基质金属蛋白酶组织抑制剂1 基因转染对肾小管上皮细胞PTEN表达的影响

目的观察正反义人TIMP-1转染和酶抑制剂干预HKC细胞对PTEN、VEGF/Flk-1的表达的影响,为研究TIMP-1对肾脏
器官衰老的影响机制提供参考。方法将正义和反义人TIMP-1基因转染至人近端肾小管上皮细胞（HKC）,同时用与正义转染
组细胞酶抑制活性相当的MMP-2/MMP-9 抑制剂（MMP-2/MMP-9 Inhibitor Ⅲ, 100 μmol/L）干预24 h,RT-PCR;间接免疫荧
光法检测各组细胞PTEN、VEGF和Flk-1的表达。结果研究显示,与未转染和空载体转染组相比,正义TIMP-1转染组中PTEN
表达上调（P<0.05）,明胶酶活性降低（P<0.05）,VEGF和Flk-1 表达下调（P<0.05）,而反义TIMP-1 转染组则相反（P<0.05）;
MMP-2/MMP-9 inhibitor Ⅲ 100 μmol/L（酶抑制剂组）组PTEN、VEGF和Flk-1 表达与未转染和空载体转染组相比无显著差
异。结论肾脏器官衰老过程中高表达的TIMP-1,通过上调PTEN（非MMP依赖途径）,进而下调VEGF、Flk-1表达,提示PTEN
在TIMP-1 介导肾脏衰老微血管生成障碍中起重要作用,为揭示TIMP-1 参与肾脏器官衰老分子机制提供了新的理论依据。
     

血清乙型肝炎病毒DNA载量对乙型肝炎相关性肾炎临床及病理表现的影响

目的 研究血清乙型肝炎病毒(HBV DNA)载量对乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)的临床表现及肾脏病理的影响.方法 根据HBV DNA复制程度将135例患者分为4组:病毒复制阴性组(n=52)、低度复制组(n=21)、中度复制组(n=20)、高度复制组(n=42).收集患者血常规、血生化指标、免疫球蛋白、血清补体C3、C4;尿常规、24h尿蛋白定量,尿NAG酶等数据.用半定量积分法分析各组间临床指标与病理表现的差异.结果 随着血清HBV DNA载量的增加,患者中肾病综合征比例增高,而慢性肾炎综合征比例下降(P<0.01).随着血清HBVDNA载量的增加,患者尿蛋白定量升高(P<0.01),血浆白蛋白降低(P<0.05),血清C3、C4降低(P<0.05);膜性肾病患者肾小球损伤加重,IgA肾病的患者小管及间质损害加重.病毒复制阴性组乙肝标记物沉积以HbsAg为主,而中、低度复制组以HbcAg和HBsAg共同沉积为主,与阴性组比较差异有统计学意义(P<0.01).随着血清HBVDNA的增加,肾脏C4沉积增加,与血清HBVDNA有一定相关性(r=0.343,P<0.01).结论 随着血清HBVDNA载量的增加,HBV-GN患者的临床及肾脏病理表现加重,相关结果可为HBV-GN患者的抗病毒治疗提供依据.     

凝血酶受体在衰老大鼠肾组织中的表达变化特点

目的检测衰老大鼠肾小球凝血酶受体与纤维蛋白的表达变化,明确凝血酶受体活化的意义。方法选用3月、12月与24月龄Wistar大鼠,采用改良的Lendrum纤维蛋白染色法与免疫荧光法检测纤维蛋白的沉积,免疫组化方法检测肾小球凝血酶受体PAR-1与转化生长因子13（TGF-β）在肾组织中的表达。半定量PCR法检测PAR-1 mRNA的表达。结果3月、12月与24月龄大鼠肾小球内均未检测到纤维蛋白的表达。PAR1在3月龄鼠肾小球内皮、系膜与上皮细胞中广泛表达;24月龄鼠肾小球内PAR-1的表达明显减少。PAR-1 mRNA和肾小球TGF13的表达随增龄明显增加。结论衰老大鼠肾小球凝血酶的活化不伴有纤维蛋白的形成,活化的凝血酶受体可能在衰老相关肾脏结构变化中发挥重要作用。     

