胚胎早期发育体外共培养体系的比较

目的 探讨共培养体系中体细胞对胚胎早期发育的影响及比较2种常用共培养体系的优劣. 方法 实验分3组:同种不同类型体细胞.受精卵分别在含颗粒细胞和成纤维细胞的M199培养液中培养;异种同类型体细胞,受精卵分别在含牛颗粒细胞和小鼠颗粒细胞中M199培养液中培养;2种共培养体系比较,受精卵分别在"M199 颗粒细胞"和"B2 Vero细胞"的共培养体系中培养. 结果 颗粒细胞组较成纤维细胞组囊胚率高(P＜0.05);牛颗粒细胞组和小鼠颗粒细胞组在卵裂率和囊胚率方面差别无统计学意义;"M199 颗粒组"在卵裂率和囊胚率方面与"B2 Vero组"差别无统计学意义,但囊胚细胞数较少(P＜0.05). 结论 在一定的条件下,共培养体系中体细胞对胚胎早期发育有一定影响;"B2 Vero细胞"的共培养体系优于"M199 颗粒细胞"的共培养体系.     

老年患者上尿路梗阻致肾积水的病因及影像学诊断分析

目的:提高老年人上尿路梗阻的诊断水平.方法:回顾性分析了10 a来收治的60岁以上老年上尿路梗阻致肾积水167例的病因及影像学诊断方法,分析了B超、静脉肾盂造影(IVP)、逆行造影和CT对上尿路梗阻的检出、定位及病因的诊断.结果:在本组病例中,肾盂、输尿管结石56例,肾盂、输尿管癌51例;腹膜后转移及盆腔肿瘤19例;输尿管结核12例;输尿管损伤后狭窄10例.B超,IVP,逆行造影和CT对上尿路梗阻检出率分别为98.6%,70.3%,100%,73.5%.定位正确率分别为67.2%,64.3%,100%,81.2%,两者联合检查定位正确率高达100%.病因确诊率分别为72.3%,57.6%,78.2%和83.6%,综合运用B超,IVP,逆行造影和CT联合检查病变部位定位率和病因判断正确率均可达100%.结论:肿瘤和结石是导致老年患者上尿路梗阻的主要病因,对于腰痛,尤其伴有血尿的患者,合理综合地运用三种影像学检查手段,以明确诊断.     

缺氧诱导因子-1α的表达与肾癌细胞增殖和凋亡研究

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肾癌组织中表达及其与Bcl-2和PCNA的关系,了解肿瘤增殖与凋亡的特点。方法采用免疫组织化学方法检测61例肾癌石蜡标本切片HIF-1α、Bcl-2和PC-NA的表达。结果HIF-1α在肾癌组织中阳性率为57.4%(35/61),其表达与不同临床分期、病理分级有关(P<0.05),与组织学分类无关(P>0.05)。Bcl-2在肾癌组织中阳性率为42.6%(26/61),其表达与组织学分类、临床分期、病理分级均无关(P>0.05)。HIF-1α表达与肾癌细胞增殖程度呈正相关性(r=0.489,P=0.000);与Bcl-2蛋白表达无相关性(r=-0.196,P=0.127)。结论HIF-1α表达与肾癌的增殖密切相关,与肿瘤细胞凋亡无关,可能成为判断肾细胞癌转移和预后等生物学行为的重要参考指标。     

人p53四聚功能域对提高抗人CD3单链抗体亲和力的作用

目的探讨人p53四聚功能域在提高抗人CD3单链抗体（scFv）亲和力方面的作用。方法利用递归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p53四聚功能域融合基因，克隆入pUC19载体中构建pUCl9／IgG3／p53克隆载体。将抗人CD3 scFv克隆入pUC19／IgG3／p53载体中，构建抗人CD3scFv／人p53四聚功能域融合基因。经酶切鉴定及序列测定证实后。将融合基因克隆入真核表达载体pSecTag2-B中，转染HeLa细胞进行表达，表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果获得了抗人CD3scFv／人p53四聚功能域融合基因，基因全长882bp，可编码294个氨基酸，与已发表的抗人CD3scFv、人IgG3上游铰链区和人p53四聚功能域基因cDNA序列一致。表达产物经SDS-PAGE和Western印迹实验证实为约35kD的特异蛋白条带，纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合人外周血单个核细胞（PBMC）细胞，亲和力高于scFv。结论人lgG3上游铰链区／p53四聚功能域基因与抗人CD3scFv基因融合后表达产物的功能性亲和力大大提高，为提高抗体的功能性亲和力开辟了新的思路。     

