CDC25双特异磷酸酯酶及Smad3在食管鳞状细胞癌的表达及其意义

目的:探讨CDC25双特异磷酸酯酶(CDC25A,CDC25B)及Smad3在食管鳞状细胞癌的表达及其与食管癌临床病理特征之间的关系.方法:采用免疫组织化学方法(SP法)检测52例食管鳞状细胞癌手术切除的癌组织及癌旁组织(24例正常食管黏膜上皮,25例非典型增生组织)中CDC25A和CDC25B蛋白表达;采用流式细胞术(FCM)对上述标本中CDC25A、CDC25B和Smad3蛋白进行定量检测.采用SPSS 11.5软件进行统计分析.结果:CDC25A和CDC25B在癌组织中的阳性表达率均高于不典型增生组织和正常黏膜(P<0.01),非典型增生组织与手术切缘正常组织之间差异无显著性(P均>0.05).在癌组织中.中、低分化、侵袭至纤维膜组CDC25A、CDC25B蛋白的表达明显高于高分化、未侵袭至纤维膜组(P<0.01),淋巴结转移组CDC25A蛋白的表达显著高于无淋巴结转移组(P<0.01),CDC25B蛋白表达与淋巴结转移无关(P>0.05).癌组织中Smad3蛋白阳性表达率明显低于非典型增生组织和正常组织(P均<0.01),非典型增生组织与正常组织之间差异无显著性(P均>0.05).Smad3蛋白与CDC25A蛋白的表达呈负相关(r=-0.482,P=-0.007).结论:CDC25A的异常表达可能参与了食管鳞状细胞癌的发生、发展及转移,其有望成为评价食管癌恶性程度和预后的指标,Smad3蛋白的下调可能与食管癌中CDC25A蛋白含量升高有关.而CDC25B可能只是在癌变早期发挥作用.     

伊立替康对胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2MD3体外抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨伊立替康(CPT-11)对人胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2M D 3的体外增殖作用的影响及其作用机制。方法人胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2M D 3于DM EM培养液中(含10%热灭活胎牛血清),在37℃、5%的CO2、饱和湿度下培养传代。M TT法检测0.97、1.94、3.88、7.75、15.5、31、62、124μg/m l 8个不同浓度伊立替康分别作用24、48、72小时后对细胞增殖的抑制效应并计算抑制率。利用中效原理方程计算各时段药物作用的中效浓度(IC 50)。检测CPT-11对OCUM-2M D 3细胞作用的时间效应和剂量效应。利用流式细胞仪分析伊立替康作用24小时前后细胞周期的分布及凋亡情况。结果CPT-11对胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2M D 3的体外增殖有明显的抑制作用。在相同时间段不同药物浓度CPT-11对OCUM-2M D 3细胞的抑制率差异有显著性(P<0.01)。而在相同药物浓度时,作用不同时间,其抑制率差异也有显著性(P<0.01)。且药物浓度与药物作用时间之间有交互作用(P<0.01)。124μg/m l CPT-11作用72小时后,OCUM-2M D 3细胞生长抑制率可达80.6%。CPT-11作用24、48、72小时的IC 50分别为49.889μg/m l、9.775μg/m l、6.481μg/m l。流式细胞仪分析显示以1/2 IC 5024.945μg/m l CPT-11处理24小时后,对照组细胞周期分布为G0/G1期(39.30±4.81)%,S期(37.40±3.91)%,G2/M期(23.33±8.05)%;用药组为G0/G1期(56.50±7.69)%,S期(43.90±7.69)%,G2/M期消失,细胞周期被阻滞于G0/G1及S期。流式细胞仪检测凋亡率分别为(1.00±0.11)%、(34.29±0.79)%,用药组凋亡率明显升高,差异有显著性(P<0.01),出现明显的凋亡峰。结论伊立替康能够明显抑制人胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2M D 3的体外增殖活性。     

