基因芯片技术在针灸研究中应用现状

正基因芯片技术是融生物学、化学、物理学、数学、计算机学、生物信息学及微电子学等多种学科技术为一体的基因序列及功能研究手段,以其高通量、大规模、平行化、集约化的技术特点,成为基因组学研究的一种重要工具。该技术能从细胞超微结构及分子相互作用来阐述生命的物质基础,从基因水平体现整体特性,进而在基因层面能很好地与针灸作用的整体性、综合性进行融合。因此,近年来,越来越多的研究者采用该技术探索针灸机理,且已取得了一定的成果。现综述如下。     

抗菌肽CM与血管内皮生长因子VEGF_(121)在大肠杆菌中表达及鉴定

目的：构建和表达人VEGF121的基因工程菌,为肿瘤血管的靶向治疗提供实验数据。方法：通过PCR引物延伸的方法,获得SUMO-CM-VEGF121融合基因;将该融合基因与原核表达载体pET22b连接后转化至Rosetta-gami(DE3)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经DEAE阴离子交换层析、Ni-NTA和分子筛等方法进行纯化,用SUMO酶切除分子伴侣SUMO后,最终获得融合蛋白CM-VEGF121。结果：DNA测序,设计合成的SUMO-CM-VEGF121融合基因为774 bp;所构建的表达菌株Rosetta-gami(DE3)/pET22b-SUMO-CM-VEGF121在20℃诱导24 h可溶性最好,其可溶性表达为菌体可溶性蛋白的21%。Western blotting检测该表达产物与人VEGF单克隆抗体具有特异性结合能力。结论：原核表达载体pET22b和Rosetta-gami宿主菌为CM-VEGF121最合适的条件,解决了其表达量低和不可溶问题。     

学习过程评价对组织学实验考核成绩的影响

在组织学实验教学过程中加入学习过程评价环节,采用期末切片考核和理论考核方式,对该教学模式与传统教学进行比较.结果显示,该教学模式的实验班切片考核和理论考核成绩均高于传统教学班(P＜0.05).学习过程评价环节的加入,不仅可以提高实验教学效果,也可以加深学生对理论知识的理解.     

心电图ST段改变的分析

ST段为自心室除极结束至心室开始复极的一段时间,相当于心室肌细胞动作电位的2时相.正常情况下ST段位于基线上.肢体导联ST段抬高<0.10mV,胸壁导联V1～V4抬高<0.25mV仍属正常,ST段移位的程度与QRS振幅等因素有关,S波越深,ST段抬高就越明显,在各个导联上ST段下降不应＞0.10mV,ST段时间多在50～150ms之间,凡不符合以上各点的ST段称为ST段改变.心肌缺血、损伤、肥厚、束支传导阻滞、提早复极综合征、炎症等都会引起ST段抬高或下降,在临床实践中部分药物及电解质紊乱均可引起ST段的延长和缩短.     

国产丁咯地尔治疗急性脑梗塞的疗效观察

目的 :评价丁咯地尔治疗急性脑梗塞的疗效。方法 :10 8例急性脑梗塞病人随机分为治疗组和对照组。治疗组 5 2例 ,男2 4例 ,女 2 8例 ,年龄平均 6 6 .2a ,予国产丁咯地尔 10 0～ 2 0 0mg加入 5 %葡萄糖或生理盐水 5 0 0mL中静滴 ,每日 1次 ,连续 7～ 14d ,同时应用川芎嗪静滴 ;对照组 5 6例 ,男 2 6例 ,女 30例 ,年龄 6 4.4a ,予右旋糖酐 40 5 0 0mL加川芎嗪 12 0～ 16 0mg静滴 ,每日 1次 ,连续 7～ 14d。结果 :丁咯地尔组的总有效率和显效率分别为 89.6 %和 79% ,明显优于对照组的 80 %和 5 8.9% (P <0 .0 1) ,丁咯地尔不良反应轻微。结论 :丁咯地尔可以改善脑血液循环 ,是治疗急性脑梗塞病人有效的药物。     