转基因小鼠前列腺癌及转移的三维超声微成像

目的:应用三维超声微成像检测转基因小鼠前列腺腺癌(TGMAP)模型的前列腺肿瘤和转移。方法:使用三维超声微成像系统监测TGMAP模型小鼠的前列腺肿瘤生长。通过对TGMAP小鼠前列腺癌的三维超声图像和前列腺癌标本的比较,验证该超声系统检测活体小鼠肿瘤大小的可靠性。结果:超声成像可检测到直径为2.4～14mm的肿瘤和转移。通过三维超声体内测量与尸检获得的肿瘤最大直径的相关系数为0.998,超声诊断的敏感性和特异性均>90%。结论:TGMAP模型的三维超声微成像有望成为小鼠临床前期研究的新的微成像手段。     

脑室周围白质软化大鼠膜铁转运蛋白1的表达变化及意义

目的:探讨缺氧缺血脑室周围白质软化(PVL)大鼠膜铁转运蛋白1(FPN1)的表达变化及意义.方法:新生4日龄SD大鼠随机分为对照组和缺氧缺血PVL组,于术后1d、3d、1周和4周取脑,分离大脑皮质、海马和脑室周围白质,以石墨炉原子吸收分光光度法检测各脑区铁含量,应用免疫荧光组织化学显色观察FPN1蛋白定位,应用实时荧光定量PCR和免疫印迹分别检测FPN1 mRNA与蛋白表达水平.结果:与对照组相比,PVL组各脑区铁含量于术后1d与3d无增加；术后1周均较对照组增高,其中以脑室周围白质铁含量增加最显著,皮质次之,海马最少；术后4周皮质铁含量略有降低,海马铁含量已降至对照组水平,而脑室周围白质铁含量仍处于高水平.PVL组各脑区FPN1 mRNA和蛋白于术后1d与3d未见明显变化；术后1周均较对照组明显降低；术后4周皮质FPN1表达量有所恢复,海马FPN1已恢复至对照组水平,但脑室周围白质FPN1仍较对照组降低.结论:缺氧缺血PVL大鼠皮质、海马与脑室周围白质铁含量升高,而FPN1的表达减少,两者均呈时空依赖性.提示新生4日龄SD大鼠缺氧缺血后FPN1表达减少可能引起脑铁升高,促进PVL的发生.     

膀胱过度活动症大鼠膀胱及脊髓背根节中HCN4离子通道蛋白的表达

目的检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)蛋白在膀胱过度活动症(OAB)模型大鼠膀胱及脊髓背根节(DRG)中的表达变化。方法①成年雌性SD大鼠(240~260g)随机分为OAB-4周、OAB-6周、OAB-8周(每组10只)和对照组(10只):采用尿道近端结扎法,建立膀胱出口梗阻(BOO)诱导的OAB动物模型。②建模后4、6、8周行尿流动力学检测,筛选OAB动物。③应用Western blot等方法检测对照组及OAB模型不同时间点大鼠膀胱黏膜层及肌层内HCN4通道蛋白的表达变化,并检测上述不同处理组大鼠膀胱对应脊髓背根节(DRG)中HCN4蛋白表达情况。结果膀胱尿动力学检测结果提示:OAB组膀胱逼尿肌自发性收缩频率随时间明显升高,且8周组明显高于4周及6周组。Western blot检测显示,HCN4通道蛋白在对照组及OAB组均有表达,与对照组相比,OAB组的膀胱黏膜层及肌层中HCN4蛋白表达量随OAB发生时间均显著增高(P0.01),在OAB-8周组达到最高。DRG组织中HCN4通道蛋白随OAB发生时间显著增高(P0.01),且OAB-8周组表达量最高。结论 HCN4通道在大鼠膀胱黏膜层、肌层以及膀胱对应脊髓DRG中均有表达,且OAB组较对照组显著增多,并随OAB发生时间而升高。提示HCN4通道可能参与了OAB膀胱功能的可塑性变化。     

