RNAi技术沉默K562细胞中c-myc基因的初步研究

目的 运用RNAi技术,设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA),研究其干扰效果。方法 针对c-mycmRNA的第1357靶位点设计siRNAs,经Lipofectamine^TM2000脂质体法转染K562细胞,进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测,观察其干扰效果。结果 转染组与阴性对照组和空白对照组相比,c-mycmRNA表达明显减弱,细胞计数和MTTD(λ)值均有显著降低,并有明显的凋亡率。结论 运用RNAi技术,可以有效地干扰c-myc的表达,并进一步诱导细胞凋亡。     

细胞周期蛋白依赖性激酶-2两种剪接体在SH-SY5Y细胞中共表达

目的观察细胞周期蛋白依赖性激酶-2(CDK-2)在SH-SY5Y细胞中的表达情况。方法采用RT-PCR方法研究CDK-2的表达,用DNA银染技术观察PCR产物,割胶回收后,克隆到载体上、测序。结果在聚丙烯酰胺胶上可以观察到两条DNA带,相对分子质量小的DNA带染色较弱;将两条DNA带切下,回收后与载体连接,测序证实两条DNA带均为CDK-2基因的产物。结论CDK-2的两种剪接形式在SH-SY5Y细胞中共表达,其中一种剪接形式是第五外显子缺如,但其表达量比较弱,其作用机制仍有待于进一步研究。     

散结灵胶囊治疗乳腺增生的效应机制研究

目的研究散结灵胶囊治疗乳腺增生的效应机制。方法通过3种实验进行综合评价。①将105只雌性SD大鼠分为随机分为空白组、模型组、三苯氧胺组(0.004 g/kg)、桂枝茯苓组(0.279 g/kg)、散结灵高剂量组(0.72 g/kg)、散结灵中剂量组(0.36 g/kg)、散结灵低剂量组(0.18 g/kg),每组15只。除空白组外,其余各组均制备大鼠乳腺增生模型。于造模成功后,各给药组分别经口灌胃给予相应剂量的药物,均1次/d,连续30 d。末次灌胃结束后,测量各组大鼠第二对乳头直径和乳头高度;腹主动脉取血,测定血清中雌二醇(E_2)、孕酮(P)、催乳素(PRL)水平;大鼠第二对乳腺组织取材,光镜下观察其组织形态学变化。②将72只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、复方丹参组(0.288 g/kg)、散结灵高剂量组(0.72 g/kg)、散结灵中剂量组(0.36 g/kg)、散结灵低剂量组(0.18 g/kg),每组12只。各给药组分别经口灌胃给予相应剂量的药物,均1次/d,连续7 d。除空白组外,各组在末次灌胃后30 min多点皮下注射肾上腺素制备大鼠急性血瘀模型,处置后禁食。第8天各组大鼠腹主动脉取血,测定全血黏度和血浆凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原(FIB)含量。③将60只ICR小鼠(雌雄各半)随机分为模型组、阿司匹林组(0.3 g/kg)、散结灵高剂量组(1.08 g/kg)、散结灵中剂量组(0.54 g/kg)、散结灵低剂量组(0.27 g/kg),每组12只。各给药组小鼠分别经口灌胃给予相应剂量的药物,均1次/d,连续5 d。末次灌胃后1 h,于小鼠腹腔注射0.7%冰醋酸生理盐水溶液,观察小鼠15 min内出现扭体反应的次数及扭体反应潜伏期。结果散结灵各组大鼠乳头直径、乳头高度及散结灵高、中剂量组大鼠血清E_2和PRL水平均明显低于模型组(P均0.05),乳腺小叶数量增多、腺泡及导管大量增生、腺泡扩张并且分泌旺盛等乳腺增生病理组织学变化明显轻于模型组。散结灵胶囊各组大鼠全血低切黏度明显低于模型组(P均0.05);散结灵高剂量组大鼠血浆PT明显长于模型组(P0.05),血浆FIB含量明显低于模型组(P0.05)。散结灵各组小鼠扭体次数明显少于模型组(P均0.05),散结灵低、中剂量组小鼠扭体反应潜伏期明显长于模型组(P均0.05)。结论散结灵胶囊具有较好的治疗乳腺增生和活血化瘀、镇痛作用,其中下调血清E_2和PRL水平可能是该药效应机制的关键环节。     

活血化瘀中药干预兔动脉粥样硬化形成作用研究

目的观察活血化瘀中药丹参、川芎、姜黄对兔动脉粥样硬化（AS）的影响及其作用机制。方法将家兔按血脂水平随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组、丹参组、川芎组及姜黄组。其中空白组给予普通饲料,其余各组饲喂高脂饲料。高脂饲料喂养期间各组动物分别给予相应剂量的药物。给药第12周后,测定血脂水平、血清抗氧化能力、凝血及血液流变学指标,并观察动脉斑块形成程度。结果川芎与丹参可显著降低AS兔主动脉弓部斑块校正面积与最大斑块厚度。川芎、丹参、姜黄均可降低AS兔血小板最大聚集率,丹参可显著降低AS兔低切全血黏度,川芎可降低AS兔血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及非高密度脂蛋白胆固醇水平。川芎、丹参可降低血清脂质过氧化产物丙二醛水平,丹参还可升高超氧化物歧化酶的活性。结论活血化瘀中药具有较好的抑制AS形成的作用,与其降血脂、提高抗氧化能力等作用有关。     

