人miR-139高效真核表达载体的构建及其功能初探

目的 构建人miR-139高效真核表达载体,初步探究miR-139在乳腺癌ZR75-1细胞中的功能.方法 设计成熟miR-139的PCR引物,扩增包含miR-139成熟序列的基因组序列.将扩增产物亚克隆到真核表达载体PIRES2-EGFP(IE)上,构建miR-139真核表达载体IE-139.将IE-139转染至乳腺癌ZR75-1细胞中,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139的表达情况,同时检测过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc、EIF4G2和ZBTB34的mRNA水平.结果 酶切、测序结果表明,人miR-139真核表达载体构建成功;qRT-PCR表明,miR-139能在乳腺癌ZR75-1细胞中高效表达(P<0.01),过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),但ZBTB34的下降水平不明显.结论 成功构建了人miR-139真核表达载体IE-139,通过qRT-PCR检测,证明该载体能成功实现miR-139的高效过表达,并且miR-139能明显抑制乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平,这为进一步研究miR-139的功能及调控靶基因的分子机制奠定了基础.     

环式增强型绿色荧光蛋白热稳定性及Npu DnaE内含肽高反式剪接效率研究

目的在体内借助Npu DnaE内含肽（intein）的高效反式剪接作用获得环式增强型绿色荧光蛋白（Cyc-EGFP）。方法对构建的融合表达载体pET/Npu DnaE intein/EGFP-28a（＋）进行诱导、表达,之后利用亲和纯化获得高纯度的Cyc-EGFP和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,并对二者的荧光强度和热稳定性进行比较。结果 NpuDnaE内含肽环化效率可达98%以上,明显优于Ssp DnaE内含肽,环化后的EGFP热稳定性提高了4～5℃。结论 Cyc-EGFP这一明显优势使蛋白环化在蛋白质工程等领域具有重要的应用价值。     

荷瘤小鼠瘤苗治疗疗效与红细胞天然免疫活性相关性及其意义

新近利用抗原处理细胞(APC细胞)处理制备瘤疫效疗较为肯定,认为天然免疫细胞DC细胞瘤疫更有其应用价值.红细胞也是天然免疫细胞.能否用红细胞处理补体调理过的肿瘤细胞制备瘤苗是值得探讨的.有的学者认为红细胞是T细胞活性的调节器,我们的实验有可能为此提供的依据[Arosa FA, Currpharm Des, 2004, 10(27): 191].     

三七皂苷对烫伤大鼠心肺组织抑制性G蛋白α-mRNA表达的抑制作用

目的：研究三七皂苷对严重体表烫伤大鼠心肺组织抑制性G蛋白(Gi)α-mRNA表达的影响。方法：采用大鼠30%体表面积Ⅲ度烫伤模型,烫伤前20 min给以不同剂量的三七皂苷,观察其对烫伤后3 h心肺组织Gi2α-,Gi3α-mRNA表达的影响;以半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定mRNA相对含量。结果：大鼠烫伤后3 h,Gi2α-mRNA含量在心肌增加178.0%(P＜0.05),在肺组织增加263.0%(P＜0.01);Gi3α-mRNA含量在心肌中增加236.0%(P＜0.01),在肺组织中增加222.0%(P＜0.05)。三七皂苷200 mg&;#8226;kg^-1使烫伤3 h大鼠心肌Gi2α-mRNA含量减少46.0%(P＜0.01);三七皂苷50,100,200 mg&;#8226;kg^-1使烫伤3 h大鼠肺组织Gi2α-mRNA含量分别减少35.8%,44.4%和60.6%(P＜0.05或P＜0.01),使烫伤3 h大鼠心肌Gi3α-mRNA含量分别减少33.9%,30.1%和42.9%(P＜0.05或P＜0.01),使肺组织Gi3α-mRNA含量分别减少34.5%,54.7%和55.6%(P＜0.05或P＜0.01)。结论：三七皂苷对严重体表烫伤大鼠心肺组织Gi2α-,Gi3α-mRNA表达增加具有抑制作用。     

