小鼠Reelin 基因启动子克隆鉴定及生物信息学分析

目的克隆小鼠Reelin基因启动子区并分析其潜在DNA甲基化位点和转录因子结合位点。方法根据NCBI上小鼠Reelin 5’非翻译区序列设计引物,利用高保真PCR方法克隆昆明小鼠Reelin启动子区序列,并进行TA克隆,测序鉴定。利用亚硫酸氢钠处理基因组DNA,通过PCR技术和测序技术对Reelin启动子-636 bp至-135bp序列甲基化情况分析。应用Methyl Primer Express software V1.0和TFSEARCH软件分析该区域甲基化位点和转录因子结合位点。结果成功克隆了小鼠Reelin基因启动子区0至-450片段。甲基化测序分析小鼠Reelin启动子区-636 bp至-135 bp序列没有CpG二核苷酸被甲基化。小鼠Reelin翻译起始点0至-450片段利用CpG岛序列分析软件分析显示,该区域C+G含量高达78.71%,CpG含量为14.44%。该区域有120多个潜在转录因子结合位点。结论在小鼠Reelin基因启动子区0～-450发现有一个CpG岛和多个转录因子结合位点,该区域可能在小鼠Reelin基因表达调控起重要作用。     

降钙素基因相关肽对蛛网膜下腔出血模型大鼠脑血管痉挛的影响

目的 研究经枕大池应用降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)大鼠模型脑血管痉挛的影响.方法 64只雄性Wistar大鼠随机分为4组:A组为正常对照组,B～D组在SAH模型建立后,经枕大池分别给予生理盐水、CGRP及腺病毒CGRP.全自动血液分析仪检测脑脊液白细胞、酶联免疫法检测CGRP活性、激光共聚焦显微镜观察循环内皮细胞、激光多普勒血流计检查顶叶皮层局部脑血流、数字减影血管造影检测基底动脉痉挛及血液气体分析仪分析动脉血气.结果 各组大鼠给药前及给药后白细胞数差异无统计学意义(P＞0.05),动脉血气差异无统计学意义(P＞0.05).脑脊液中CGRP浓度:给药48 h后,与对照组比较,B组(0.006±0.003)nmol/L,差异无统计学意义(P＞0.05);C组(1.160±0.170) nmol/L,增加约200倍,差异有统计学意义(P＜0.05);D组(2.071 ±0.412) nmol/L,增加近400倍,差异有统计学意义(P＜0.05).外周血循环内皮细胞计数变化:给药后48 h,C组[(5.56±0.61)个/0.9 μL]较B组[(9.94±0.73)个/0.9 μL]减少(P＜0.01),D组[(5.16±0.61)个/0.9 μL]较C组减少(P＜0.01).顶叶皮层局部脑血流:给药后,与B组比较,C组和D组的脑血流升高,差异有统计学意义(均P＜0.01).基底动脉直径:给药后12 h,D组大鼠[(1.000±0.025) mm]比B组[(0.670±0.028) mm]大13％ (P＜0.05),比C组[(0.900±0.023)mm]大3％(P＞0.05).结论 CGRP经枕大池给药有效改善SAH后的脑血管痉挛,且经枕大池注射腺病毒CGRP效果比CGRP更好.     

低氧预适应对小鼠急性脑梗死缺血半暗带血管新生的影响

目的探讨低氧预适应对小鼠急性脑梗死缺血半暗带血管新生的影响。方法将Blb/c近交系小鼠按照随机数字表法分为:正常对照组(N),无任何处理;假手术组(C),仅行冷光源照射,不注射玫瑰红;急性脑梗死组(CI),光化学法诱导小鼠脑皮质梗死模型;低氧预适应+急性脑梗死组(HP+CI),低氧预适应后复制光化学法诱导小鼠脑皮质梗死模型。应用免疫荧光、激光共聚焦等技术检测模型制作成功后24h和72h脑内缺血半暗带区VEGF、CD31荧光强度变化。结果 N、C组VEGF、CD31脑内皮质极少量表达;CI和HP+CI组小鼠24h VEGF主要表达于脑内缺血半暗带区神经元,72h则主要在缺血半暗带区血管内皮细胞表达;24h、72h CD31均在缺血半暗带区血管内皮细胞表达。CI和HP+CI组缺血半暗带区VEGF、CD31表达明显高于N组、C组(P0.01);HP+CI组在24h、72h时缺血半暗带区VEGF、CD31表达显著高于CI组(P0.01)。经Pearson相关分析,VEGF与CD31表达成正相关。结论低氧预适应通过增加急性脑梗死缺血半暗带区VEGF和CD31的表达,促进血管新生,起到对急性脑梗死缺血性损伤的保护作用。     

