通过引物设计和提高退火温度提高实时定量PCR检测microRNA的特异性

目的：了解因某些microRNA (miRNA) 家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件。方法: 采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以克隆到质粒中的全长成熟miRNA为模板,比较在不同退火温度下各种错配引物与完全匹配引物在扩增miRNA上的效率差异,并根据由此得出的经验设计let-7家族成员引物,以克隆的成熟miRNA为模板,检测其在不同退火温度下区分相似家族成员的能力。此外,设计了10组3′末端碱基位置不同的特异引物,比较了它们在检测小鼠大脑miRNA表达水平上的差异。结果：提高退火温度12 ℃~14 ℃将最大限度增加特异性而不降低敏感性,将引物的3′ 末端置于差异碱基或其附近可以有效区分相似miRNA序列,将引物3′ 末端置于miRNA第18~20个碱基,可避免漏检较短的成熟miRNA,使定量更真实准确。结论：精心设计引物并提高退火温度可提高实时定量PCR检测microRNA的特异性和准确性。     

糖尿病患者阴道念珠菌定植状况分析

目的：了解糖尿病患者阴道念珠菌定植情况,探讨糖尿病与念珠菌性外阴阴道炎（VVC）的相关性。  方法：选择144例糖尿病患者(有阴道相关症状者56例,无症状者88例) 及150例健康体检者进行阴道念珠菌培养,采用科玛嘉显色培养基对检出的64株念珠菌进行菌种分型。  结果：糖尿病组念珠菌检出率（44.4%,64/144）明显高于对照组（18.0%,27/150）（P<0.05)。糖尿病组白念珠菌占75.0%（48/64）,对照组白念珠菌占51.9%（14/27）,糖尿病组白念珠菌构成比高于对照组（P<0.05）。糖尿病患者有症状组念珠菌检出率为64.3%（36/56）,无症状组检出率为31.8%（28/88）,有症状组念珠菌检出率明显高于无症状组（P<0.05）;有症状组白念珠菌占88.8%（32/36）,无症状组白念珠菌占57.1%（16/28）,有症状组白念珠菌构成比明显高于无症状组（P<0.05）;有症状组光滑念珠菌占2.8%（1/36）,无症状组光滑念珠菌占28.6%（8/28）,有症状组光滑念珠菌构成比明显低于无症状组（P<0.05）。  结论：糖尿病能增加念珠菌在阴道定植的风险,其中白念珠菌是致病的主要菌种,无症状念珠菌携带患者中光滑念珠菌所占比例较高。     

MMP-3和TIMP-3在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的 研究基质金属蛋白酶3(MMP-3)及其抑制物组织基质金属蛋白酶抑制剂3(TIMP-3)在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义.方法 通过免疫组化Elivision法检测48例膀胱移行细胞癌组织及20例正常膀胱组织中的MMP-3和TIMP-3的表达.结果 MMP-3和TIMP-3在正常膀胱组织中不表达,随着肿瘤分级和分期的增高,MMP-3表达增高,但差异无统计学意义(P＞0.05).TIMP-3表达降低,但在肿瘤分级中差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MMP-3的高表达,TIMP-3的低表达与膀胱移行细胞癌的恶性程度有关,在膀胱移行细胞癌的发生发展中起重要作用,可作为临床判断膀胱移行细胞癌的恶性程度及预后的重要参考指标.     

巨噬细胞极化在糖尿病合并根尖周炎中作用的研究

目的:探究巨噬细胞极化在糖尿病合并根尖周炎中作用,及高糖环境对巨噬细胞极化影响.方法:8周龄雄性Wistar大鼠(对照组)和GK大鼠(糖尿病组)构建根尖周炎模型,2周、4周取材.苏木素-伊红(hematoxylin-e-osin,HE)染色观察根尖炎症浸润;免疫组化观察炎症因子表达;免疫荧光观察巨噬细胞极化情况.体外培...     

