用CDR3导向抗体库法对鼠抗人膀胱癌单抗进行人源化

目的　构建含鼠单抗CDR3的人源噬菌体抗体库 ,对膀胱癌鼠单抗进行人源化。方法通过重叠PCR及DNA重组技术 ,将抗膀胱癌鼠单抗BDI的CDR3区与人淋巴细胞来源的多样化的VH和Vκ组合 ,构建含BDICDR3的人源噬菌体抗体库 ;利用loxp cre定位重组系统 ,增加轻、重链的组合配对 ,获大容量抗体库 ;用膀胱癌细胞 (EJ)从中筛选人源化抗膀胱癌单抗Fab段 ,ELISA方法对所筛克隆进行特异性鉴定 ,同时运用竞争抑制实验对所筛特异性克隆进行抗原表位的核实。结果　首先构建了库容为 2× 10 7的含鼠CDR3区的人源噬菌体抗体库 ;经过在cre 细菌胞内的定位重组后 ,获得库容为 10 1 0 的大容量噬菌体抗体库 ;用EJ细胞筛选到可与其特异结合的人源性Fab段 ;竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源单抗结合同一抗原表位。结论　在没有亲本鼠单抗基因 ,仅了解其CDR3序列的条件下 ,可通过CDR3导向 ,构建大容量抗体库 ,筛选到相应的人源化抗体基因。     

支气管哮喘与急性呼吸道感染患儿血浆β防御素3水平的对照研究

目的β防御素3(HBD3)除了具有天然免疫功能,还发挥调节后天适应性免疫的作用。本研究拟通过支气管哮喘患儿、急性上呼吸道感染患儿及正常儿血浆HBD3浓度的比较,探讨HBD3在哮喘发病中的作用。方法研究对象选择2009年4月到12月在哈尔滨医科大学附属第一医院儿科就诊病例共81例,其中哮喘组21例,为急性发作期支气管哮喘患儿,感染组29例,为急性上呼吸道感染患儿,正常对照组31例,为健康体检儿。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行血浆HBD3水平测定。同时测定血嗜酸性粒细胞总数和白细胞数,9例哮喘儿测定了血清IgE浓度。结果血浆HBD3浓度正常儿为(8.028±1.078)μg/ml,哮喘患儿(12.212±1.124)μg/ml感染患儿(8.976±1.110)μg/ml,哮喘患儿与急性呼吸道感染及正常儿3组总体比较,血浆HBD3浓度明显升高,差异有显著性(F=4.448,P<0.05);哮喘组与正常组比较,差异显著,P<0.01;哮喘组与感染组比较,差异有显著性P<0.05;感染组与正常组比较,差异无显著性P>0.05;同时发现血浆HBD3水平与血清总IgE,血嗜酸性粒细胞及白细胞水平无显著相关性。结论支气管哮喘发作时HBD3表达升高,HBD3可能是超越感染之外,参与哮喘发病的独立因素。HBD3是否始动因素尚待进一步探索。     

透视下行子宫输卵管造影中近端输卵管梗阻假阳性因素分析

目的提高子宫输卵管造影中诊断输卵管近端梗阻的准确性。方法选择600例生殖医学中心的不孕受检者,年龄21～45岁,平均年龄34岁。随机分成A、B、C、D 4组,A组222例444条输卵管,B组121例242条输卵管,C组135例270条输卵管,D组122例244条输卵管。在实时透视下行子宫输卵管优维显造影,分析输卵管造影中近端输卵管梗阻的假阳性因素。结果导管顶端位于输卵管开口处121例,其中98例（80.99%）导致同侧宫角及输卵管不显影;经适当外拉或旋转导管后112例（92.56%）同侧宫角显影,其中84例（69.42%）同侧输卵管近端显影,仅有37例为近端输卵管梗阻。因球囊过大或过小导致造影剂未能充盈宫角者135例,其中78例（57.78%）单侧近端输卵管不能显影,经调整后59例（43.70%）单侧输卵管近端显影,仅19例为单侧近端输卵管梗阻。122例受检者仅以盆腔正位观察,有48例（39.34%）单侧输卵管近端不能显影,改变体位后35例（28.69%）近端输卵管得以显影。4组子宫输卵管造影中,B、C、D 3组输卵管近端梗阻率均低于A组常规输卵管造影,D组输卵管梗阻率明显低于前3组。结论在透视下行子宫输卵管造影,能及时判断造成近端输卵管不显影的假阳性因素并及时纠正,可直接提高输卵管显影率及诊断准确性。     

手足口病再感染的地理流行病学特征分析

目的调查手足口病再感染率和病原分布情况,分析其地理流行病学特征。方法利用中国疾病预防控制信息系统中2008—2010年河南省手足口病个案资料,采用地理流行病学的方法,分析再感染率和病原的分布特征。结果河南省2008—2010年手足口病再感染率约为7．74％。;其分布集中在豫中部（郑州市、平顶山市、许昌市等）和豫北地区（鹤壁市、焦作市等）;手足口病发病率高的地区,再感染发生率亦高;在EV71流行期伴随着CoxA16或其他肠道病毒同时流行的地区再感染率较高。结论手足口病再感染存在地域差异,病原在不同地区存在变化,手足LI病流行期间肠道病毒血清型种类多的地区再感染发生率高,提示手足口病的预防控制工作要因地制宜。     

