mompS-linker-flaA融合基因原核表达载体的构建及诱导表达

目的在嗜肺军团菌主要外膜蛋白S基因(mompS)和鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)基因间加入一段柔性链接头(Linker),以构建mompS-Linker-flaA融合表达载体,并使其在大肠杆菌中表达。方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR分别扩增获得嗜肺军团菌mompS基因和flaA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a( )定向重组,构建含mompS-Linker-flaA基因的重组质粒pET-LpSLF,经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-MOMPS-Linker-FlaA融合蛋白,用SDS-PAGE及Westernblotting进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,我们扩增出了嗜肺军团菌906bp的mompS及1440bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-LpSLF,SDS-PAGE及Westernblot分析显示重组质粒pET-LpSLF在原核系统中得到了表达。结论嗜肺军团菌mompS-Linker-flaA基因在大肠杆菌中得到了表达,为进一步从分子水平研究其免疫原性、免疫保护性及其在临床诊断上的应用价值提供研究基础。     

应用二甲基亚砜体外诱导P19细胞分化为心肌细胞

目的观察P19细胞经二甲基亚砜（DMSO）诱导及不同培养方法,培养形成细胞聚集体并向心肌分化的过程.方法将P19细胞接种于Petri塑料培养皿或铺有0.5%软琼脂的培养皿中,DMSO诱导悬浮培养7 d形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基黏附培养至19 d.观察细胞跳动情况,用α-sarcomeric actin、cardiac Troponin T（cTnT）抗体进行免疫组织化学染色,鉴定细胞分化.结果经DMSO诱导7d,将形成的细胞聚集体用生长培养基黏附培养至15 d,在聚集体周围的生长晕中出现自发性节律跳动的细胞团片,α-sarcomeric actin及cTnT染色阳性,至19d,阳性率分别可达26%和15%.结论 DMSO诱导结合聚集体形成培养方法可诱导P19细胞向心肌细胞分化,并出现自发性有节律跳动.     

类器官技术在头颈部肿瘤中的应用进展

头颈部鳞状细胞癌是全球第六大常见恶性肿瘤,在我国发病率为135.1/10万.头颈部解剖复杂,临床表现多样,早期诊断困难,因此,早诊断早治疗研究探索空间较大.类器官(Organoid)是一种体外3D培养技术,与对应的器官拥有类似的空间组织及生物学功能,是一种较好的肿瘤研究模型.因此,头颈部鳞状细胞癌类器官逐渐受到重视,有...     

入院时卒中严重程度与未接受再灌注治疗合并高血压的急性脑梗死患者早期神经功能恶化的关系

目的 分析未行再灌注治疗合并高血压的急性脑梗死患者早期神经功能恶化的预测因素。方法 采用回顾性病例对照研究,连续入选中山大学附属第五医院高级卒中中心2021-01—2021-12发病72 h内入院的急性脑梗死患者,早期神经功能恶化（END）定义为入院后7 d内美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分增加≥2分。END组和非END组之间进行单因素和多因素分析。多因素Logistic回归分析END的相关因素。针对相关因素计算曲线下面积（AUC）检验该因素的准确性。结果 共225例患者（男153例）,年龄（62.91±12.01）岁。END组40例,非END组185例。END组入院时NIHSS评分、TOAST分型中LAA型比例、前循环卒中比例均显著高于非END组。END组纤维蛋白原、FBG及GHbA1c%高于非END组。Logistic回归分析显示,入院时较高的NIHSS评分、纤维蛋白原水平与END独立相关。ROC曲线分析提示,入院时NIHSS在鉴别END的灵敏度、特异度和曲线下面积分别为70.0%和67.6%,最佳截断值为3.00。结论 未经再灌注治疗的合并高血压的脑梗死患者入院时脑卒...     

