潍坊市2004年碘缺乏病健康教育调查分析

潍坊市多年来一直把碘缺乏病(IDD)健康教育作为IDD防治工作的重点之一，为了解我市目前居民IDD防治知识的普及状况，为今后健康教育工作提供科学依据，2004年5月份，对我市12个县(市、区)城镇和农村的五年级学生、家庭主妇进行了一次IDD健康教育调查，现将调查情况报告如下。     

应用十六烷基三甲基溴化铵纯化PCR产物

目的建立应用十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyltrimethyl ammonium bromide, CTAB)PCR产物纯化的方法。方法应用CTAB对PCR产物进行选择性沉淀。CTAB与DNA形成复合我1.2 mol/L NaCl溶液中溶解,再用乙醇将PCR产物沉淀出来。结果这种方法可以去除PCR产物中引物和小分子dNTP。虽然纯化的产率占现在市场上的一些试剂盒产率的80%,但其成本比较低,仍不失是一种PCR产物纯化的方法。结论利用十六烷基三甲基溴化铵可以用于PCR产物纯化。     

利用RD技术对HCV-1b基因片段的克隆与分析

目的：利用限制性显示(RD)技术对丙型肝炎病毒1b亚型(HCV-1b)基因片段进行克隆与分析。方法：用限制性内切酶Sau3AⅠ消化HCV-1b cDNA，所得的限制性内切酶片段物进行RD-PCR扩增，扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定。结果：得到20个大小均一(200—1000bp)的限制性片段，测序结果表明，属于HCV-1b基因。结论：RD技术能快速收集大量长度适宜、大小相对均一的病毒基因片段，能很好地用于建立cDNA文库及制备诊断芯片探针。     

地塞米松对骨髓基质细胞中骨保护素与核因子κB活化受体配体基因表达的干预作用

目的观察应用地塞米松后骨髓基质细胞中骨保护素与核因子κB活化受体配体基因表达水平的变化,并探讨地塞米松对骨代谢的影响.方法实验于2004-01/09在仲恺农业技术学院生理生化教研室实验室完成.选择雄性6周龄SD大鼠4只,抽取大鼠股骨骨髓,使用密度梯度离心分离有核细胞,贴壁分离法获取骨髓基质细胞,以2×104/cm2的密度接种进行细胞传代与分组实验.实验分2组,对照组继续用原培养液培养;实验组在原培养液基础上加入地塞米松(浓度10-7mol/L)诱导培养.两组细胞继续培养1周后,抽取总RNA进行半定量反转录聚合酶链反应分析.比较两组骨髓基质细胞中骨保护素与核因子活化受体配体基因的表达水平.骨保护素与核因子κB活化受体配体mRNA表达量用β-actin表达量来标准化.结果①骨保护素mRNA表达水平(骨保护素/β-actin)实验组显著低于对照组[1.21±0.12,2.05±0.11(t=10.320,P＜0.01)].②核因子κB活化受体配体mRNA表达水平(核因子κB活化受体配体/β-actin)实验组显著高于对照组[2.53±0.14,1.17±0.19(t=11.525,P＜0.01)].③核因子κB活化受体配体/骨保护素mRNA表达水平比值实验组显著高于对照组[2.21±0.17,0.62±0.08(t=16.925,P＜0.01)].结论加入地塞米松后骨髓基质细胞骨保护素分子合成减少,从而减弱其对核因子κB活化受体配体-核因子κB活化受体信号轴的抑制作用,因此破骨细胞分化及骨吸收作用相对增强,导致骨重建失衡.     

真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B的构建及在293T细胞中的表达

[摘要] 目的: 构建人基因PDGF-B真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B,并在293T细胞中进行瞬间表达。方法: 采用PCR方法从购自美国典型培养物保藏中心含有PDGF-B基因全长cDAN序列的质粒中扩增出PDGF-B的cDAN片段，并与真核表达载体pIRES-EGFP连接，双酶切鉴定，最后采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将pIRES-EGFP-PDGF-B转入293T细胞中，利用荧光显微镜和Western blotting进行表达鉴定。结果: 成功克隆了PDGF-B基因全长cDAN，真核表达载体pIRES-EGFP-PDGF-B被成功构建，双酶切鉴定正确，表达载体能在293T细胞内正确地表达成熟的PDGF-B蛋白，并可分泌到细胞外。结论: 成功构建了pIRES-EGFP-PDGF-B真核表达载体，为进一步利用PDGF-B对脊髓损伤进行基因治疗奠定基础。     

