p21~(WAF1/CIP1/SDI1)在大鼠肾脏组织的增龄性变化及意义

目的 研究p21野生型p53活化片段1/细胞周期蛋白依赖性激酶影响蛋白1/衰老细胞衍生抑制剂1(p21WAF1/CIP1/SDI1)在大鼠肾脏中随年龄增长的表达变化规律. 方法 取3月龄、12月龄及24月龄健康雄性Wistar大鼠肾组织进行衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性染色,TUNEL法检测细胞凋亡,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法(Western blot assay)分别在基因及蛋白质表达水平上检测肾脏组织中p21WAF1/CIP1/SDI1的表达变化,并用免疫组化法检测p21WAF1/CIP1/SDI1在肾脏组织中的表达与定位. 结果 大鼠肾脏组织SA-β-gal活性随年龄增长逐渐增强,凋亡细胞也随年龄增长逐渐增加(P＜0.05);p21WAF1/CIP1/SDI1 mRNA表达随年龄增长逐渐增强,不同月龄比较差异有统计学意义(P＜0.05).Western印迹亦显示p21WAF1/CIP1/SDI1蛋白表达随鼠龄增加逐渐增强(P＜0.05).免疫组化结果显示,p21WAF1/CIP1/SDI1蛋白表达于大鼠肾小球足细胞,其在肾小管与间质细胞中也有表达,且随年龄增长表达增加(P＜0.05). 结论 p21WAF1/CIP1/SDI1在大鼠肾脏组织中的表达随年龄增加而增强,可作为肾脏组织中重要的衰老指标.     

抑癌基因 PTEN随增龄在大鼠肾脏组织的表达

目的:研究与张力蛋白同源、第10号染色体缺失的磷酸酶基因(Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)随增龄在大鼠肾组织内表达的变化,并探讨其在肾脏衰老中的作用.方法:分别留取3、12、24月龄Wistar大鼠肾组织(n=6),石蜡切片CD34免疫组化染色观察肾组织微血管生成;western blot和免疫组化染色检测大鼠肾组织PTEN表达.结果:western blot显示,随增龄大鼠肾组织蛋白表达水平逐渐升高,24月龄大鼠表达水平显著高于3,12月龄大鼠(P＜0.05);免疫组化显示PTEN在大鼠肾小球和肾小管均有表达,24月龄大鼠肾小球和肾小管阳性面积百分比均显著高于3、12月龄大鼠(P＜0.05).随增龄大鼠肾组织内出现微血管生成障碍,24月龄大鼠肾小球毛细血管和管周毛细血管密度均显著低于3、12月龄大鼠(P＜0.05);相关分析显示,二者与大鼠肾组织PTEN蛋白表达水平均呈负相关(r=-0.761和-0.613,P＜0.05).结论:随增龄大鼠肾组织PTEN蛋白表达呈现上升趋势,可能通过影响血管生成参与肾脏衰老过程.     

中药海乐得对部分肾切除大鼠残余肾脏表达PAI-1、TGFβ mRNA的影响

目的：观察中药制剂海乐得对５／６肾切除（５／６ＮＸ）大鼠残余肾组织表达纤溶酶原激活物抑制物－１（Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－ｌ,ＰＡＩ－ｌ）、转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β,ＴＧＦβ）的影响。方法：海乐得治疗５／６肾切除大鼠６周后处死,检测尿蛋白排泄和血生化变化,制作残肾组织病理和冰冻切片,提取残余肾脏组织ＲＮＡ,分别采用组织原位杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印记杂交方法观察ＰＡＩ－ｌ、ＴＧＦβ的基因表达。结果：中药治疗组残肾组织中ＰＡＩ－ｌ和ＴＧＦβｍＲＮＡ表达、尿蛋白排泄、血清尿素氮和肌酐均明显低于未治疗组,肾脏病理损害以及脂代谢紊乱亦有明显改善。结论：海乐得通过ＰＡＩ－ｌ和ＴＧＦβ途径,能明显改善慢性肾功能衰竭大鼠的肾功能和病理损伤。     

低分子量肝素降低肾衰模型大鼠IV型胶原蛋白的表达

探讨在肾小球硬化过程中 ,低分子量肝素治疗对细胞外基质和凝血酶受体表达的影响 ,用 5 6肾切除的方法诱导大鼠局灶节段性肾小球硬化模型并给予低分子量肝素治疗 2 0周 ,通过RT PCR和免疫组化法观察低分子量肝素对 5 6肾切除大鼠残肾组织中IV型胶原、凝血酶受体基因表达的影响。低分子量肝素治疗能显著降低 5 6肾切除大鼠蛋白尿、血肌酐、血脂和减轻肾组织的病理改变程度 ,并且显著下调IV型胶原、凝血酶受体mRNA表达。结果提示低分子量肝素可能通过影响凝血酶受体mRNA表达 ,减轻肾小球重塑过程中细胞外基质的异常代谢、沉积。     

IgA肾病患者血管内皮细胞生长因子及其受体的表达

肾小球内皮细胞是肾小球血管壁的重要组成部分 ,对于维护肾小球血管壁的完整性具有重要的意义。血管内皮细胞生长因子 (VEGF)能促进内皮细胞的增生、迁移 ,增强内皮细胞通透性。本研究通过观察IgA肾病患者肾组织内VEGF及其受体 (flk 1 )和Ⅳ型胶原的表达 ,分析VEGF、flk 1表达与IgA肾病患者尿蛋白、血压、血肌酐、肾小球Ⅳ型胶原表达的关系。一、对象与方法1 .对象 :IgA肾病患者 2 4例 ,男 1 4例 ,女 1 0例 ,年龄1 6～ 49岁 ,平均 (2 8 6± 1 1 7)岁。所有患者均行肾活检术 ,肾组织病理检查符合IgA肾病诊断。根据病理改变的程度分…     

