₀值,Western blot法测定两组中P-gp、MRP1和LRP的表达情况。结果 成功构建稳定的人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,耐药倍数为7.7倍;HCT-116/5-FU耐药细胞株群体TD较HCT-116亲本株明显延长(P<0.001),耐药细胞群体TD是亲本细胞的1.38倍(P=0.002),耐药株细胞形态发生变化。耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3 mRNA表达水平较亲本细胞株HCT-116明显降低(P=0.048),P-gp(P=0.008)、MRP1(P=0.001)和LRP mRNA(P=0.001)表达水平较亲本细胞株HCT-116明显升高;耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3蛋白质相对表达量较亲本细胞株HCT-116明显降低(P<0.001),P-gp、MRP1、LRP蛋白的相对表达量较亲本细胞株明显升高(P均<0.001)。成功构建了RUNX3低表达的HCT-116细胞模型,si-RUNX3-1组RUNX3 mRNA的表达与si-NC组相比差异无统计学意义(P=0.064),si-RUNX3-2组明显低于si-NC组(P=0.034);si-RUNX3-1组和si-RUNX3-2组RUNX3蛋白的表达量均明显低于si-NC组(P均<0.001),si-RUNX3-2组的敲低效率更高。选用si-RUNX3-2组完成后续实验,si-RUNX3组的IC₅₀值较si-NC组明显升高,下调RUNX3的表达能明显降低HCT-116细胞对5-FU的敏感性(P<0.001);si-RUNX3组的P-gp、MRP1和LRP蛋白相对表达量均明显高于si-NC组(P均<0.001)。结论 RUNX3表达下调能降低人结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性,可能与RUNX3表达的降低上调P-gp、MRP1和LRP等耐药蛋白表达,从而增加细胞的耐药性有关。     

新时期师医院建设存在的问题与对策

1．1 观念陈旧 主要表现在后送频繁,达不到本级收治要求,经常是“大病就转院、小病对付看”,“坐、等、靠”的思想比较严重。与联勤保障后师医院应担负的各种职能、任务不相符。     

全身麻醉术后口渴的研究进展

对全身麻醉术后病人口渴的影响因素、评估方式及干预措施进行综述,为后续开展相关研究提供参考依据。     

七白膏方剂中药提取物对离体人黑素细胞的作用

目的:评价七白膏方剂中的药物对离体培养人黑素细胞的作用.方法:建立体外人表皮黑素细胞模型.醇提法提取各种中药活性成分.以熊果苷为实验对照,检测各种中药提取液对于离体培养人黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的干预作用.结果:低浓度白芷对黑素细胞增殖呈抑制作用(P＜0.05),但高浓度时略呈激活作用.其它中药对黑素细胞增殖和酪氨酸酶活性有抑制作用.不同中药提取液对于黑素合成抑制作用不同.结论:各种中药提取液可影响黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成,从而干预体外人黑素细胞的代谢.     

非血缘及HLA配型不合移植预防急性移植物抗宿主病13例

目的:探讨非血缘及人类白细胞抗原配型不合的异基因外周血造血干细胞移植时,环孢素A、麦考酚酸酯、抗胸腺细胞球蛋白、白细胞介素11及短程甲氨蝶呤联合预防急性移植物抗宿主病的疗效.方法:2004 09/2008-11海口市人民医院采用环孢素A等五联用药预防非血缘及血缘HLA配型不合异基因外周血造血干细胞移植患者13例.供受者HLA相合情况:非血缘供者7例,单倍型移植3例,人类白细胞抗原1个位点不合同胞供者3例.具体预处理方案为移植前7d开始,环孢素A5-10mg/(kg·d),12 h静滴1次,2次/d,无呕吐后改为口服维持:移植前7 d开始,麦考酚酸酯1次/d;移植前5 d～移植前2 d予抗胸腺细胞球蛋白2.5 mg/(kg·d);移植前2 d～移植后10 d予白细胞介素11,1.5 mg/d皮下注射;移植后1 d予甲氨蝶呤15 mg/m2,移植后3,6,11 d各予甲氨蝶呤10 mg/m2静脉滴注.临床若无移植物抗宿主病出现,3～6个月逐渐减量至停药,单倍型移植者适当延长.移植前3 d,供者行重组人粒细胞集落刺激因子皮下注射,于用药第4,5天采集外周血干细胞,并分别于当天由锁骨下静脉输入患者体内,回输单个核细胞数为(7.82～9.1 1)×108/kg,CD34+细胞数为(2.9～7.7)×106/kg.结果:13例患者均获得造血重建,急性移植物抗宿主病的发生率为46%(6/13),Ⅲ～Ⅳ度急性移植物抗宿主病发生率为8%(1/13).随访至2009-04,除1例患者尚未能到公共场所外,余12例目前均正常生活或工作.结论:环孢素A、麦考酚酸酯、抗胸腺细胞球蛋白、白细胞介素11及短程甲氨蝶呤联合预防急性移植物抗宿主病可获得较好的疗效.     