青蒿琥酯逆转Eca109/ABCG2细胞对阿霉素耐药的作用及机制

目的研究青蒿琥酯(Art)逆转食管癌耐药细胞Eca109/ABCG2对阿霉素(ADM)耐药的作用及其机制。方法采用不同浓度的青蒿琥酯(Art,0、0.01、0.1、1μmol/L),阿霉素(ADM,0、0.02、0.2、2、20mg/L),Art(0.01、0.1、1μmol/L)+ADM(0.02、0.2、2、20mg/L)处理Eca109/ABCG2细胞48h,然后以MTT法检测细胞生长抑制率。采用ADM(0、0.02、0.2、2mg/L),Art(0、0.01、0.1、1μmol/L)和ADM(0.2mg/L)+Art(0.01、0.1、1μmol/L)处理细胞,48h后以流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率及细胞内ADM含量,72h后检测细胞内ABCG2蛋白的表达。结果与单独应用Art或ADM相比,Art+ADM处理后,Eca109/ABCG2细胞的生长抑制率、凋亡率和细胞内ADM含量均显著增加(P<0.05),而细胞内ABCG2蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 Art可通过下调Eca109/ABCG2细胞ABCG2蛋白表达,增加细胞内ADM的药物浓度,从而增强疗效、逆转耐药。     

阿霉素诱导食管癌耐药细胞中ABCG2的表达及其意义

 目的研究阿霉素(ADM)药物诱导食管癌细胞(Eca109)产生耐药细胞株(Eca109/ADM)中ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的表达及其意义。方法通过逐步增加培养液中阿霉素的浓度,长期筛选培养,建立食管癌耐药细胞株Eca109/ADM。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测耐药细胞中ABCG2mRNA的表达量,流式细胞术(FCM)和蛋白印迹(Westernblot)方法检测耐药细胞中ABCG2蛋白的表达量及细胞定位。FCM方法检测Eca109/ADM细胞药物外排作用,MTT方法检测Eca109/ADM细胞对阿霉素的耐药系数。结果Eca109/ADM细胞与Eca109细胞相比,ABCG2表达显著性增高(P<0.05)。Eca109/ADM细胞药物外排作用较Eca109细胞增加,Eca109/ADM细胞对阿霉素的耐药系数为3.29。结论成功建立耐药细胞株Eca109/ADM。Eca109/ADM细胞是一个理想的耐药细胞模型。Eca109/ADM细胞中ABCG2的表达量增高,提示ABCG2参与食管癌细胞耐药的形成。     

NS-398对肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤凋亡和血管生成的影响

为观察COX-2对肝细胞癌生长和血管生成的影响，我们通过构建肝癌SMMC-7721细胞株荷瘤裸鼠，检测NS-398对血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、肿瘤微血管密度（MVD）和凋亡的影响，探讨环氧合酶2（COX-2）在肝细胞癌生长和血管生成过程中的作用及其机制。     

COX-2、CX43在复发性原发上皮性卵巢癌中的表达

目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和细胞间隙连接蛋白43(connexin 43,CX43)与上皮性卵巢癌化疗疗效(耐药或敏感)及临床病理的关系。方法:在1999年1月至2003年6月间,从临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中,筛选出60例原发上皮性卵巢癌(primary epithelia ovarian carcinoma,PEOC)和6例正常卵巢(均为宫颈癌切除标本,且术后病理证实双卵巢为正常组织)的存档蜡块,作为研究对象。根据临床诊断分为3组:化疗耐药组30例,化疗敏感组30例,正常卵巢组6例。术前均未接受过放疗,入院后均行广泛性全子宫切除 盆腔淋巴结清扫 阑尾切除 大网膜切除术,全部66例病人均有随访结果。用流式细胞术定量分析66例标本组织中COX-2和CX43蛋白的表达量。结果:CX43蛋白的表达:化疗耐药组<化疗敏感组<正常卵巢组织,单向方差分析两两比较结果均为P=0.000,差异有极显著意义。COX-2蛋白的表达:化疗耐药组>化疗敏感组>正常卵巢组织,单向方差分析两两比较差异均有极显著意义,P<0.005。随临床分期、病理分级、化疗疗程数的增加及有淋巴结转移,CX43蛋白的表达量随之降低,但是差异无显著意义,P>0.05。结论:COX-2蛋白的表达上升和CX43蛋白的表达下降与上皮性卵巢癌的复发、发展及疗程有关,与化疗耐药呈正相关。     