衰老大鼠肾小管间质细胞表型转化及意义

目的通过检测肾小管间质细胞表型转化的标志物,明确其在肾脏衰老过程中的意义.方法选用3月、12月与24月Wistar大鼠,采用免疫组化方法检测肾小管间质中细胞表型标志α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),细胞增殖标志.增殖性细胞核抗原(PCNA)与细胞外基质[Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤连蛋白(FN)]在不同月龄大鼠肾小管间质中的表达.采用真彩医学图像分析系统进行定量分析.结果肾小管间质随增龄出现明显的病理变化.24月龄大鼠肾间质中α-SMA表达明显增多,而在3月龄除血管平滑肌外未见间质中阳性表达.PCNA在12月龄表达最为明显,与3月龄与24月龄存在显著性差异(P＜0.05).肾小管间质中细胞外基质Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及FN随着增龄表达明显增加,24月龄与3月龄及12月龄相比存在显著性差异(均P＜0.05).Ⅰ型胶原、FN与间质纤维化程度呈正相关(r=0.63与r=0.78,均P＜0.01).结论衰老大鼠肾小管间质细胞表型发生明显变化,这种细胞表型的转化可能参与了肾脏的衰老结构的改变与功能的减退.     

慢性移植物抗宿主病狼疮小鼠模型肾组织细胞凋亡及Th1/Th2细胞因子的研究

目的研究慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠模型。肾组织细胞凋亡及Th1／Th2细胞因子的改变方法20只B6D2F1代杂交鼠，随机分为模型组(10只)及对照组(10只)，12周后处死采用原位末端标记法(TUNEL)染包观察肾组织细胞凋亡；免疫组织化学、Western blot和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Fas、FasL基因转录及蛋白表达情况。结果TUNEL法结果显示模型组肾组织细胞凋亡较对照组增多。免疫组织化学提示：各组均有Fas、FasL表达，正常对照组有极少量Fas表达．表达部位在肾小球系膜细胞；FasL表达部位在近端肾小管上皮细胞。聚合酶链反应(PCR)结果：模型组较正常对照组Fas mRNA表达增高。模型组较正常对照组FasL mRNA表达差异无显著性。正常对照组干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4阳性细胞极少；模型组肾组织血管周围浸润的炎性细胞中可见IFN-γ和IL-4阳性细胞，且IL-4阳性细胞明显高于IFN-γ，提示Th2细胞表达占优势。模型组比正常对照绀INFγ／和IL-4阳性细胞明显升高，RT-PCR结果显示：模型组IFN-γ与正常对照组比较差异无显著性：模型组IL-γ较正常对照组显著升高。结论cGVHD狼疮样小鼠模样小鼠模织细胞凋亡异常及Th1/Th2细胞因子失衡，在狼疮肾炎(LN)的发病中起重要作用。     

增龄对纤维蛋白急性肺损伤大鼠肺组织单核巨噬细胞趋化因子-1表达的影响

目的研究增龄对纤维蛋白诱导急性肺损伤大鼠肺组织单核巨噬细胞趋化因子-1 (MCP-1)表达的影响,探讨老年大鼠对炎性刺激易感的可能机制。方法青年及老年大鼠均根据腹腔注射不同的药物随机分为4组:对照组、脂多糖组、氨甲环酸组、肝素组。应用免疫组化分析纤维蛋白沉积;应用Western blot和Northern blot方法分别检测肺组织MCP-1蛋白质和基因表达。结果(1)青年和老年对照组大鼠肺组织内均无纤维蛋白沉积,老年大鼠脂多糖组、氨甲环酸组和肝素组均比青年大鼠相同干预组纤维蛋白沉积明显,差别均有统计学意义(18．5％±3．1％对12．3％±2．1％,32．5％±5．4％对24．1％±4．5％和20．8％±3．6％对12．6％±1．8％,均为P<0．05);(2)青年和老年对照组大鼠肺组织内几乎无MCP-1表达,老年大鼠脂多糖组、氨甲环酸组和肝素组的MCP-1表达均较青年大鼠相同干预组上调,差异有统计学意义(0．40±0．02对0．20±0．03,0．60±0．05对0．25±0．04和0．30±0．01对0．20±0．04,均为P<0．05);(3)经纤维蛋白沉积增加量校正后,老年氨甲环酸组大鼠肺组织MCP-1的表达量仍显著高于青年大鼠氨甲环酸组(P<0．05)。结论纤维蛋白可上调急性肺损伤肺组织MCP-1基因及蛋白质表达,促进肺组织炎症反应;增龄能够促进肺组织纤维蛋白沉积,增强其上调肺组织MCP-1表达的作用。     

细胞间粘附分子－1在非IgA系膜增殖性肾小球肾炎病变中表达的定量分析

应用免疫组化方法及计算机图象分析系统，检测了非ＩｇＡ系膜增殖性肾小球肾炎患者肾组织病变过程中细胞间粘附分子－１的变化。结果显示：在系膜细胞增殖的肾小球内细胞间粘附分子－１含量增加，并随病变进展明显增加，且与系膜细胞增殖程度显著正相关。