抗O型口蹄疫病毒VP1单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗O型口蹄疫病毒（FMDV）衣壳蛋白VP1的单克隆抗体（mAb）并进行特性鉴定。方法：以自行构建表达的O型FMDV—VP1表位重组蛋白（VP1epi）为抗原免疫BALB／c小鼠，按常规方法进行细胞融合。采用有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株，用Western blot、间接ELISA和斑点免疫测定法对mAb的特异性进行鉴定。结果：成功地获得1株分泌抗VPlepi重组蛋白mAb的杂交瘤细胞株“C7”，其分泌的mAb为IgG1亚类，能特异性地识别VP1epi重组蛋白，其腹水效价可达1：12800。斑点免疫测定法显示，该mAb能很好地识别灭活的FMDV。结论：VP1epi重组蛋白可代替FMDV制备抗天然FMDV—VP1的mAb。抗O型FMDV—VP1 mAb的成功制备，为进一步研究开发新型FMDV的检测方法奠定了基础。     

辣条中特丁基对苯二酚测定方法研究

目的 建立准确适用的辣条中特丁基对苯二酚的2种测定方法,并对结果进行比较.方法 优化国家标准中关于特丁基对苯二酚的提取、净化和液相色谱法,同时建立了辣条中特丁基对苯二酚的液相色谱串联质谱法,并对2种方法进行方法学验证,运用统计学比较2种方法测定结果的差异性.结果 液相色谱法在5.0 μg/ml ～ 200.0 μg/m...     

建立一种用重组蛋白检测抗口蹄疫病毒抗体的间接ELISA方法

目的研究以重组蛋白作为包被抗原检测口蹄疫病毒（FMDV）感染后的动物血清中特异性抗体的可能性,为建立一种非病毒颗粒的ELISA检测试剂盒提供实验依据。方法利用自行构建表达的O型口蹄疫病毒VP1表位肽重组蛋白（VP1epi）作为包被抗原,采用间接ELISA方法确定抗原的最佳工作浓度和包被方法,优化各项实验条件,并以FMDV感染后的豚鼠血清作为标准阳性血清确定ELISA方法的特异性和灵敏度。结果FMDV感染后的阳性豚鼠血清可以很好地识别VP1epi重组蛋白,用此蛋白包被检测抗FMDV抗体的灵敏度可达1∶3200,并证明所检测的抗体是FMDV特异性的。结论VP1epi重组蛋白可以替代FMDV颗粒用于建立检测抗FMDV抗体的ELISA试剂盒。     

Hsp65与HBV多表位融合基因的表达及其免疫应答研究

目的 用基因工程的方法构建并表达一种由 Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV表面抗原与核心抗原的多个表位组成的乙型肝炎治疗性疫苗(简称为Hsp65-HBV).方法 采用PCR方法人工合成由PADRE和HBV的多个表位组成的基因片段,将此片段克隆入原核表达质粒pET28a/Hsp65后.利用大肠杆菌进行融合蛋白的表达.用纯化后的蛋白免疫nalb/c 小鼠.将小鼠脾细胞用HBsAg 装载的P815细胞在体外刺激5 d后,用流式细胞仪检测IFN-γ 细胞的频率.用ELISA方法检测小鼠血清中的特异性抗体(IgG1和IgG2a)的产生.结果 由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白能在大肠杆菌中进行高水平的表达,能诱导小鼠产生IgG2a亚型的特异性抗体,并能诱导 HBV 特异性的 IFN-γ 的淋巴细胞的产生.结论 获得了大肠杆菌表达的由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白,并能被机体以MHC-Ⅰ途径递呈,为检测本融合蛋白是否能激发出HBV特异性CTL反应奠定了基础.     

激励式心理疗法对微创高血压脑出血患者术后康复应对方式及积极性的影响

目的:探讨激励式心理疗法对微创高血压脑出血患者术后康复应对方式及积极性的影响。方法:选取2016年1月至2017年1月我院收治的微创高血压脑出血患者60例。根据干预方式分为观察组和对照组,每组30例,对照组给予常规康复干预,观察组给予激励式心理疗法干预,比较两组患者康复情况和心理变化。结果:观察组患者干预后生活质量指数(QOL)和功能独立性量表(FIM)评分均明显高于对照组,差异具有统计学意义(t=2.452,8.318;P0.05);观察组患者康复干预后焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)评分明显低于对照组,差异具有统计学意义(t=8.002,7.911;P0.05)。结论:激励式心理疗法能够提高微创高血压脑出血患者术后生活质量和生活自理能力,缓解患者焦虑、抑郁的不良情绪。     

抗BCG Hsp65单克隆抗体的鉴定及应用研究

目的:对制备的5株抗BCG Hsp65单克隆抗体(Hsp65 mAb)做进一步鉴定和应用.方法:采用ELISA方法对mAb的效价、亚类和结合抗原表位特性进行鉴定,应用mAb对Hsp65融合蛋白进行了Western blot和免疫荧光检测.结果:5株mAb的类型均为IgG,其中ⅠC1和ⅡC3株mAb为IgG1亚类,ⅠA5、ⅠC3和ⅠD6株mAb为IgG2a亚类. 抗原表位竞争结合分析显示,在配对的不同亚类mAb中,存在着结合Hsp65表面不同抗原表位的mAb.通过Western blot检测证实,Hsp65 mAb对Hsp65-MUC1检测结果,与MUC1 mAb的一致.细胞免疫荧光检测显示,制备的 mAb能够识别通过蛋白装载进入树突状细胞内的Hsp65-PSA.结论:获得的Hsp65 mAb可做为检测工具,用于研究BCG Hsp65及其融合蛋白的功能和表达.     

牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒重组蛋白疫苗的构建及功能研究

目的为了取代有安全隐患的牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒灭活疫苗,我们构建了基因工程重组蛋白疫苗。方法应用PCR方法合成含有表位的基因片段,经过克隆连接获得重组基因,在大肠杆菌中表达后经镍亲和层析纯化重组蛋白。重组蛋白免疫豚鼠后,分别经ELISA和乳鼠中和实验检测血清中抗FMDV抗体水平。结果构建了牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒重组蛋白疫苗的结构基因,并成功表达和纯化了该重组蛋白。功能实验表明,该蛋白在豚鼠体内诱生了高水平的抗牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒的中和性抗体。结论该重组蛋白为制备牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒新型疫苗提供了有价值的线索。     

肝病患者血清透明质酸RIA的临床分析

透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)是人体基质的主要成分之一,由间质细胞合成,经淋巴系统进入血液,大部分迅速被肝脏内皮细胞摄取后降解。肝病患者HA代谢根据其病程、类型、受损程度不同其值也发生不同的变化,本文观察了5组不同类型的肝病患者HA浓度水平,结果显示,肝癌、慢性活动性肝炎患者HA水平显著增高,与正常对照p<0.001,急性甲肝、慢性迁延性肝炎患者HA水平轻度增高,乙肝恢复期患者HA水平与正常对照无显著差异p>0.05,因而具有临床鉴别诊断意义,特作报道如下。对象和方法一、对象: (一)正常对照组:经体检无肝、肾功能异常的健康人50例,年龄范围21～65岁,平均年龄35岁。 (二)肝病组:选择本院传染科患者及院外标本共计105例。其中肝癌患者10例,急性甲型肝炎33例,慢性迁延性肝炎30例,乙肝恢复期20例,慢性活动性肝炎12例,年龄范围5～78岁,平均年龄33岁。     

椎体压缩性骨折MRI信号特点与PVP术后疗效相关性分析

目的分析骨质疏松性椎体压缩骨折(OVCF)术前MRI信号特点及比较经皮椎体成形术(PVP)术前、术后疼痛状及功能障碍改善情况,以探索OVCF的MRI信号特点和PVP疗效的相关性。方法回顾性分析52例患者,116节椎体PVP治疗的临床及影像学资料。术前及术后进行视觉模拟疼痛评分(VAS)及Oswesty功能障碍指数评价,并观察其并发症情况。根据MRI骨髓水肿的程度和范围将其分为部分骨髓水肿(A组)、完全骨髓水肿(B组)和无骨髓水肿(C组),然后比较3组术前、术后疼痛和功能障碍情况。结果 3组间术前VAS差异无统计学意义(P>0.05),术后疼痛缓解程度及功能改善程度差异有统计学意义(P<0.05)。A、B组与C组比较疼痛缓解明显,B组比A组疼痛缓解程度大,表明骨髓水肿范围越大,PVP治疗后疼痛缓解程度越大。结论 PVP是治疗OVCF的有效方法,MRI信号特点对于OVCF治疗效果有一定的预测价值,有骨髓水肿比无骨髓水肿治疗效果好,且水肿范围越大,PVP治疗后疼痛缓解程度越大。     

一次性酒精对缺血-再灌注大鼠神经功能及海马区GLUT-1表达的影响

目的探讨一次性给予酒精对缺血-再灌注大鼠神经功能及海马区葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)表达的影响。方法将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为酒精组24例(C组)、对照组8例(B组)、假手术组8例(A组);酒精组分为1.0g/kg组(C1)、1.5g/kg组(C2)、2.0g/kg组(C3)3个亚组,制作大脑中动脉闭塞缺血大鼠模型,缺血后行Longa 5分评分。C组于缺血-再灌注后即刻、1h、2h、3h一次性腹腔注射不同剂量(1.0g/kg、1.5g/kg、2.0g/kg)的酒精;B组一次性腹腔注射等剂量的生理盐水,缺血-再灌注后24h再行Longa 5分评分,取脑后采用免疫组化法测定大鼠缺血-再灌注脑组织海马区GLUT-1表达阳性细胞数。结果缺血-再灌注后24h与对照组比较,C组大鼠Longa评分明显减小(P<0.01),C1、C2、C3组间比较,C3组Longa评分减小最明显(均P<0.05)。C组大鼠海马区GLUT-1表达阳性细胞数明显高于B组(均P<0.01);C1、C2、C3组间比较,C2组与C3组均较C1组阳性细胞表达增多(均P<0.01);而C2组与C3组比较,GLU-1表达阳性细胞数无明显差别(P>0.05)。C组在缺血-再灌注后即刻、1h、2h、3h给予酒精,海马区GLUT-1表达阳性细胞数无明显差异(均P>0.05),但C组比B组GLUT-1表达阳性细胞数表达明显增多(P<0.01)。结论一次性给予酒精治疗可减轻缺血-再灌注大鼠神经功能缺损程度,酒精可能是通过促进神经保护因子GLUT-1的表达起到神经保护作用的。