肝病患者红细胞cr1基因组密度多态性与红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力的相关性

目的为了研究不同肝病患者人群中红细胞ｃｒ１基因组密度多态性与红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力的相关性．方法乙型肝炎患者４８例，肝硬变４９例，肝细胞性肝癌９４例及正常对照８０例．采用ＰＣＲ加ＨｉｎｄⅢ酶切技术测定红细胞ｃｒ１基因组密度多态型（ＨＨ型、ＨＬ型、ＬＬ型），采用肿瘤红细胞花环试验测定红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力．结果在不同人群中，ＨＨ型红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力明显大于ＨＬ型红细胞，而ＨＬ型红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力明显大于ＬＬ型红细胞．在相同基因型人群中，正常人红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力显著高于乙型肝炎、肝硬变和肝癌患者．结论红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力与ｃｒ１基因组密度多态型别有关，同时也与后天获得性影响因素有关．     

HBV标志物结果报告计算机处理系统的开发和临床应用

乙型肝炎病毒(HBV)标志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)是全国医疗机构应用广泛,普遍开展的检验项目,多采用酶联免疫吸附试验检测。但酶联免疫吸附试验常使检验结果出现一定程度的偏差,以致于出现假阳性、假阴性。因此,在结果判定上往往采用了结合酶标仪的吸光值和临界值,人工报结果的方式,对一些弱阳性或少见模式的改变提出警示。这样不仅费时、费力,而且一不小心就易出错。为了提高HBV标志物检测的效率和工作质量,我们通过多年的实践,将卫生部临检中心和上海市临检中心HBV检测室内质控的要求与实际工作相结合,设计了该…     

锌对腹腔巨噬细胞吞噬功能影响的初步研究

目的：探讨饲料锌对腹脸巨噬细胞（Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＰＭΦ）吞噬功能的影响及其机理，方法；建立大鼠缺锌，高锌模型，测定大量ＰＭΦ吞噬率，吞噬指数及ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ，结果（１）缺锌（ＺＤ）组ＰＭΦ吞噬率，吞噬指数均非常显著地低于配对（ＰＦ）组及自由喂养（ＡＬ）组，经补锌后得以恢复，高锌（ＺＥ）组明显低于ＡＬ组。（２）ＰＭΦ经体外脂多糖（ＬＰＳ）作用后胞内ｃＡＭＰ含量，ｃＡＭＰ     

银屑病患者红细胞天然免疫与免疫球蛋白、补体及可溶性IL-2R的相关性研究

目的 :　探讨银屑病患者红细胞天然免疫与细胞及体液免疫功能的状况及其相互关系。方法 :应用流式细胞仪检测银屑病患者新鲜红细胞表面CD35分子的表达水平 ,并同时采用速率散射比浊法对血清中IgG、IgA、IgM及C3、C4 含量进行测定 ,采用双抗体夹心法测定血清可溶性白细胞介素 - 2受体(sIL 2R)水平。结果 :　银屑病患者红细胞CD35定量和IgA、C3及C4 含量均较正常人明显增高 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 0 1,P <0 .0 1) ,红细胞CD35定量与IgA呈高度显著正相关 (γ =0 .6 6 8,P <0 .0 0 1) ,与sIL 2R呈显著正相关 (γ =0 .395 ,P <0 .0 5 ) ,与C4 呈显著正相关 (γ =0 .4 0 3,P <0 .0 5 )。结论 :　银屑病发病与免疫异常有关 ,红细胞天然免疫与细胞及体液免疫相互联系共同参与了银屑病的过程 ,并可能在发病机制中具有重要作用     

K19mRNA与大肠癌淋巴结微转移关系的实验研究

本文应用RT－PCR方法检测淋巴结中组织特异的K19mRNA表达，并与传统的病理学检测对照，探讨其在大肠癌淋巴结转移诊断中的应用．1材料和方法1．1材料10例大肠癌及其62枚周围淋巴结标本均取自本院普外科患者，并另取2份正常大肠组织、4枚正常林巴结、5枚肠良性肿瘤患者手术分离淋巴结作对照．标本获得后立即用DEPC处理的PBS洗二遍，分为二份，一份置－40℃贮存，以备抽提RNA；另一份浸泡于福尔马林溶液中送病理鉴定（检测按病理科常规）．1．2方法引物由中科院上海细胞所合成，序列如下：K19cDNA引物，K1AGGTGGATTCCGCTCCGG…