急性冠状动脉综合征患者血清中性粒细胞/淋巴细胞比值、血小板/淋巴细胞比值水平对冠状动脉病变程度及院内主要不良心血管事件的评估价值

目的探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)与冠状动脉狭窄程度及院内主要不良心血管事件(MACE)发生的关系。方法收集2018年4月至2020年4月于新疆医科大学第一附属医院初次行冠状动脉造影ACS患者(426例)的临床基本资料、实验室参数,根据住院MACE情况,将纳入的患者分为MACE组(104例)和无MACE组(322例)。根据Gensini评分的三分位数,将患者分为三组:低Gensini组(≤34分,143例),中Gensini组(34~58分,142例),高Gensini组(>58分,141例),使用t检验、方差分析、卡方检验、非参数Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallish H检验、logistic回归分析和受试者工作特性曲线等统计方法对数据进行分析。结果MACE组NLR[4.48(2.42,7.47)比2.82(1.79,4.70),P<0.001]和PLR[133.21(92.88,190.25)比101.03(75.33,134.01),P<0.001]显著高于无MACE组,差异有统计学意义。在基于Gensini评分分组的三组中,低Gensini组、中Gensini组、高Gensini组NLR[3.59(1.56,3.58)比3.47(1.94,5.73)比3.71(2.13,6.21),P<0.001]、PLR[93.98(66.03,127.94)比110.90(88.26,140.79)比120.37(84.58,174.54),P<0.001]比较,差异均有统计学意义。logistic回归分析显示,NLR(OR 1.189,95%CI 1.003~1.409,P=0.046;OR 1.102,95%CI 1.005~1.208,P=0.039)、PLR(OR 1.008,95%CI 1.002~1.014,P=0.021;OR 1.004,95%CI 1.002~1.009,P=0.042)是院内MACE和高Gensini评分的独立危险因素。NLR预测院内MACE发生的截断值为4.516,敏感度为50.00%,特异度为74.53%,曲线下面积(AUC)为0.633(95%CI 0.585~0.679,P<0.001);PLR预测院内MACE发生的截断值为153.103,敏感度为45.19%,特异度为84.78%,AUC为0.666(95%CI 0.619~0.711,P<0.001)。NLR预测高Gensini评分(>58分)的截断值为3.802,敏感度为49.62%,特异度为66.44%(AUC=0.600,95%CI 0.552~0.647,P<0.001);PLR预测高Gensini评分的截断值为153.543,敏感度为37.40%,特异度为84.75%(AUC=0.616,95%CI 0.567~0.662,P<0.001)。结论NLR、PLR作为一种新的炎症标志物,与ACS患者院内MACE的发生和冠状动脉狭窄的严重程度有显著的独立相关性。NLR、PLR作为一种容易获得且价格便宜的炎症指标,可作为有效的炎症标志物广泛应用于鉴别高危患者,从而有助于指导个体化治疗以改善ACS预后。     

血清和肽素水平与急性缺血性卒中患者转归的相关性

目的 探讨血清和肽素水平与急性缺血性卒中患者转归的关系.方法 纳入发病24 h内的首次缺血性卒中患者,应用酶联免疫吸附法检测血清和肽素水平,应用美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评估基线卒中严重程度.在发病后90 d时应用改良Rankin量表(modified Rankin Scale,mRS)评分评价转归,0～2分定义为转归良好.年龄和性别相匹配的健康体检者作为对照者.结果 共纳入连续86例发病24 h内首次缺血性卒中患者和50名年龄和性别相匹配的健康体检者作为对照者.急性缺血性卒中患者发病24 h、7d和14 d血清和肽素水平分别为(7.81±0.66) pmol/L、(4.78±1.76) pmol/L和(2.82±1.42) pmol/L,均显著高于对照组[(1.67±0.56) pmol/L;P均＜0.05].86例患者中,74例(86.05％)转归良好,12例(13.95％)转归不良.转归不良组年龄[(67.64 ±9.62)岁对(61.12±7.31)岁;t=-3.420,P=0.020]、NIHSS评分[(14.16±4.22)分对(6.96±2.04)分;t=-8.26 3,P＜ 0.001]、基线收缩压[(166.06±13.42)mmHg对(154.12±11.69)mmHg;t=5.216,P=0.037;1mmHg=0.133 kPa]、空腹血糖[(8.79±2.98) mmol/L对(6.92±2.24) mmol/L;t=2.076,P=0.041]、C反应蛋白[(7.02±1.72) mg/L对(4.07±1.58) mg/L;t=-1.724,P=0.019]、24 h时和肽素水平[(9.67±2.28)p mol/L对(6.88±2.82)pmol/L;t=13.962,P＜ 0.001]、7d时和肽素水平[(8.22±2.14) pmol/L对(2.97±2.04)pmol/L;t=20.564,P＜0.001]、14 d时和肽素水平[(4.77±1.86)p mol/L对(2.02±0.76) pmol/L;t=8.428,P=0.032]以及心房颤动(33.33％对8.11％;x2=4.986,P=0.036)、大动脉粥样硬化性卒中(41.67％对21.62％;x2 =6.729,P=0.038)、心源性栓塞(33.33％对8.11％;x2=4.986,P=0.036)的患者构成比均显著高于转归良好组,小动脉闭塞性卒中的患者构成比显著低于转归良好组(16.67％对70.27％;x2=16.972,P=0.041).多变量logistic回归分析显示,血清24 h(优势比2.424,95％可信区间1.920 ～ 3.562;P＜0.001)和7d(优势比2.326,95％可信区间1.768 ～3.482;P＜0.001)时和肽素水平以及基线NIHSS评分(优势比2.146,95％可信区间1.616～3.268;P＜0.001)是转归不良的独立危险因素.结论 基线血清和肽素水平增高是急性缺血性卒中患者90 d时转归不良的独立预测因素.     

