忍冬U6启动子的克隆及功能验证

以忍冬基因组DNA为模板,克隆并筛选出具有较高转录活性的忍冬U6启动子。采用PCR方法,从忍冬基因组中克隆到4个LjU6启动子,长度分别为336、708、359、602 bp, PlantCARE分析发现4个启动子中均含有TATA框以及CAAT框等典型的启动子顺式元件,且包含与光响应、胁迫响应等相关的调控元件;克隆产物经测序正确后,将LjU6启动子连接至携带β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因的pBI121载体,成功构建4个LjU6-pBI121融合表达载体,通过农杆菌瞬时转化法转化烟草叶片,并对叶片进行GUS组织化学染色,染色结果显示LjU61-F1转录活性最高,本研究初步筛选出转录活性较高的忍冬U6启动子,为忍冬CRISPR/Cas9基因组编辑技术的建立奠定了基础。     

bFGF和VEGF在急性白血病中的表达及对HL-60细胞生长的影响

为了研究急性白血病患者血清及细胞株培养上清中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的表达水平 ,并初步探讨白血病患者VEGF水平的评价方法以及VEGF特异性反义寡脱氧核苷酸(ASODN)的抗血管生成作用 ,用夹心ELISA法测定患者血清、细胞株 (HL 6 0、U937、NB4、JM和K5 6 2 )培养上清中bFGF和VEGF浓度 ,比较其差异 ,将VEGF血清浓度测定值 (pg ml)、血清浓度测定值经外周血血小板计数标化后标化值VEGF PLT(pg 10 6 )分别作为比较指示 ;HL 6 0细胞经不同浓度VEGFASODN作用后 ,利用噻唑蓝、ELISA法分别测定靶细胞的生长状态及其VEGF分泌水平。结果发现 :①急性白血病患者血清bFGF阳性率 (37.5 % )高于健康对照者 (10 % ) (P <0 .0 1) ,在 5株白血病细胞株中 ,NB4 、U937和K5 6 2细胞上清中检测到了bFGF表达 ;②急性白血病患者及健康者血清VEGF测定值差异无统计学差异 ,但二者标化值测相差显著 (P <0 .0 5 ) ;除U937外 ,其余 4株细胞株培养上清中均有VEGF表达 ;③HL 6 0细胞经 0 .5 ,1及 5 μmol LVEGFASODN作用 2 4小时后 ,其存活率与对照组相比明显降低 (P <0 .0 5 ) ;经 1,5 ,2 0 μmol LVEGFASODN作用 2 4小时后 ,HL 6 0细胞培养上清中VEGF浓度均明显低于对照 (P <0 .0 5 )。结论 :     

游离端缺失伴中度慢性牙周炎患者的三种修复方案临床效果比较

目的:比较套筒冠、精密附着体与传统可摘局部义齿修复KennedyⅠ、Ⅱ类牙列缺损伴中度慢性牙周炎患者的临床效果,探讨老年患者可摘局部义齿的设计.方法:选取游离端缺失伴中度慢性牙周炎患者共190例,其中63例行圆锥形套筒冠修复,51例行精密附着体义齿修复,76例行可摘局部义齿修复.戴修复体后1、3、6、12、18、24、30、36个月复查,评价咀嚼效率、成功率、稳固性、患者满意率.结果:咀嚼效率依次为91.5％、86.8％、76.4％;成功率依次为96.4％、85.4％、79.1％;稳固率依次为96.4％、84.7％、68.3％;满意率依次为96.4％、84.7％、69.6％.咀嚼效率组间比较结果为X2=6.38,P=0.03.结论:Kennedy Ⅰ、Ⅱ类牙列缺损伴中度慢性牙周炎,套筒冠修复游离端缺失患者效果较精密附着体以及可摘局部义齿更为理想.     

前列腺素E脂质微球联合小剂量肝素及丹参预防60例异基因造血干细胞移植后肝静脉闭塞病

目的:探讨前列腺素E脂质微球联合小剂量肝素及复方丹参预防肝静脉闭塞病(VOD)的效果.方法:59例急、慢性白血病患者及1例T细胞淋巴瘤患者接受移植治疗.移植患者中3例曾有乙型肝炎病史,1例有轻度脂肪肝病史.移植前所有患者肝功能均正常.采用CyTBI加Ara-C/VP-16或改良BuCy2方案预处理.VOD预防方案:移植前8 d至移植后28 d,采用前列腺素E脂质微球(凯时)30～40vg/d联合小剂量肝素(100U/kg·d-1)及复方丹参30～40 ml/d,发生VOD后继续上述治疗,加用去纤苷10 mg/kg·d-1.结果:59例均获得植入,1例植入失败.2例出现重症VOD,其中1例为接受单倍型半相合外周血干细胞移植的复发ALL患者,1例患者有轻度脂肪肝,接受非血缘外周血干细胞移植.2例均采用较强的清髓性预处理方案,最终死于多脏器功能衰竭.结论:本研究采用的VOD预防方案,VOD发生率低于文献报道,提示前列腺素E脂质微球联合小剂量肝素及复方丹参方案对预防VOD的发生可能有一定效果.     