HIV 感染者调节性T 细胞表面B、T 淋巴细胞衰减因子的表达研究

目的:对HIV 感染者调节性T 细胞(Regulatory T cell,Treg)上B 、T 淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte at-tenuator,BTLA)的表达水平进行检测,并探讨其在HIV 感染进程中的作用。方法:选取24 例感染在一年之内的HIV 早期感染者(Early HIV infected patients,EHI 组)、14 例感染超过一年的HIV 慢性感染者(CD4+ T 计数>200 cells/ μl,HIV 组)、6 例AIDS患者(CD4+ T 计数<200 cells/ μl,AIDS 组)和9 例健康人作为对照,应用流式细胞仪检测不同时期感染者及健康对照者Treg 细胞BTLA 的表达水平,分析其与疾病进展及免疫活化的相关性。结果:随着HIV 疾病进展,EHI 组、HIV 组及AIDS 组Treg 细胞BTLA 表达水平依次升高,其中HIV 组与AIDS 组Treg 细胞BTLA 表达水平显著高于EHI 组(P<0.05 及P<0.01),AIDS 组Treg 细胞BTLA 的表达水平高于健康对照(P<0.05);Treg 细胞BTLA 表达水平与CD4+ T 淋巴细胞计数呈负相关(P<0.001),与病毒载量呈正相关(P<0.01);Treg 细胞BTLA 表达水平与活化CD4+ CD38+ T 淋巴细胞及CD4+ HLA-DR+ T 淋巴细胞呈正相关(P<0.001,P<0.001)。结论:HIV 感染者Treg 细胞BTLA 表达升高,与疾病进展显著相关,提示其可能通过加强Treg 细胞的抑制功能加速疾病进展,并为未来HIV 感染的干预提供信息。     

EGCG对小鼠调节性T细胞的产生及细胞因子TGF-β1表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对小鼠体内调节性T细胞(Treg)的产生及转化生长因子TGF-β1的表达和分泌的影响。方法:选择健康、雄性、体重相近的BALB/c小鼠40只,随机分为4组(n=10),设立不同剂量浓度的EGCG组(10、50、85 mg/kg)和对照组。EGCG组每天给予EGCG腹腔注射一次,连续注射3天,对照组每天给予等体积生理盐水腹腔注射一次,连续注射3天。采用流式细胞仪检测小鼠脾脏Treg细胞的产生。采用荧光定量PCR和ELISA方法分别检测小鼠脾脏细胞和外周血TGF-β1因子的表达和分泌水平。结果:与对照组相比较,EGCG处理组小鼠体内的Treg细胞的比例上升,TGF-β1的基因表达水平和蛋白分泌水平均明显增高,当EGCG剂量为85 mg/kg时,其促进作用最明显。结论:EGCG可促进小鼠体内的Treg细胞产生,增强TGF-β1表达和分泌。     

大鼠杏仁核的外侧核和基底外仙核神经肽Y免疫阳性纤维的起始

用间接免疫荧光技术和逆行示踪法探讨了杏仁核的外侧核和基底外侧核神经肽Ｙ免疫阳性纤维的起始。结果证明：将逆行示踪物荧光金注射到杏仁核的外侧、基底外侧核之后,在同侧的杏仁前区出现了许多荧光标记细胞;免疫荧光的染色显示部分细胞同时呈神经肽Ｙ免疫反应阳性;损毁杏仁核前区引起同侧杏仁核的外侧和基底外侧核神经肽Ｙ纤维的减少。这些发现提示,杏仁前区的神经肽Ｙ免疫阳性细胞投射到同侧杏仁核的外侧核和基底外侧核。此外,现在的研究显示,出现于杏仁核的外侧核和基底外侧核的神经肽Ｙ免疫阳性神经是内在性的,因为损毁杏仁前区后在以上的部位仍可观察到相当数量的神经肽Ｙ免疫阳性纤维;并且横断两条主要的杏仁核传出通路一终纹和腹侧杏仁核传出通路,未能引起神经肽Ｙ免疫阳性物质在轴突近侧断端的蓄积。     

胎儿心脏三尖瓣返流的彩色多普勒血流显像检测

目的　探讨胎心三尖瓣返流的原因与临床价值。方法　应用彩色多普勒血流显像对 2 1例胎心三尖瓣返流进行了检测 ,观察胎心结构、返流信号分布、测量最大返流速度。结果　 2 1例胎心三尖瓣返流的原因为 :先心病组 6例 ,均显示心内结构异常 ;非先心病组 15例 ,4例表现右心扩大 ,无心内结构畸形 ;两组返流速度无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　先心病引导的三尖瓣返流是因心脏结构异常所致 ,非先心病性三尖瓣返流主要由于胎心右室功能不良引起。当检出三尖瓣返流时 ,应进一步追踪扫查心内结构有无畸形 ,在排除先心病之后即应提示心脏负荷增加 ,若伴有右心腔扩大则是发生心力衰竭的佐证     

4支肝动脉伴胆囊动脉起始及走行变异1例

正笔者在解剖1具老年男性尸体时发现4支肝动脉,分别为肝左、中、右动脉和副肝右动脉。肝中动脉和肝右动脉共干起自肝总动脉,副肝右动脉由肠系膜上动脉发出,胆囊动脉从副肝右动脉发出(图1),现报道如下:肝总动脉外径4.05 mm,走行1.91 cm、2.62 cm后分别发出肝左动脉、以及肝中动脉和肝右动脉的共干支,外径分别为3.25 mm、2.95 mm。肝左动脉走行3.24 cm后经肝圆韧带裂入肝,在距离肝左动脉起点2.97 cm处发出一支副胃左动脉,外径1.80 mm;共干支走行1.27 cm后发出肝中动脉和肝右动脉,都经门静脉前方至第一肝门处入肝。     

辨识“肾虚”巧“补肾”

日常生活中,人们常常在感到腰膝酸软、健忘失眠、情绪不佳、尿频等症状时提到“肾虚”一词。“肾虚”出现在健康“忌”语中的频率也比较高,对有关肾虚知识的了解成了关注健康的必需。专家提醒,肾虚是一个相当宽泛的概念,