Nkx2.5在肺血减少型先天性心脏病右室流出道心肌中突变及表达的意义

目的 观察Nkx2.5基因在肺血减少型先天性心脏病（CHD）患者中的突变及表达变化,探讨Nkx2.5基因在右室流出道梗阻发生中的分子调控机制.方法 选取2012年5月—2013年5月蚌埠医学院第一附属医院与安徽省立儿童医院心脏外科收治的56例肺血减少型CHD患者为实验组,同期收治的63例室间隔缺损患者为对照组.收集所有患者术前外周静脉血5 ml,采用PCR结合DNA测序技术对Nkx2.5基因的外显子进行序列检测,观察有无Nkx2.5基因突变;留取术中右室流出道肥厚心肌组织0.5 cm ×0.5 cm ×0.5 cm,提取心肌组织RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测心肌中Nkx2.5基因mRNA的表达情况,分析Nkx2.5基因与肺血减少型CHD的关系.结果 实验组与对照组外周静脉血中均未检测出基因突变,实验组心肌组织Nkx2.5基因mRNA表达水平较对照组显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 Nkx2.5基因突变可能与多因素有关;肺血减少型CHD的发生可能与心肌组织中Nkx2.5基因表达下降有关.     

催产素体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化

目的探索催产素(OT)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化的可行性。方法取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,应用OT定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共聚焦显微镜技术检测结蛋白,α-横纹肌肌动蛋白、心肌特异性肌钙蛋白T的表达;以半定量RT-PCR方法在诱导后7、21和28 d检测细胞心肌早期转录因子GATA-4和心肌特异性肌凝蛋白重链α-MHC的表达。结果体外分离培养的细胞生长稳定,增殖较快,主要为纺锤形和成纤维细胞状。诱导后1周,细胞以梭形、柱状为主,部分细胞有分支,核卵圆形、居中,类似心肌细胞形态,排列方向渐趋一致。诱导后4周,细胞形态变长、增大,多呈杆状,紧密平行排列生长。分化后细胞结蛋白、α-横纹肌肌动蛋白和肌钙蛋白T均呈现阳性表达。激光共聚焦扫描显微镜观察:可见细胞质内结蛋白的表达呈红色,肌钙蛋白T的表达呈绿色,当两者同时被观察时可见其共表达的部位变成黄色。RT-PCR结果显示,GATA-4于诱导后7 d弱表达,21 d表达增强,28 d表达减弱。α-MHC在诱导后7 d不表达,21 d弱表达,28 d表达明显。结论骨髓间充质干细胞在OT诱导下可定向...     

对用于肾动脉栓塞的新型医用聚硅氧烷的研究

本文阐述了新型肾动脉永久栓塞剂—SYS硅橡胶的合成、性能以及应用。SYS硅橡胶经过十项生物安全性实验,结果表明SYS硅橡胶是符合医用要求、较理想的医用高分子材料。在大量动物实验的基础上,对10例应用SYS硅橡胶进行肾动脉栓塞的临床研究,效果良好。经栓塞后肾的病理组织学观察,栓塞完全肾实质及癌组织呈现广泛梗死,属凝固性坏死。同时在离体标本和动物实验基础上,对SYS例硅橡胶进行了2例胰管栓塞临床研究,结果表明它是目前比较理想的胰管栓塞剂。SYS硅橡胶亦应用于治疗先天性动静脉瘘。