低硒和/或低碘对子三代大鼠关节软骨细胞凋亡的影响

目的 研究低硒和/或低碘对于三代大鼠软骨细胞凋亡的影响.方法 将48只断乳SD大鼠随机分为低硒组、低碘组、低硒低碘组和对照组4组,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术和免疫组织化学方法检测各组子三代大鼠关节软骨细胞的凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白表达及其分布情况.结果 与对照组相比,低硒组、低碘组及低硒低碘组子三代大鼠关节软骨表层和中层软骨细胞凋亡增多,尤以中层增多更显著(P<0.05),低硒组、低碘组及低硒低碘组间细胞凋亡阳性率差异无统计学意义(P>0.05);低硒组、低碘组及低硒低碘组子三代大鼠关节软骨表层和中层Bcl-2和Bax表达阳性细胞数较对照组明显增多(P<0.05),低硒组、低碘组及低硒低碘组间Bcl-2和Bax表达阳性细胞数差异无统计学意义(P>0.05).结论 低硒和/或低碘可能诱导大鼠关节软骨细胞异常凋亡.     

AF诱导骨组织再生的新理论——膜性负压说

近年来随着医学分子生物学的不断发展，人们对骨折愈合过程的认识不断加深，诞生了一种利用隔膜技术引导骨组织再生的新技术。而在此基础上，作者结合负压技术诱导骨组织再生的新发现，创新性的提出诱导骨组织再生的新理论——膜性负压说。本文对此新理论进行介绍，为其能更好的为同道理解，早日应用到临床奠定基础。     

携EGFP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定

目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法。方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞，用荧光显微镜观察转染结果；依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞，并利用PCR、RT-PCR对其鉴定；以NIH3T3为靶细胞，对其滴度进行测定。结果荧光显微镜显示用脂质体介导的方法成功的转染PA317细胞，在4次连续流式细胞仪分选后得到了稳定表达的多克隆和单克隆源性的包装细胞。PCR和RT-PCR分别从多克隆和单克隆源性的包装细胞细胞基因组DNA以及多克隆和部分(6／8)单克隆源性的包装细胞培养上清中的重组逆转录病毒RNA中扩增出了插入的EGFP片段。滴度测定显示得到的包装细胞能够产生有效的病毒滴度。结论荧光激活细胞分选技术是获得有效病毒滴度的包装细胞的有效方法。     

大骨节病关节软骨细胞凋亡及其相关调控因子的表达

目的 探讨大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达分布的特点。方法 收集15例大骨节病儿童和15例正常对照儿童关节软骨。采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记(TUNEL)技术和Bcl-2、Bax、Fas及iNos蛋白免疫组化抗生物素蛋白-生物素-碱性磷酸酶(B-SA)法染色,观察大骨节病儿童和正常对照儿童关节软骨的凋亡细胞和Bcl-2、Bax、Fas及iNos蛋白阳性表达细胞的密度与分布。结果 (1)大骨节病儿童关节软骨中层凋亡阳性细胞数[(33.60±2.71)%]较正常关节软骨[(1.33±0.41)%]显著增多(t=11.59,P<0.01);(2)大骨节病儿童关节软骨表层和中层Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达显著高于正常关节软骨中的表达(t=11.75~18.65,P<0.01);大骨节病儿童关节软骨各层Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性率有显著性差异(F=73.49~114.42,P<0.01),以表层最多[分别为(41.93±12.26)%、(45.60±15.78)%、(53.60±16.49)%和(45.47±14.02)%],其次为中层[分别为(14.93±3.50)%、(13.87±4.32)%、(23.27±4.83)%、(21.67±6.82)%]。结论 大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas、iNos表达较正常人显著增多。     