一种人表皮黑素细胞透射电镜观察方法

目的：探讨建立人表皮黑素细胞透射电镜标本制备方法。方法：以PET聚酯薄膜为支持物培养人表皮黑素细胞,纵向切片透射电镜观察。结果：人表皮黑素细胞可在PET聚酯薄膜上培养生长,有利于观察人表皮黑素细胞及其树突状突起的超微结构。结论：PET聚酯薄膜可作为支持材料应用于人表皮黑素细胞体外培养,本法可用于多极细胞超微结构的观察。     

CYP3A4基因启动子受AFB1调控位点的鉴定

目的 构建不同长度人CYP3A4基因启动子荧光素酶报告质粒并予鉴定,检测L02细胞中各荧光素酶报告质粒相对荧光素酶活性,并分析AFB1处理对其影响,找出AFB1调控人CYP3A4基因可能的启动子区域.方法 采用PCR技术扩增不同长度人CYP3A4基因启动子片段,将其插入荧光素酶报告质粒pGL3-basic中荧光素酶编码序列之前,构建含不同长度CYP3A4启动子的报告质粒pGL3-basic-CYP3A4-1～7,将报告质粒转染L02细胞,检测其荧光素酶活性来表示CYP3A4对应启动子片段的转录活性.检测各报告质粒在AFB1处理下与DMSO对照相比荧光素酶活性上升的比例,找出AFB1上调CYP3A4启动子转录活性的作用区域.结果 报告质粒测序结果证实,上述荧光素酶报告质粒均构建成功.将报告质粒转染L02细胞,AFB1和DMSO处理后检测结果表明pGL3-basic-CYP3A4-1～6和pGL3-basic-CYP3A4-7相对荧光素酶活性受AFB1上升比率差异有统计学意义(P＜0.05),pGL3-basic-CYP3A4-1至pGL3-basic-CYP3A4-6这6个报告质粒相对荧光素酶活性受AFB1上升比率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建了人CYP3A4基因不同长度启动子片段的荧光素酶报告质粒,并初步确定AFB1可以通过调控CYP3A4启动子-200～0 nt的结合位点来上调CYP3A4的转录活性.     

输血前患者不规则抗体筛查及鉴定的临床意义探讨

目的:分析输血前患者不规则抗体的产生、分布情况及其临床意义.方法:采用微柱凝胶抗人球蛋白卡对85645例输血前患者进行不规则抗体筛查并鉴定.结果:不规则抗体的产生率为0.37％(313/85645),特异性抗体201例(64.22％),其中Rh系统患者最多,达121例(38.67％).针对不规则抗体检出率,外科(0.5...     

基因打靶技术在寄生虫学研究中的应用

基因打靶技术(gene targeting),又称基因敲除(gene knockout)是20世纪80年代发展起来的一项重要的分子生物学技术,是在生物体内诱发精确、定向的基因删除或替代,从而对细胞基因组进行定位、定量的改变.目前基因打靶已经被证明为精确修饰基因组比较有效的方法.     

利用OPD scan Ⅲ与传统裂隙灯法评估Toric IOL轴位的对比研究

目的：分析利用OPD Scan Ⅲ(光程差分析仪)与传统裂隙灯法评估散光矫正型人工晶状体(Toric IOL)轴位的一致性和准确性。

方法：前瞻性观察对照研究。选取2018-07/2019-10在我院行白内障超声乳化摘除联合Toric IOL植入术的患者118例156眼。术后1wk,1、3mo随访观察残余散光,并分别在小瞳孔下和散瞳后采用OPD scan Ⅲ测量Toric IOL轴位(轴位眼内散光法和轴位OPD法),同时采用传统裂隙灯法测量Toric IOL轴位(轴位Slit法),分析三种方法测量结果的差异性和一致性,并计算三种方法测量结果与目标轴位相比的IOL轴位偏差度(LAD)。

结果：术后1wk,1、3mo本组患者残余散光度均较术前明显降低(P<0.05),术后3mo残余散光度≤0.75D者占73.7%。术后3mo,轴位Slit法、轴位OPD法、轴位眼内散光法测得Toric IOL轴位分别为111.0°(10,178)°、113.5°(12,180)°、113.0°(15,178)°。一致性分析结果显示,术后3mo,轴位OPD法与轴位Slit法、轴位眼内散光法与轴位Slit法、轴位OPD法与轴位眼内散光法测量结果差值的均值分别是-0.58°、-0.19°、0.40°,均接近于0°,一致性较高,95%LoA分别为(-7.01～5.84)°、(-12.44～12.07)°、(-10.69～11.49)°。术后3mo,轴位Slit法、轴位OPD法、轴位眼内散光法测得LAD≤5°的患者占比分别为82.0%、80.1%、59.0%。

结论：OPD scan Ⅲ可以散瞳直接测量Toric IOL轴位,是一种客观准确的测量方法,可以代替传统裂隙灯法测量轴位,避免主观局限性,也可在小瞳孔下通过眼内散光法测出Toric IOL轴位,结合眼科临床有一定的实际应用价值。