血清葡萄糖-6-磷酸异构酶与自身免疫性疾病相关性研究

目的探讨血清葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）水平与各种自身免疫性疾病（AID）的关系。方法比较正常对照和各种AID确诊病例的血清GPI浓度,分析GPI在各种AID中的检测价值。结果类风湿性关节炎（RA）组的GPI浓度和阳性率都显著高于其他AID组和正常对照组（P〈0．001）,系统性红斑狼疮（SLE）组、干燥综合征（SS）组、多发性肌炎（PM）组、进行性系统性硬皮病（SSC）组和强直性脊柱炎（AS）组GPI的阳性率均在25％以下,显著低于RA组的阳性率（71．0％）。结论在各种AID中,RA组血清中GPI升高最明显。血清GPI检测可作为RA的诊断指标。如果GPI和类风湿因子（RF）联合检测,将对RA的诊断具有较高价值。     

成年人骨朗格汉斯组织细胞增生症一例并文献复习

目的 探讨成年人骨朗格汉斯组织细胞增生症（LCH）的临床特点、治疗和预后,进一步提高对成年人骨LCH的认识.方法 回顾性分析1例成年骨LCH患者的临床资料并复习相关文献.结果 1例多发骨破坏患者经病理活组织检查证实为成年人骨LCH,排除转移癌及骨髓瘤,分型为单系统多部位,需要全身治疗.结论 成年人骨LCH罕见,临床表现多样,易误诊、漏诊,需病理证实,确诊后要进行病情评估及分型,再进行个体化治疗.     

肛垫缝扎固定术治疗痔病36例

目的:探讨肛垫缝扎固定术在治疗痔病中的临床应用价值。方法:采用肛垫缝扎固定术对36例痔病患者进行肛垫缝扎固定治疗。结果:治愈33例(91.67%);出血症状消失率达到96.55%,脱出症状消失率达到87.1%。结论:肛垫缝扎固定术是一种有效的治疗痔的微创外科手术,具有安全、有效、痛苦轻、并发症少等优点。     

胎盘植入18例超声诊断与分析

目的：探讨彩色多普勒超声对胎盘植入尤为穿透性胎盘的诊断要点及分析.方法：本组对手术病理证实的18例胎盘植入患者二维声像图及彩色多普勒特征进行回顾分析.结果：18例患者中仅有3例是穿透性胎盘超声诊断或疑为胎盘植入,诊断率仅为16%.穿透性胎盘植入超声特点为胎盘完全覆盖宫颈内口,面积增大增厚,胎盘内多发血池,胎盘后间隙消失,肌壁变薄显示不清,CDFI未见正常宫壁静脉丛,而代之以迂曲增宽的血管,胎盘似置于＂火海样＂血管之上.结论：彩色多普勒超声在产前产后检查胎盘有无植入具有重要应用价值,为临床选择制定合理的治疗方案提供可靠的诊断依据,指导临床及时采取相应的手术措施.     

HPLC检测右旋佐匹克隆中的手性杂质

目的 建立检测右旋佐匹克隆中手性杂质的方法.方法 采用RP-HPLC法,Chiral-AGP色谱柱(150 mm×4.0 mm,5μm);流动相为20 mmol·L-1醋酸钠-醋酸缓冲液(Ph5);流速0.9 ml·min-1;检测波长225 nm;柱温30℃.结果 佐匹克隆对映体达基线分离,右旋佐匹克隆0～20.0 mg·L-1与峰面积线性关系良好(r=0.9998).结论 所建方法直接、简便、快速,可用于检测右旋佐匹克隆中手性杂质.     

人淋巴因子激活的杀伤细胞抗生素肽的分离纯化

目的　分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞 (lym phokine activated killer,L AK)内源性抗生素肽。方法　采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞 ,并用 IL- 2和 PHA刺激培养。 5 %乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物。应用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反相高效液相色谱技术分离纯化多肽 ,Tricine- SDS-PAGE鉴定其分子量 ,并运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性。结果　从人 L AK细胞酸溶性提取物中纯化出多个多肽 ,其中 HL P- 2 b、HL P- 3a完全纯化 ,分子量分别为 7.9× 10 3u和 4× 10 3u。HL P- 2 a、HL P- 2 c、HL P- 3b和 HL P- 3c基本纯化 ,主带分子量分别为 7.2× 10 3u、10 .4× 10 3u、6 .4× 10 3u、6 .4× 10 3u。 HL P- 3a具有抗金黄色葡萄球菌活性 ,HL P- 2 a、HL P- 2 b、HL P- 2 c、HL P- 3b、HL P- 3c具有抗金黄色葡萄球菌活性和抗白色念珠菌活性。结论　人 L AK细胞含多种内源性抗生素肽分子