利用融合PCR技术和T载体克隆技术构建结核分枝杆菌PhoPR双组份系统缺失突变载体

目的 基于融合PCR技术(SOE-PCR),T载体克隆技术,构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)双组份系统缺失突变载体的方法.方法 利用SOE-PCR技术,将PhoP,PhoR和PhoPR基因上,下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合,构建PhoP,PhoR和PhoPR突变片段,然后将突变片段直接与T载体连接,将其转入E. coli DH5α感受态细胞并筛选抗性克隆,进而获得MTB PhoP,PhoR和PhoPR缺失突变载体.结果 成功构建MTB PhoPR双组份系统缺失突变载体,与传统方法相比,效率高,周期短.结论 基于融合PCR技术和T载体克隆技术成功构建MTB PhoPR双组份系统缺失突变载体,为下一步构建MTB突变株以及相关研究奠定基础.     

PCR方法鉴定结核分枝杆菌临床分离株

目的:用3对引物PCR扩增的方法对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.方法:将3对特征性的结核分枝杆菌标记基因:MPT40基因、α抗原基因和IS6100插入序列,分别放入PCR体系中,在各自的退火温度下进行PCR扩增,通过对扩增产物的不同带型进行分析,对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.结果:用3对引物PCR扩增的方法可将各种类型的结核分枝杆菌以及结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌鉴别开.结论:3对引物PCR扩增的方法是一种有效的结核分枝杆菌菌种鉴定的方法,可用于结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌以及各种类型的结核分枝杆菌的区分.     

结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性研究

目的通过比较分析不同毒力结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达差异,探讨Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性。方法分别提取卡介苗菌株(BCG)、结核分枝杆菌国际标准无毒珠(H37Ra)、结核分枝杆菌国际标准强毒珠(H37Rv)、新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株总RNA,并进行纯度鉴定。运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达,比较分析不同毒力结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达差异。结果 H37Rv菌株和新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株与BCG菌株相比,Pup基因表达分别上调1.67、2.65倍,Dop基因表达分别上调2.42、3.69倍,PafA基因表达分别上调4.09、7.36倍,Mpa基因表达分别上调2.65、3.91倍,差异有统计学意义(P<0.05);BCG、H37Ra、H37Rv菌株与新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株相比,Pup基因表达分别下调62%、59%、37%倍,Dop基因表达分别下调63%、64%、34%倍,PafA基因表达分别下调87%、86%、44%倍,Mpa基因表达分别下调64%、67%、32%倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在BCG、H37Ra、H37Rv、新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达有差异性,且与菌株毒力呈正相关。Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性具有相关性。     

HLA-DRB1基因多态性与新疆汉族人群结核病易感性的研究

目的 探讨HLA-DRB1基因的多态性与新疆汉族人群结核病发生发展的关联.方法 采用PCR-SSP技术对228例新疆塔城地区和石河子地区的汉族肺结核患者及231例汉族健康志愿者的HLA-DRB1的13个等位基因分型,比较各等位基因的频率(GF),统计学分析采用χ2检验,研究不同等位基因与新疆汉族人群结核病易感性的关联.结果 结核病例组HLA-DRB1*12基因频率为9.92%,明显高于对照组的2.85%,两者差异有统计学意义(χ2=18.76,Pc＜0.01);而结核病例组中的HLADRB1*11等位基因的基因频率低于健康对照组(χ2=9.513,Pc＜0.05),差异有统计学意义.结论 HLA-DRB1*12基因可能是新疆汉族人群的结核病易感基因,HLA-DRB1*11可能是新疆汉族人群与结核病相关的保护性基因.     

卡介苗菌株Hsp16.3基因打靶载体的构建及鉴定

目的 构建卡介苗菌株Hsp16.3基因打靶载体.方法 体外培养卡片介苗菌株并提取基因组DNA,扩增Hsp16.3基因两侧序列5′-Hsp16.3和3'-Hsp16.3,分别插入到pKO质粒载体预定位点中构建Hsp16.3基因置换型打靶载体,筛选并进行PCR、双酶切鉴定及测序鉴定.结果 构建的卡介苗菌株Hsp16.3基因打靶载体,经PCR、双酶切鉴定及测序证实pKO质粒中的2个插入片段为所需目的基因.结论 成功构建出卡介苗菌株Hsp 16.3基因打靶载体.     

新世纪教师能力探讨

面临知识经济、信息化社会的挑战,科教兴国成为我国新世纪的发展战略.高校处于经济社会发展的基础地位,是实施科教兴国战略的生力军和实施国家创新体系的主力军.     

结核杆菌免疫保护性抗原Ag85A的基因克隆与表达研究

目的　为结核病新型疫苗研制提供靶基因和靶抗原。方法　根据结核杆菌 H 37Rv株免疫保护性抗原 Ag85 A的基因序列自行设计一对寡核苷酸引物 ,以结核杆菌 H37Rv株基因组 DNA为模板 ,通过 PCR扩增获得具有完整开架读码框 (ORF)的 Ag85 A抗原基因 ,并将其正向插入真核和原核穿梭表达型载体 p BK- CMV构建重组质粒 ,重组质粒转入大肠杆菌后 IPTG诱导表达 ,并对其表达产物进行 Western- blotting分析。结果　PCR扩增获得了具有完整开架读码框的 Ag85 A抗原基因 ;构建了 Ag85 A抗原基因真核和原核穿梭表达型载体 ;Ag85 A抗原基因在大肠杆菌中实现了稳定表达。结论　成功地对结核杆菌免疫保护性抗原 Ag85 A进行了基因克隆与表达 ,为进一步研究其在结核病新型疫苗研制中的应用奠定了基础     

留学生病理生理学教学体会

病理生理学是一门很重要的医学基础课,对于留学生来说也同等重要,文章分析了病理生理学留学生教学的基本状况,为进一步做好留学生教学工作提供参考。     

病理生理学多媒体课件的开发及其在教学实践中的应用

病理生理学是一门比较活跃的前沿学科，学科内容更新快，理论性和逻辑性强，知识点多，其CAI课件的制作和应用有其独到之处和特色。本教研室制作了病理生理学CAI教学课件，并在教学中进行了应用，为CAI教学课件在病理生理学理论课教学中的应用提供经验和借鉴。     

TraSH技术可确定微生物基因组间功能差异

转座子定点杂交技术（transposon site hybridization,TraSH）是科技进步需要的产物,是近几年来通过对转座子研究的不断深入建立起来的一整套成熟技术.