细胞凋亡和相关基因Fas在睾丸肿瘤中表达的研究

目的　探讨细胞凋亡和相关基因Fas蛋白在睾丸肿瘤发生发展中的作用。方法　应用DNA末端标记、流式细胞术和细胞免疫荧光技术检测 5 6例睾丸肿瘤细胞凋亡状态及凋亡相关基因Fas蛋白的表达。结果　凋亡指数与肿瘤病理类型和淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 5 )。Fas蛋白的表达与肿瘤病理类型有关 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 )。凋亡指数与Fas蛋白表达呈正相关 (P <0 .0 5 )。结论　细胞凋亡及相关基因Fas蛋白异常表达在睾丸肿瘤发生中有重要作用     

食管癌bax和bcl-2蛋白的定性和定量研究

目的：探讨bax和bcl-2蛋白表达在食管癌发生和发展中的作用。方法：应用免疫组化，流式细胞术和细胞免疫荧光技术对70例食管鳞癌组织bax和bcl-2蛋白进行定性和定量检测。结果：免疫组化研究示bax 蛋白阳性表达32例，bcl-2蛋白阳性表达43例，bax和bcl-2蛋白表达与肿瘤病理分级和淋巴结转移密切相关（P＜0．05），但与临床分期之间差异无显著意义（P＞0．05），流式细胞定量研究示bax蛋白阳性表达39例,bcl-2蛋白阳性表达65例，bax和bcl-2蛋白表达率和表达量与肿瘤病理分级，分期和淋巴结转移无明显相关（P＞0．05），结论：bax和bcl-2蛋白的异常表达在食管癌发生和发展中起重要作用。     

流式细胞术在肿瘤病理学的应用

流式细胞术(Flow Cytometry.FCM)是近年发展起来的一种快速自动化定量分析细胞的新技术。它集电子物理、激光、计算机等现代技术,成为目前先进的分析细胞的方法。可同时对单细胞进行多参数(DNA、RNA、蛋白质,细胞体积等)检测,且根据细胞DNA含量的分布,动态地了解细胞群体动力学的     

去甲斑蝥素诱导人食管癌Ec9706细胞凋亡作用及机制研究

目的 研究去甲斑蝥素作用人食管鳞癌细胞Ec9706后细胞凋亡率,并进一步探讨去甲斑蝥素诱导Ec9706细胞凋亡的作用机制,为去甲斑蝥素应用于临床抗癌药物提供基础实验。 方法 不同浓度去甲斑蝥素 (0、5、10、20、40 μg/ml)分别作用Ec9706细胞不同时间(12、24和48h)后MTT方法检测细胞生长抑制率。不同浓度去甲斑蝥素(0、5、10、20 μg/ml) 分别作用Ec9706细胞不同时间(24和48h)后流式细胞术检测细胞凋亡及Caspase-3和Survivin蛋白的表达。结果 MTT结果显示,去甲斑蝥素作用Ec9706细胞后呈现不同程度的细胞生长抑制作用,而且随作用浓度及时间增加细胞生长抑制率呈现显著增高趋势。去甲斑蝥素作用Ec9706细胞后,流式细胞术检测结果显示,Ec9706细胞凋亡率与对照组相比显著增高(P<0.05),Caspase-3蛋白表达量显著增高而Survivin蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 去甲斑蝥素具有抑制食管癌Ec9706细胞生长的作用,其作用机制可能与下调细胞Survivin蛋白及上调Caspase-3蛋白表达水平,从而诱导食管癌细胞凋亡有关。