复方肾华片对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用研究

目的观察复方肾华片对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用。方法采用在大鼠单侧左肾切除基础上给予腹腔注射链脲佐菌素(65mg/kg)造模,造模后正常饮食9个月糖尿病肾病大鼠模型制备成功。分为正常对照组、模型对照组、复方肾华片组和厄贝沙坦组,给予6周灌胃干预治疗。观察干预前后大鼠一般状态及24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、总蛋白(TB)、白蛋白(ALB)水平;进行肾组织PAS染色及透射电镜观察。结果药物干预6周后,与模型对照组比较,厄贝沙坦组及复方肾华片组大鼠一般情况均改善;两治疗组大鼠24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白、SCr、BUN、GLU、TG和TC均较模型组及本组治疗前明显降低(P<0.05,P<0.01),两治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05);两治疗组肾脏病理及肾脏超微结构均较模型对照组有不同程度改善。结论复方肾华片具有减轻糖尿病肾损害,延缓肾脏功能损害进展的作用,疗效与厄贝沙坦相当。     

低分子肝素和尿激酶对老年大鼠肾小球内皮细胞损伤保护作用的比较

目的探讨炎症状态下增龄对肾小球内皮损伤的影响，比较低分子肝素和尿激酶对损伤的保护作用。方法3月龄及27月龄雌性Wistar大鼠各40只，随机分为正常对照组（NC组）、脂多糖（LPS）组（L组）、LPS＋氨甲环酸组（LT组）、LPS＋氨甲环酸＋低分子量肝素组（LTH组）及LPS＋氨甲环酸＋尿激酶组（LTUU组）。采用直接免疫荧光检测肾小球纤维蛋白沉积，Western印迹法检测血管内皮血栓调节蛋白（TM），纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）蛋白质表达。结果（1）LPS刺激后纤维蛋白沉积增多（P〈0．05），TM几乎无表达（P〈0．01），PAI-1表达明显上调（P〈0．05）；（2）加用氨甲环酸后，PAI-1表达进一步上调（P〈0．05）；（3）应用低分子肝素和尿激酶后纤维蛋白沉积明显减轻（P〈0．05），PAI-1表达与LT组比较明显下调（P〈0．05），TM表达增多（P〈0．05），两组之间无统计学差异。（4）老年大鼠各组肾小球纤维蛋白沉积均比相同干预组的青年大鼠明显，PAI-1的表达均较青年大鼠相同干预组显著增多，TM表达则显著减少，差别均有统计学意义（P〈0．05）。结论增龄可加重LPS诱导的肾小球内皮损伤；低分子肝素与尿激酶均能有效保护老年大鼠肾小球血管内皮损伤，两者无明显差别，但增龄可减弱低分子肝素和尿激酶对血管内皮的保护作用。     

人基质金属蛋白酶1组织抑制剂转基因小鼠肾小管间质炎症的改变

目的观察基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)过表达对肾小管间质炎症反应的影响。方法采用人TIMP-1转基因小鼠和野生型小鼠(n=8)构建单侧输尿管梗阻(UUO)模型。以3 d和14 d为时间点,Masson染色观察肾组织形态学变化,间接免疫荧光法观察肾组织内F4／80阳性细胞的表达;Western印迹检测TIMP-1、TIMP-2、MMP-2、MMP-9和ICAM-1的蛋白表达,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性,反向酶谱法检测TIMP-1的活性。结果UUO术后肾小管间质病理损伤加重[肾间质纤维化面积(46．24±6．58)％比野生型(36．33±5．12)％．P< 0．05],F4／80阳性细胞数目增加[(68．9±15．6)个／视野比野生型(52．4±13．3)个／视野,P< 0．05],ICAM-1蛋白表达显著上调,术后14 d上述改变在转基因组中更为显著(P<0．05)。UUO术后TIMP-1蛋白表达及活性上调,在术后14 d达高峰,在转基因组中增加更为显著(P< 0．05)。MMP-2和MMP-9的蛋白表达及活性在术后逐渐下降,UUO术后14 d转基因组降低更为显著(P<0．05)。结论TIMP-1过表达可通过增强炎症加重肾小管间质损伤。     

慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠模型的诱导

目的　诱导慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠模型。方法　选用 (DBA 2×C57BL 6J)F1小鼠 ,通过尾静脉注射其母鼠DBA 2淋巴细胞诱导模型 ,观察 12周。结果　F1小鼠注射母鼠淋巴细胞后 2周产生自身抗体 ,出现蛋白尿 ,4周血脂、血肌酐、尿素氮轻度升高 ,肾脏病理仅有系膜细胞轻度增生 ,未见间质损害。 8周血生化指标明显改变 ,肾脏病理示肾小球系膜细胞中度增生 ,间质炎细胞浸润和肾小管大量蛋白管型 ,10～ 12周各项观察指标改变明显 ,病理出现局灶或弥漫肾小球硬化 ,免疫荧光示IgG、IgM、C3沿毛细血管壁及系膜区沉积。结论　慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠模型类似人类狼疮性肾炎 ,是良好的狼疮肾炎模型     