沉默c-myc重组腺病毒载体的构建

目的设计、构建并筛选出转染至人骨肉瘤细胞系OS-9901，对c-myc沉默效果最佳的复制缺陷型重组腺病毒质粒pAd-c-myc．短发夹RNA（short hairpinRNA，shRNA）包装出表达c-myc-shRNA的重组腺病毒，并测定其滴度。方法设计有shRNA结构的3对单链寡核苷酸（ss oligos），经变性退火为双链寡核苷酸（dsoligos），插入穿梭质粒pENTR／U6载体，测序正确后，经Lipofectamine^TM2000阳离子脂质体介导入人骨肉瘤细胞系OS-9901，采用RT-PCR筛选对c-myc沉默效果最佳的穿梭质粒pENTR／U6-shRNA，然后与腺病毒骨架质粒行同源重组，筛选出正确重组子。采用293A细胞包装出表达c-myc-shRNA的复制缺陷型重组腺病毒，观察其细胞病变效应（cytopathiceffect，CPE），采用病毒颗粒法（viral particles，vP）和50％组织培养感染剂量法（50％tissue culture infective dose，TCID50）测定病毒滴度。结果电泳验证后的dsoligos插入穿梭质粒pENTR／U6载体，测序结果提示构建的pENTR／U6-shRNA质粒正确。从3对dsoligos通过RT-PCR方法筛选出对c-myc沉默效果最佳的穿梭质粒pENTR／U6-shRNA，经PacI酶切线性化后同源重组成功构建了介导c-myc-shRNA复制缺陷型重组腺病毒，CPE和空泡现象3d开始出现，6d更加明显。采用VP法测定的第1代腺病毒滴度为5．23&#215;109VP／mL，经3～4代扩增后可达2．26&#215;10^12VP／mL。TCID50证实病毒滴度为10^-3.8／0．1mL。结论通过RNA干扰技术，体外成功构建了介导shRNA-c-myc复制缺陷型重组腺病毒。     

降钙素基因相关肽对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的 探讨外源性降钙素基因相关肽（CGRP）对大鼠颅盖骨来源成骨细胞的影响，以进一步了解CGRP促进成骨的作用机制。方法 利用二次酶消化法培养的成骨细胞，加入含不同浓度CGRP的条件培养液，24小时后通过MTT比色，^3H-TdR掺入以及细胞内碱性磷酸酶（ALP）含量的测定来观察CGRP对成骨细胞增殖和分化的影响。结果 CGRP可以明显促进成骨细胞增殖，而且作用呈剂量依赖性。CGRP对细胞内ALP含量无明显影响。结论 CGRP能够直接作用于成骨细胞并通过促进其增殖而有利于骨形成。     

独活寄生汤加减治疗椎间盘源性下腰痛67例

椎间盘源性下腰痛（discogenic low back pain,DLBP）是引起慢性下腰痛最常见的疾病,占慢性下腰痛发病患者的39％,而椎间盘突出症仅占30％,其他疾病如小关节源性疼痛所占比例就更低。2007年11月至2009年2月,笔者采用独活寄生汤加减治疗DLBP患者67例,疗效满意,现总结报告如下。     

自体碎骨用于椎间植骨治疗腰椎间隙非特异性感染的疗效分析

目的 探讨自体碎骨作为椎间植骨材料用于治疗腰椎间隙非特异性感染的临床疗效。方法 收集了2010～2019年该科室采用自体碎骨用于椎体间植骨和后路手术治疗腰椎间隙非特异性感染病例24例,男性14例、女性10例,记录患者术前及末次随访时的白细胞计数、红细胞沉降率、C反应蛋白等实验室指标及手术中相关指标、术后并发症。测量术前及末次随访时的邻椎高度,记录病变椎间隙的融合时间。采用视觉模拟评分(visual analogue scale, VAS)、Oswestry功能障碍指数(Oswestry disability index, ODI)评估腰部疼痛及功能障碍程度。结果 所有患者顺利完成手术。细菌培养结果：阳性8例(8/24,33.3%),其中革兰氏阳性菌5例：金黄色葡萄球菌4例,表皮葡萄球菌1例;革兰氏阴性菌3例,均为大肠埃希菌。ODI指数由术前(71.46±5.14)%下降至末次随访的(20.83±4.34)%,差异有统计学意义(P<0.05);VAS评分由术前(6.25±1.36)分下降至末次随访的(2.63±0.88)分,差异有统计学意义(P<0.05)。所有病例均获得椎体...     

