自体吞噬在机体抗结核分支杆菌感染中的作用

结核分支杆菌长期处于持续感染状态是消灭结核病的最大阻碍之一。阻断吞噬体和溶酶体融合这一成熟过程是结核分支杆菌持续感染的最主要因素之一。近年来研究发现,诱导自体吞噬可以促进吞噬溶酶体的成熟,进而杀灭胞内寄生的结核分支杆菌。现就结核分支杆菌阻断吞噬体一溶酶体融合的分子机制、自体吞噬的分子机制,以及自体吞噬在促进结核分支杆菌吞噬体与溶酶体融合中的作用等作一综述。     

PCR方法鉴定结核分枝杆菌临床分离株

目的:用3对引物PCR扩增的方法对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.方法:将3对特征性的结核分枝杆菌标记基因:MPT40基因、α抗原基因和IS6100插入序列,分别放入PCR体系中,在各自的退火温度下进行PCR扩增,通过对扩增产物的不同带型进行分析,对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.结果:用3对引物PCR扩增的方法可将各种类型的结核分枝杆菌以及结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌鉴别开.结论:3对引物PCR扩增的方法是一种有效的结核分枝杆菌菌种鉴定的方法,可用于结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌以及各种类型的结核分枝杆菌的区分.     

结核分枝杆菌Hrp1蛋白的生物信息学分析

目的 应用生物信息学预测分析Hrp1蛋白结构功能和生物学特性.方法 生物信息学软件ORF Finder、SO-SUI、Protpapram、ProtScale、Signal IP、Tmpred、TMHMM、NetNGlyc、NetPhos-3.1-Servera、PSORT、WoLF PSORT、TargetP-2.0...     

结核分枝杆菌Hsp16.3与感染巨噬细胞凋亡的相关性研究

目的建立结核分枝杆菌感染RAW264.7株巨噬细胞模型,研究结核分枝杆菌Hsp16.3与感染巨噬细胞凋亡的相关性。方法分别用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗菌株感染RAW264.7巨噬细胞株,于感染后1、3、6及12h,利用激光共聚焦显微镜鉴定卡介苗及结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株感染RAW264.7巨噬细胞模型;同时利用流式细胞技术于上述各时间点检测各组感染巨噬细胞的凋亡率,并分析其时相性变化;利用PCR技术扩增模型目的基因,利用Western blot检测上述各个时间点Hsp16.3蛋白表达水平的时相性变化。结果激光共聚焦显微镜下观察到RAW264.7巨噬细胞内有标记MTB16KD的绿色荧光,证实结核分枝杆菌感染巨噬细胞模型构建成功。巨噬细胞感染结核分枝杆菌后凋亡率升高,其中感染后1、3和12h凋亡率H37Rv感染组与BCG感染组比较差异有统计学意义(P<0.05);巨噬细胞感染结核分枝杆菌后的PCR产物大小为435bp;感染细胞Hsp16.3蛋白表达升高,其中感染后1h和3h升高更显著。结论结核分枝杆菌感染可导致巨噬细胞凋亡,感染巨噬细胞的凋亡率与菌株毒力强弱有关,弱毒力结核分枝杆菌感染的巨噬细胞早期凋亡更显著;结核分枝杆菌感染巨噬细胞的凋亡与结核分枝杆菌表达Hsp16.3水平高低有关,在感染早期强毒力结核分枝杆菌Hsp16.3表达水平较高。     

卡介苗ERP基因缺失突变株的构建

目的构建卡介苗ERP基因缺失突变株。方法分别设计两对引物,通过聚合酶链反应（PCR）的方法扩增ERP基因两侧的2个目的片段,分别插入pKO质粒中,构建基因敲除质粒pKO-ERP,电转入至卡介苗菌株细胞内并与BCG基因组中的ERP基因同源交换,筛选出ERP基因敲除菌株。结果通过2次PCR筛选和1次蔗糖反筛选后得到的、并在含潮霉素培养基上不能生长的菌株为ERP基因敲除菌株。结论 pKO质粒可作为基因敲除有用的质粒载体,成功构建了卡介苗ERP基因缺失突变株。     

下调Mcl-1表达对H37Rv感染小鼠模型调控作用研究

目的用不同阻断剂下调调控抗凋亡蛋白Mcl-1表达信号通路,探讨下调Mcl-1表达对结核杆菌感染小鼠腹腔巨噬细胞凋亡和炎症反应的影响。方法制备结核分枝杆菌国际标准强H37Rv菌株菌悬液,感染BALB/c小鼠,再分别腹腔注射Mcl-1信号通路阻断剂AG490、PD98059、LY294002,同时设立对应的对照组。应用ELISA筛选不同阻断剂处理小鼠的最佳剂量,采用TUNEL试剂盒检测阻断剂应用后小鼠腹腔巨噬细胞凋亡率,透射电镜观察阻断剂应用后宿主巨噬细胞的形态学变化,HE染色分析应用阻断剂后小鼠肝、肺、脾、肾脏器的病理损伤情况。结果阻断剂处理H37Rv感染组小鼠巨噬细胞凋亡率与空白对照组均有不同程度的增高,其中PD98059处理组显著高于其他处理组(P0.05);阻断剂PD98059处理组小鼠巨噬细胞感染H37Rv数量明显减少,且出现核固缩和凋亡。H37Rv感染小鼠肝、肺、脾、肾脏器出现严重病理损伤,而阻断剂应用后的病理损害程度明显减轻(P0.05)。结论应用阻断剂下调Mcl-1的表达可促进结核杆菌感染小鼠腹腔巨噬细胞的凋亡,减少巨噬细胞内潜伏H37Rv数量,减轻结核感染对小鼠脏器的病理损伤。作用效果以MAPK信号通路阻断剂PD98059强于JAK/STAT和PI3K信号通路阻断剂AG490和PD98059。     

医科院校推行双语教学改革的实践与思考

本文就医科院校施行双语教学改革的目的、意义，改革的必要性、必要条件，以及双语教学内涵界定、实践模式等方面进行探讨，着重讨论在医科院校对医学专业基础课和专业课施行双语教学改革所面临的困难和解决方案。     

基因敲除技术在结核病研究中的应用

1989年,美国科学家Capecchi[1]通过研究胚胎干细胞同源重组原理获得的基因敲除小鼠取得成功,因此,Capec-chi与美国科学家Smithies、英国科学家Evans共同分享了2007年诺贝尔生理学或医学奖,成为基因敲除研究史上的又一里程碑。经过20多年的不断发展,     

HLA-DRB1基因多态性与新疆维吾尔族人群结核病易感性的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-DRB1基因多态性与新疆维吾尔族人群结核病易感性的关联。方法采用病例-对照方法 ,应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对226例新疆维吾尔族肺结核病患者(肺结核病例组)和当地同族231人健康者进行HLA-DRB1基因分型,比较其等位基因频率(GF),并计算其比值比(OR)。结果肺结核病例组中HLA-DRB1*11基因频率显著高于健康对照组,两组的GF分别为4.53%和1.09%,差异有统计学意义(OR=4.388,χ2=9.872,Pc=0.026<0.05);肺结核病例组中HLA-DRB1*04基因频率亦显著高于健康对照组,两组的GF分别为12.77%和8.36%,但P值经过校正后差异无统计学意义(Pc>0.05)。结论 HLA-DRB1*11等位基因与新疆维吾尔族人群结核病呈相关性。     

结核病疫苗研究进展

本文从亚单位疫苗、DNA疫苗、重组卡介苗和转基因植物疫苗等方面概括介绍了目前新型结核病疫苗研制的现状.