通宣理肺口服液药效学研究

目的研究通宣理肺口服液的镇咳、祛痰、平喘、抗炎、镇痛、解热及抑菌作用。方法镇咳实验采用氨水致小鼠咳嗽和枸橼酸致豚鼠咳嗽法,平喘实验采用组胺和乙酰胆碱致豚鼠哮喘法,祛痰实验采用小鼠气管酚红分泌法,抗炎实验采用角叉菜胶致大鼠急性胸膜炎和二甲苯致小鼠耳肿胀法,镇痛实验采用小鼠醋酸扭体和小鼠热板法,解热实验采用内毒素致家兔发热法,抑菌实验采用体外呼吸系统致病菌抑菌法。结果通宣理肺口服液能明显抑制小鼠咳嗽、豚鼠咳嗽和哮喘,增加小鼠气管酚红分泌量,降低胸膜炎大鼠的WBC数量,提高小鼠痛阈值,对抗内毒素所致家兔体温升高,抑制呼吸系统相关致病菌。结论通宣理肺口服液具有镇咳、祛痰、平喘、抗炎、镇痛、解热及抑菌作用。     

二至百合浓缩膏对去势雌性大鼠焦虑行为学的影响

目的探讨二至百合浓缩膏对去势雌性大鼠(双侧卵巢切除术)焦虑行为学的影响。方法 3～4月龄Wistar雌性大鼠随机分成5组,假手术对照组,模型组,二至百合高、中、低剂量组。除假手术组,其余用手术摘除双侧卵巢建立去势更年期大鼠模型,给药组分别给予二至百合浓缩膏水溶液(1.92、0.96、0.48g/kg),假手术空白对照组和模型对照组给予相应容量的蒸馏水,连续45d。采用高架十字迷宫和明暗箱实验,观察实验大鼠行为学的变化。结果二至百合高剂量组可显著减低模型大鼠高架十字迷宫实验中OT%,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。二至百合高、中剂量组亦可显著升高大鼠明箱停留时间和穿箱次数,与模型组比较差异有统计学意义(均P0.05)。结论二至百合浓缩膏具有较好的改善去势雌性模型大鼠焦虑症状的作用。     

人体解剖学神经系统教学的体会

我们常说要想学习好医学,有四门最重要的基础课：“三理一剖”,“一剖”即指人体解剖学,它是医学生必修的基础课,其中神经系统章节的内容对大多数学生来说都是难点,同时又是学习的重点。因此能否让学生掌握好神经系统,将直接关系到以后临床课的学习。下面我结合自己多年的教学实践经验,谈谈自己的心得。     

300例表面抗原阴性的乙肝患者HBV核酸检测分析

血清乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg）阳性是HBV感染的标志,同时也是乙肝患者治疗效果的监测指标之一。但由于HBV的高变异性,HBs舷阴性的乙肝病毒感染者时有出现,这无疑给健康体检以及乙肝患者的治疗监测带来了困扰。本文主要结合HBV的核酸定量分析就因HBV基因突变而导致的HBsAg漏检问题做一讨论。     

肘关节侧副韧带的解剖结构研究及临床意义

目的分析肘关节侧副韧带的解剖学特点及临床意义,为侧韧带损伤治疗提供解剖学依据。方法对40例正常人左右肘关节标本共80例进行解剖学研究,而且对鹤壁市人民医院30例内侧副韧带损伤患者的治疗效果进行总结。结果内侧副韧带分为前束、后束、斜束,且解剖特点各异。本文肘关节内侧副韧带分为：A型28例,B型37例,C型15例。肘关节外侧副韧带分为：Ⅰ型27例,Ⅱ型16例,Ⅲ型19例,Ⅳ型18例。经过对30名患者手术治疗一年后随访,24例疗效评级为优,占80%,6例为良,占20%。结论对肘关节侧副韧带进行解剖学研究,可以为肘关节副韧带损伤临床治疗提供资料参考。     

RNAi技术沉默K562细胞中c-myc基因的初步研究

目的运用RNAi技术，设计针对c-myc的小干扰RNA(siRNA)，研究其干扰效果。方法针对c-myc mRNA的第1357靶位点设计siRNAs，经Lipofectamine^TM 2000脂质体法转染K562细胞，进行RT-PCR、细胞计数和MTT法及流式细胞仪检测，观察其干扰效果。结果转染组与阴性对照组和空白对照组相比，c-myc mRNA表达明显减弱．细胞计数和MTTD(λ)值均有显降低，并有明显的凋亡率。结论运用RNAi技术，可以有效地干扰c-myc的表达．并进一步诱导细胞凋亡。