低硒、低碘及联合对亲代和子代大鼠骨、软骨生长的影响

目的 研究低硒、低碘及其联合对亲代和子代大鼠骨、软骨生长的影响.方法 48只断乳SD健康大鼠,按体质量随机分对照组、低硒组、低碘组和低硒低碘组,每组12只.4组大鼠分别采用人工配制的低硒、低碘、低硒低碘及含硒、碘量正常的饲料喂饲.大鼠饲养8周后(约3月龄)进行组内繁殖;亲代大鼠喂饲至6月龄、子代大鼠喂饲至3月龄时,取亲代和子代大鼠血样,测定血清硒及T3、T4;取大鼠右侧胫骨及左侧膝关节.用游标卡尺测定胫骨长度、中段额状横径、胫骨上端关节软骨横径、纵径;膝关节包埋切片后,光镜下测定胫骨近端生长板厚度、生长板软骨肥大层、增殖层细胞层数.结果 低硒对亲代和子代大鼠血清硒有明显影响(F值分别239.56、232.68,P均<0.05),对于代血清T4水平也有明显影响(F=6.95,P<0.05);低碘对亲代和子代大鼠血清T3、T4均有明显影响(F值分别为14.11、14.05,30.29、34.53,P<0.01),低硒、低碘联合对子代大鼠血清T4水平的影响存在交互作用(F=5.99,P<0.01).亲代和子代大鼠血清硒,低硒组[(30.28±6.34)、(43.95±9.75)μg/L]、低硒低碘组[(30.33±5.18)、(35.40±3.06)μg/L]均明显低于低碘组[(345.83±29.55)、(245.24±9.95)μg/L]、对照组[(358.64±30.50)、(236.50±9.75),P均<0.05].低硒低碘组[(0.55±0.05)、(0.88±0.14)mmol/L]亲代和子代大鼠血清T3均明显低于对照组[(0.75±0.08)、(1.26±0.26)mmol/L,P均<0.05],低碘组[(24.11±2.29)、(42.10±8.92)mmol/L]、低硒低碘组[(20.66±1.93)、(26.55±5.98)mmol/L]亲代和子代大鼠血清T4均明显低于对照组[(36.15±2.74)、(52.79±8.84)mmol/L]和低硒组[(28.12±3.33)、(52.02±11.99)mmol/L,P均<0.05];低硒低碘组子代大鼠血清T4明显低于低碘组(P<0.05).子代大鼠中,低硒,低碘对胫骨长度、生长板厚度、增殖细胞层数、肥大细胞层数影响明显(F值分别为24.31、6.98,40.76、56.15,25.24、82.82,10.07、5.57,P<0.01或<0.05).低硒和低碘对胫骨长度、生长板厚度、增殖细胞层数、肥大细胞层数的影响存在交互作用(F值分别为5.68、24.86、41.82、9.12,P<0.05或<0.01);低硒组[(33.17±0.34)mm]、低硒低碘组胫骨长度[(31.30±0.87)mm]明显低于对照组[(34.12±0.32)turn,P均<0.05];低硒低碘组生长板厚度[(1.60±0.18)mm、增殖细胞层数(8.54±0.81)、肥大细胞层数(4.95±0.37)明显低于低硒组[(3.03±0.10)mm、14.68±0.84、6.60±0.31]、低碘组[(2.90±0.09)mm,13.75±0.33、6.61±0.84]及对照组[(3.19±0.09)mm、14.94±0.36、6.64±0.26,P均<0.05)];低碘组生长板厚度、增殖细胞层数小于对照组(P<0.05).结论 低硒影响子代大鼠胫骨生长,低碘影响子代大鼠软骨细胞增殖,降低生长板厚度,低硒低碘联合显著影响子代大鼠骨、软骨的生长.     

退变性椎间盘疾病的规范化治疗

退变性椎间盘疾病是颈肩、腰腿痛的主要原因,目前的治疗方法大体可分为非手术疗法、微创手术、开放手术3大类.本文以腰椎间盘突出症为代表,分析了退变性椎间盘疾病的各种治疗方法的作用原理、适应证及优缺点,提出在治疗退变性椎间盘疾病时,应遵循个体化、阶梯化、综合化的原则,因人、因病辨证施治.