勃起功能障碍患者155例中医证型流行病学特征调查

目的:调查来源于西安城区人口中勃起功能障碍(阳痿)患者的中医证型流行病学特征,总结其规律性,寻找可能的预防和中医药干预方法。方法:选择2003-01/2006-01在解放军第四军医大学西京医院泌尿外科门诊就诊或住院治疗的阳痿患者155例,入选病例均为年龄在25岁以上的西安城区人口,参照1993年卫生部《中药新药临床研究指导原则》关于“中药新药治疗阳痿的临床研究指导原则”所确定的辨证标准和临床实际,初步拟设肝郁气滞证、肝胆湿热证、肾阳微衰证、肝肾阴虚证和心脾两虚证。在治疗开始前由资深中医师进行辨证诊断,并同时进行了药物性阴茎勃起实验、发病季节和危险因素调查以及心理情绪评估。勃起状态判定采用Porst分级法:0级:完全没有反应;1级:轻微勃起;2级:不完全勃起;3级:正常勃起。采用临床精神卫生症状自评量表评估患者的心理情绪,分为9大症状:躯体化、强迫、人际关系、抑郁、焦虑、敌对、恐怖、偏执和精神病性。勃起实验及心理测评时间均在治疗前1周内。结果:纳入对象155例,最终全部进入结果分析。①155例阳痿患者中医证型分布如下:肝郁气滞型39例、肝胆湿热型26例、肾阳微衰型22例、肝肾阴虚型41例和心脾两虚型27例。其中肝肾阴虚型患者最多,肝郁气滞型次之,肝胆湿热型和肾阳微衰型患者分布最少。②各证型与总体样本比较中,肾阳微衰型和心脾两虚型患者的平均年龄明显偏大,平均Porst分级显著降低。肾阳微衰型、肝胆湿热型和心脾两虚型患者平均病程偏长,而肝郁气滞型和肝肾阴虚型患者的平均年龄明显偏小,平均病程明显偏短,平均Porst分级较高。③心脾两虚型患者的平均文化程度明显偏高(P均<0.05～0.01)。肾阳微衰型和心脾两虚型患者合并高血压和冠心病者明显居多,而肝胆湿热型患者的平均吸烟指数和饮酒明显增高(P均<0.05～0.01)。④各证型患者的发病季节分布中,肾阳微衰型患者冬季发病明显居多(P<0.05)。各证型患者心理情绪评分比较中,肝郁气滞型和肝肾阴虚型患者大部分症状自评量表总分、阳性总分、阳性项目均数和阳性项目均分均明显高于总体样本,而肾阳微衰型和心脾两虚型患者的上述多数指标均明显低于总体样本(P均<0.05～0.01)。结论:西安城区阳痿患者中医证型以肝肾阴虚和肝郁气滞型分布较多,此两种分型患者年龄偏小,病程较短,病机以心理因素为主因。     

粒酶B和穿孔素mRNA竞争模板的构建

目的：为测定肾移植术后患尿中粒酶B和穿孔素mRNA水平构建其相应的竞争模板。方法：取肾移植术后患尿样，通过RT—PCR反应，获得含特定酶切位点的粒酶B和穿孔素片段，酶切粒酶B和穿孔素片段，分别在其间插入44bp和36bp外源性DNA片段，连接入PGEM4载体。结果：经酶切鉴定及DNA测序证实，外源性DNA正确插入粒酶B及穿孔素片段，竞争模板引物结合区域与靶序列一致，所构建粒酶B竞争模板与粒酶B片段相差29bp，所构建粒酶B竞争模板与粒酶B片段相差36bp，所构建新载体适合作为定量PCR的竞争模板。结论：基因重组方法可成功构建用于定量PCR的竞争模板，方法简便可行。     

LHRH及其受体对前列腺癌的作用研究进展

近 5 0年来 ,激素治疗作为治疗前列腺癌的一种方法 ,在大多数病例中取得了显著疗效。对于LHRH类药物的研究取得了诸多进展 ,对LHRH及其受体自身的分布与功能也有多方面的发现 ,本文将国外近年来对LHRH及其受体的基础研究与前列腺癌的病理联系、临床上的药物匹配、与外科治疗及放疗的相互作用、新制剂及副作用等方面进行文献回顾