不同栽培居群忍冬植株形态特征研究

目的:比较不同栽培居群忍冬植株形态特征,探讨忍冬植物形态特征变异与环境因素的相关性。方法:选择山东、河北、河南等6个栽培区域内的同一生长年限的忍冬居群,分别测定其株高、株围、枝条长度、枝条直径、叶片长度、叶片宽度、叶片长宽比、花蕾长度、花蕾直径、花蕾干重等形态特征指标,同时记录各栽培居群所处地块的经纬度、海拔高度、年均气温、年降水量、年日照时数等,采用SPSS统计软件对其进行分析。结果:不同栽培居群忍冬植株的各种形态特征指标均有变异,但变异程度不同。环境因素对忍冬植株形态特征具有重要影响,尤以土壤的影响最大。栽培措施对植株形态特征的影响有时远大于环境因素的影响。结论:影响植株形态特征变异的因素既包括遗传因素、环境因素,也包括栽培管理措施。植株形态特征可作为忍冬种质区分、良种选育及药材道地性研究的重要参考依据。     

异基因造血干细胞移植治疗白血病76例临床观察

目的观察不同来源的异基因造血干细胞移植治疗白血病的疗效并探讨主要并发症的处理方案。方法对2001年9月至2007年3月第四军医大学西京医院血液科76例白血病患者行异基因造血干细胞移植治疗,其中慢性粒细胞白血病34例,急性髓性白血病24例,急性淋巴细胞白血病15例,T细胞淋巴瘤/白血病3例。人类白细胞抗原(HLA)全相合的同胞供者57例,1个HLA位点不合同胞供者3例,HLA单倍型半相合同胞供者7例,非血缘供者9例。预处理方案采用改良的马利兰联合环磷酰胺(BUCY)或改良的环磷酰胺联合全身放疗及阿糖胞苷或鬼臼乙叉甙(CyTBI Ara-c/VP-16)方案。采用标准的环孢素A(CsA)联合短期甲氨蝶呤(MTX)方案预防移植物抗宿主病(GVHD);无关供者移植加用抗人胸腺细胞球蛋白,单倍型半相合移植同时加用CD25单克隆抗体。结果96.1%(73/76)获得植入。24.7%(18/73)出现急性GVHD,32.9%(24/73)出现慢性GVHD;合并重症肝静脉闭塞病2例;并发纯红细胞性再生障碍性贫血5例。随访3~72个月,现存活56.6%(43/76),43.4%(33/76)在移植后1~36个月时死亡,19例死于白血病复发,14例死于移植相关并发症。结论多种来源的异基因造血干细胞移植是治疗白血病的有效方法,于慢性粒细胞白血病慢性期、急性白血病缓解期移植效果较好,移植前处于高危难治状态的病例复发率仍较高。     

不同变异类型忍冬花蕾绿原酸含量分析比较△

目的:测定山东产忍冬13个变异类型花蕾绿原酸含量,为选育优良品种奠定基础。方法:在同一条件下采集、干燥不同变异类型二白期花蕾,采用高效液相色谱法测定绿原酸含量。结果:在所测定的13个变异类型中,其花蕾绿原酸含量相差悬殊,含量为0.80%～2.54%。结论:选育优良品种是提高忍冬花蕾绿原酸含量的有效途径,并且潜力巨大。     

大枣化学成分研究概况△

为充分开发利用我国丰富的大枣资源,对其化学成分研究情况进行了归纳总结,发现其主要成分为糖类、有机酸及其酯类、皂苷类、生物碱类、黄酮类等。     

黄芩植株光合特性初步研究

目的 研究黄芩植株光合特性及其生理生态影响因子,为确定合理栽培措施提供参考。方法 利用CIRAS—1便携式光合作用测定仪测定日中不同时段、不同光子通量密度(PPFD)下的净光合速率(Pn)及部分生理生态因子变化。采用灰色关联分析确定黄芩植株Pn与生态因子间的关联度。结果 黄芩植株不同部位叶片Pn为中部叶片＞基部叶片＞顶部叶片,光饱和点为1 302 μmol/(m²·s),光补偿点为101.5 μmol/(m²·s);日Pn变化呈双峰曲线,有典型的光合“午休”现象;Pn与气孔导度(Gs)密切相关(r=0.88,P＜0.05)。结论 PPFD和空气湿度是影响黄芩Pn的主要生态因子。     

忍冬不同种质花蕾红外光谱分析

目的:分析鉴定山东产忍冬不同种质花蕾.方法:采用红外光谱三级鉴定法(红外光谱、二阶导数谱以及二维相关谱)对不同种质忍冬花蕾进行分析鉴定.结果:一维图谱上不同种质间相似度较大,均有3371 cm-1处的O-H伸缩振动峰,2924,2853 cm-1处的-CH2处的伸缩振动峰,1735 cm-1处的C=O伸缩振动峰,1637 cm-1处的烯醚双键伸缩振动峰,1051cm-1处的C-O伸缩振动峰,说明其主体成分相似;二阶导数红外图谱上,不同种质间在1 800～1 300 cm-1处差异明显;二维相关光谱中,不同种质间其峰强、峰形、峰位等均有较大差异.结论:利用傅立叶红外光谱三级鉴定技术可以鉴别不同种质来源的金银花药材.