痛觉中枢敏感化对偏头痛患者脑血流动力学的影响

目的：观察痛觉中枢敏感化对偏头痛患者脑血流动力学的影响。方法随机分为正常对照组、偏头痛组，应用 CA 症状自评量表，将偏头痛患者分为无 CA 组和 CA 组。应用美国 Ge ViVid e9超声诊断仪，对偏头痛患者发作后2h 进行脑血流动力学测定。结果在入组的108例患者中，偏头痛发病后2 h，72例患者出现 CA，出现率为66.7%，25、20、27人分别出现轻、中、重 CA，出现率分别为23.1%、18.5%、25.1%。72例偏头痛患者有 CA，36例患者无 CA。无 CA、CA 患者脑平均血流速度与正常对照组相比，血流速度显著增加，P 〈0.01；CA 患者与无 CA 患者相比，血流速度明显增加，P 〈0.01。结论偏头痛患者存在脑血流动力学异常，脑平均血流速度增加，在偏头痛中枢敏感化患者中更加显著。     

药理性预适应在缺血性脑损伤中的保护作用及机制研究进展

药理性预适应(pharmacological preconditioning)是在缺血预适应(ischemic preconditioning,IP)基础上发展起来的,通过药物的直接或间接药理作用模拟缺血或低氧,激活机体内源性保护机制,促进内源性保护物质生成,产生组织、细胞保护作用.     

ATP敏感钾通道在心肌药理性预适应中的作用研究进展

短暂非致死性缺血可激活机体内源性保护机制,产生对后继持续性缺血的耐受性,称为缺血预适应(IPC)。用药物模仿缺血性刺激,激发机体内源性缺血缺氧保护机制的产生称为药理性缺血预适应,简称药理性预适应。预适应现象存在于动物机体多种器官,研究显示药理性预适应能有效保护遭受缺血再灌注的心肌细胞。Gross等[1]首先提出ATP敏感钾通道(ATP-sensitive K+channels,KAT-PC)与预适应有关,之后该观点得到国内外众多学者支持,现就KATPC通道在心肌药理性预适应中的作用机制作一综述。1 KATPC的结构和功能1983年Noma利用膜片钳技术首先在豚鼠心肌细胞膜上发现了KATPC,随后证实此通道广泛分布于血管、神经元、骨骼肌等多种组织;1991年Inoue等发现线粒体膜上也存在该通道,故将KATPC分为2类:细胞膜KATPC(sarcolemmal KATP channel,sKATPC)和线粒体膜KATPC(m itochondrial KATPchannel,m itoKATPC)。通过对sKATPC的研究发现,KATPC是由4个内向整流钾通道亚单位和4个ABC结合蛋白家族成员黄酰脲受体亚单位组...     

经鼻给予降钙素基因相关肽促进蛛网膜下腔出血后大脑皮层CD31/PECAM-1表达

目的探讨经鼻应用降钙素基因相关肽(CGRP)对蛛网膜下腔出血(SAH)后大脑皮层血小板内皮细胞粘附分子-1(CD31/PECAM-1)表达的影响。方法将SPF级雄性Wistar大鼠随机分入正常对照组、SAH组、经鼻生理盐水(NS)+SAH、经鼻CGRP+SAH组。用枕大池两次注入自体动脉血法制作SAH模型,CGRP和NS经鼻腔给予。于第二次枕大池注血后3d,将大鼠经心灌注生理盐水后取脑制作冰冻切片,用免疫荧光结合激光共聚焦显微镜检测大脑皮层CD31/PECAM-1表达。结果行为学和解剖学观察证实大鼠SAH模型制作成功。第二次枕大池注血后3d,SAH组和经鼻NS+SAH组大鼠大脑皮层CD31/PECAM-1表达增多,经鼻CGRP+SAH组大鼠大脑皮层CD31/PECAM-1表达进一步增强。结论经鼻应用CGRP可促进SAH后大脑皮层CD31/PECAM-1表达,从而在一定程度上促进血管新生,减轻继发性脑缺血。     