基于Lasso-Cox回归筛选影响心脏瓣膜病患者术后ICU时间的因素

目的采用Lasso-Cox回归法分析影响心脏瓣膜病患者术后ICU时间的因素。 方法采用回顾性方法连续收集2014年1月至2015年12月930例我院行心脏瓣膜手术患者的临床资料,采用Lasso-Cox回归法筛选因素建立2个模型：Pre模型（纳入术前因素）和Pro模型（纳入术前和术中因素）,通过受试者工作特征曲线（ROC）的曲线下面积（AUC）验证纳入不同因素对ICU时间预测的准确性。 结果患者的ICU中位时间为70.5 h,Pre模型纳入影响心脏瓣膜病患者术后ICU时间的术前因素包括年龄、术前总胆红素、高血压病、术前肌酐清除率,Pro模型纳入影响心脏瓣膜病患者术后ICU时间的术前及术中因素包括年龄、术前总胆红素、高血压病、术前肌酐清除率、术前红细胞计数（RBC）、体外循环时间、主动脉阻断时间、三尖瓣置换术;Pre模型在24、48、72 h转出ICU端点的AUC值分别为0.6144（95%CI：0.5684~0.6611）、0.6543（95%CI：0.6251~0.7056）、0.6657（95%CI：0.6203~0.7056）,Pro模型分别为0.7021（95%CI：0.6622~0.7403）、0.7123（95%CI：0.6690~0.7442）、0.7424（95%CI：0.7128~0.7833）。 结论年龄、术前总胆红素、高血压病、术前肌酐清除率、术前RBC、体外循环时间、主动脉阻断时间、三尖瓣置换术均可影响心脏瓣膜病患者术后ICU时间;联合术前及术中因素能更准确地预测心脏瓣膜病患者术后ICU时间。     

中老年人群人体成分与血脂及肝肾功能水平研究

目的分析中老年人群人体成分与血脂及肝肾功能指标之间的相关性。方法选择健康体检中心体检者403例,排除严重感染、心肌梗死病史、肝肾功能不全、肿瘤病史及无法独自站立检查者等。通过Biospace Inbody 720人体成分分析仪进行人体成分测定,主要包括:体质指数(BMI)、矿物质、蛋白质、体脂肪、腹围、臀围及内脏脂肪区域(VFA)等指标。同时收集血清测定血脂及肝肾功能相关指标。结果 BMI、体脂肪、腹围、臀围及VFA不受性别影响。BMI、体脂肪、腹围、臀围及VFA与总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)呈正相关,与高密度脂蛋白(HDL)呈负相关;剔除年龄、性别因素后,对人体成分与血脂各项指标进行偏相关分析,上述指标仍具有统计学意义(P<0.01)。BMI、腹围、臀围及VFA与谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)呈正相关;剔除年龄、性别因素后,人体成分结果仍与ALT和AST具有良好的相关性,但相关系数有所减小(P<0.01);人体成分各项指标与肌酐(Cr)有良好的相关性。结论中老年人体成分与血脂、肝肾功能水平是密切相关的。通过对人体成分的分析,可早期发现人体成分的异常,指导中老年人群健康的生活方式,尽早预测、发现营养相关性疾病,协助临床上的诊断。     

2000-2009年H1N1甲型流感病毒神经氨酸酶的进化分析和序列解析

目的研究2000-2009年世界各地不同物种流感病毒神经氨酸酶的进化特征和关键位点的变异情况。结论从NCBI数据库下载所需序列,采用生物信息软件对其氨基酸序列进行种系发生树的构建,以及序列特性的分析。结果新型流感病毒和猪/禽流感病毒NA蛋白在进化关系上非常接近,并且抗原决定簇和糖基化位点的变异也大致相同。结论新型毒株NA蛋白可能由早期的H1N1猪/禽流感病毒进化而来,在进化过程中,一些重要位点的变异导致NA蛋白发生抗原性变异,从而导致流感的大爆发。