小剂量环孢霉素A抑制大鼠缺血性急性肾衰竭中肾小管上皮细胞线粒体通透性转运

目的研究小剂最环孢霉素A(CsA)对大鼠缺血性急性肾衰竭诱导的肾小管上皮细胞线粒体通透性转运的影响,探讨其抑制肾小管上皮细胞凋亡的作用机制。方法Wistar大鼠双侧肾动脉夹闭30min诱导缺血性急性肾衰竭。再灌注18h后留取肾组织及血液标本。比色法测定血清肌酐(SCr)浓度,原位末端标记(TUNEL)法检测肾小管上皮细胞凋亡情况,Westernblot测定肾组织中胞浆细胞色素C、caspase-3、9蛋白质表达。结果肾脏缺血30min／再灌注18h后大鼠SCr明显升高[(106．9±19．4)μmol／Lvs(56．5±7．1)μmol／L,P<0．05],肾小管上皮细胞凋亡数目显著增加[(20．14±3．70)％vs(0．99±0．17)％,P<0．05],肾组织胞浆细胞色素c、caspase-3、9表达增加(P<0．05);CsA能显著降低SCr[(87．5±18．5)μmol／L],减轻肾小管上皮细胞凋亡[(14．61±3．39)％],下调胞浆细胞色素C、caspase-3、9表达(P<0．05)。结论小剂量CsA能抑制大鼠缺血性急性肾衰竭引起的线粒体通透性转运,从而减轻肾小管上皮细胞凋亡,保护肾功能。     

血管病变在IgA肾病、系膜增殖性肾小球肾炎及膜性肾病中的比较

目的:了解血管病变在IgA肾病(IgAN)与系膜增殖性肾小球肾炎(MsPGN)及膜性肾病(MN)中的不同特点。方法:回顾性分析1005例IgAN患者、627例MsPGN患者和221例MN患者血管病变的发生率、病变程度及病变类型。结果:1005例IgAN患者、627例MsPGN患者和221例MN患者肾活检组织中血管病变的发生率分别为54.6%,26.6%和47.1%,血管病变发生的平均年龄分别为34.6,40.4和47.7岁,中/重度血管病变的比例分别为37.0%,21.6%和23.1%,合并血管玻璃样变的比例分别为43.7%,16.8%和21.2%,上述4项指标三者之间均存在明显差异(P<0.05)。在IgAN患者中,有高血压者出现血管壁增厚合并玻璃样变的比例明显高于无高血压者(P<0.001)。结论:IgAN患者较MsPGN及MN患者血管病变的发生比例高,出现的年龄轻、程度重,合并玻璃样变的比例高。在IgAN患者中高血压的发生可能与血管的玻璃样变关系密切。     

肾结石大鼠钠/二羧基转运蛋白1的表达及枸橼酸钾防治机制的研究

目的 研究肾组织钠／二羧基转运蛋白1（SDCT1）与低枸橼酸尿的关系以及枸橼酸钾的干预作用，探讨肾结石发病的分子机制和防治措施。方法 雄性Wistar大鼠分为对照组、肾结石组及枸橼酸钾干预组。血、尿枸橼酸和草酸采用酶法测定，Northern blot检测大鼠肾组织SDCT1mRNA水平的改变，免疫组织化学观察SDCT1在肾组织的分布及表达变化。结果 与对照组比较，肾结石组第3天尿草酸水平显著升高，枸橼酸水平显著降低，同时肾组织SDCT1mRNA及其蛋白水平上调。第7天SDCT1mRNA及其表达产物增加更为显著，同时尿枸橼酸水平进一步降低，尿钙排泄显著增加，87.5%大鼠有中－大量的草酸钙结石形成。第14天上述改变更为明显，结石形成率达100％。枸橼酸钾干预组各时间点尿草酸水平与肾结石组差异无显著性意义，但尿枸橼酸水平显著高于肾结石组及对照组，肾组织SDCT1mRNA及蛋白表达显著低于肾结石组，与对照组差异无显著性意义；结石形成率显著低于肾结石组；肾小管扩张、炎细胞浸润等病变也明显减轻。结论 肾组织SDCT1表达上调可能是低枸橼酸尿的重要原因，与肾结石的形成有密切关系。枸橼酸钾可下调肾结石大鼠肾组织SDCT1的表达，对肾结石的形成具有明显的干预作用。