脑淋巴引流阻滞加重蛛网膜下腔出血后大鼠海马神经元凋亡的实验研究

目的 探讨脑淋巴引流阻滞(cerebral lymphatic blockage,CLB)对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后大鼠海马神经元凋亡的影响及相关机制研究.方法 选用健康成年Wistar大鼠,随机分为正常对照组、SAH组、SAH+CLB组.采用枕大池2次注血法建立SAH模型,于第2次注血3d后,采用HE染色及碘化丙碇(PI)染色法观察各组大鼠海马神经元形态结构变化;TUNEL荧光标记法检测原位凋亡情况;免疫组织化学激光共聚焦检测大鼠海马神经元caspase-3和Bcl-2的蛋白表达.结果 (1)HE染色和PI染色可见SAH组大鼠部分海马神经元皱缩,部分呈新月形,凋亡细胞数为(25.36 ±4.02)个;SAH+CLB组神经细胞分布稀疏,核碎裂,可见凋亡小体,周围有空泡形成,凋亡细胞数为(37.82±5.93)个,显著高于SAH组(P<0.01).(2)SAH组和SAH+CLB组TUNEL阳性细胞的表达荧光强度分别为(1.70±0.37)和(2.54±0.53),均高于正常对照组(0.19±0.03),而SAH+CLB组又显著高于SAH组(P<0.01).(3)SAH组和SAH+CLB组caspage-3表达的荧光强度分别为(2.45±0.49)和(2.96 ±0.44),均高于正常对照组,而SAH+CLB组又显著高于SAH组(P<0.01).(4)SAH组和SAH+CLB组Bel-2表达的荧光强度分别为(3.40±0.61)和(2.67 ±0.44)均高于正常对照组,而SAH+CLB组显著低于SAH组(P<0.01).结论 脑淋巴引流阻滞可加重SAH后大鼠海马神经元的凋亡,其机制可能与caspase-3高表达和Bcl-2低表达有关.     

低氧预适应小鼠脑室管膜bcl-2表达和caspase-3活性变化

目的探讨小鼠脑室管膜bcl-2和caspase-3在低氧预适应中的表达变化。方法将Blb／c近交系小鼠随机分为空白对照组（H0组）、低氧对照组（H1组）和低氧预适应组（H4组）。用免疫荧光和激光共聚焦显微镜等技术，测定bcl-2和caspase-3表达的荧光强度。结果H1和H4组的bcl-2表达均显著高于H0组，其中H4组又显著高于H1组。H1和H4组caspase-3的表达显著高于H0组，H4组显著低于H1组。结论低氧预适应过程中，小鼠脑室管膜区通过bcl-2的高表达和caspase-3的低表达，抵御室管膜细胞凋亡，参与脑保护机制。     

椎基底动脉迂曲扩张症的MRI诊断及临床价值

目的 探讨椎基底动脉迂曲扩张症MR和MRA成像方法的诊断价值.方法 对17例椎基底动脉迂曲扩张症患者的MRI和MRA显示的异常血管分布、形态、信号强度进行分析.结果 17例MRI表现为椎基底动脉明显扩张,其中3例同时累及颈内动脉系统.扩张基底动脉直径为4.9～14.8 mm,长度为30.2～33.8 mm,其中7例上下方向折曲走行;10例左右方向迂曲延长;10例颅神经受累.16例在MRI平扫中见后循环梗死灶.结论 MRI和MRA有助于椎基底动脉迂曲扩张症的全面综合评价,可以作为临床诊断首选的检查方法.