土家医针刺加民族药内服治疗面神经麻痹23例

面神经麻痹是指茎乳孔内面神经的非化脓性炎症所致的一种急性周围面神经麻痹，临床以面肌瘫痪而见口眼歪斜为基本特征，属民族医“口僻”、“面瘫”等。若失治误治，难以复原，并可继发颜面肌肉痉挛、萎缩等。春秋两季发病较高，可发生于任何年龄，男性略多。余近年来采用土家医针刺加民族药内服疗效满意，现报道如下。     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的 研究脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因及蛋白表达的关系,探讨谷氨酰胺(Gin)对脓毒症心肌细胞凋亡的保护作用.方法采用内毒素(LPS 4 ms/ks)腹腔注射法制作脓毒症大鼠模型,实验地点在中山大学北校区动物实验中心.健康Sprague-Dawley(sD)大鼠72只随机分为对照组、LPS组及LPS+Gln(0.3g/kg)组,再分为0 h,6 h,12 h,24 h亚组(腹腔注射后每组成功存活至观察时间点的大鼠累积达到6只,n=6),检测各时点心肌细胞凋亡率和Bcl-2及Bax蛋白的含量,同时检测心肌Bcl-2及Bax mRNA表达.对结果进行方差分析和相关性统计分析.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡率6 h、12 h及24 h均明显高于埘照组(F=186.786,P<0.01);心肌细胞Bax蛋白表达术后6 h降低(F=9.027,P<0.01),之后高于对照组;而Bcl-2蛋白表达6 h,12 h及24 h均低于对照组(F=301.142,P<0.01);Bax/Bcl-2蛋白表达比明显高于对照组(F=527.373,P<0.01);BaxmRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h较对照组均明显上调(F=126.157,80.745,P<0.01).LPS+Gln组与LPS组比较,6 h,12 h及24 h心肌细胞凋亡率明显低于LPS组(F=75.187,P<0.01);Bax蛋白表达下降(F=20.981,P<0.01),而Bcl-2蛋白却升高(F 164.969,P<0.000);Bax/Bcl-2蛋白表达比降低(F=141.426,P<0.01);Bax mRNA和Bcl-2 6 h,12 h及24 h组较LPS组均明显下调(F=103.463,89.373,P<0.01).结论 Bcl-2抗凋亡基因及Bax促凋亡基因及其蛋白的表达参与脓毒症心肌细胞凋亡;应用Gln能影响凋亡相关基因及蛋白表达,减轻脓毒症心肌细胞的凋亡,改善脓毒症预后.     

脓毒症大鼠心肌细胞Toll样受体4和炎症因子基因表达的变化及作用机制

目的 观察脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的变化及与Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)基因表达的关系;同时探讨谷氨酰胺(Gln)在脓毒症心肌损伤治疗中的保护作用.方法 采用内毒素脂多糖(LPS)腹腔注射法制备脓毒症大鼠模型.将大鼠随机分为对照组、LPS组及Gln组,再分为术后0、6、12、24 h亚组,每组6只.于相应时间点取心肌组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4、TNF-α及IL-6的mRNA表达,并观察心肌组织病理学改变.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡程度增高.LPS组、Gln组各时间点心肌细胞TLR4、TNF-α及IL-6的mRNA表达均较对照组明显增加(P均<0.05).而Gln组心肌细胞凋亡程度较LPS组轻,各时间点TLR4 mRNA表达均较LPS组升高幅度明显降低,且于12 h、24 h差异有统计学意义;TNF-α mRNA表达亦降低,于6 h、24 h差异有统计学意义;IL-6 mRNA表达较LPS组升高幅度降低,且于12 h差异有统计学意义(P均<0.05).结论 TLR4信号转导基因及其调控细胞因子TNF-α、IL-6基因表达在脓毒症心肌细胞损伤的发生发展中起重要作用.Gln通过影响相关基因表达干预脓毒症心肌细胞的凋亡.     

快速老化与正常老化小鼠脑内神经干细胞增殖的差异

背景:在老化过程中,脑内环境改变可引起脑内神经干细胞增殖能力改变.脑内神经干细胞与衰老和退行性神经病变疾病密切相关,增殖能力与年龄存在负相关,但以快速老化小鼠为衰老模型的相关研究未见报道.目的:比较快速老化与正常老化小鼠嗅球、海马、皮质神经干细胞增殖的差异.方法:分别取6只快速老化小鼠(SAMP8)和6只正常老化小鼠(SAMR1)的嗅球、海马、皮质组织,在固定、冰冻切片后,运用Ki-67/Nestin免疫荧光双标检测3个脑区的神经干细胞增殖情况.免疫荧光双标在荧光显微镜下通过Leica Qwin v3采图,在40倍物镜和10倍目镜下采图,每一张切片随机选取5 个相邻视野,通过Image-pro-Plus软件完成图像分析.结果与结论:正常老化小鼠和快速老化小鼠均有神经干细胞增殖现象,但二者存在差异,其差异主要表现在海马和嗅球两个脑区(P < 0.05).提示快速老化可能会导致海马、嗅球神经干细胞增殖能力降低.     

过量维A酸致昆明小鼠腭裂动物模型的建立及意义

目的:建立维A酸诱导的发生率较高、易于获得并可用于腭裂发生机制研究的动物模型。方法:采用致畸物全反式维A酸(atRA)作用于昆明小鼠(对照组采用等剂量溶剂),观察不同剂量和不同给药时间的胚鼠腭裂畸形发生率及腭部组织的光镜结构特点,确定诱导腭裂发生的最佳作用条件。结果:在孕10天给予80 mg/kg剂量atRA诱导昆明小鼠腭裂发生率最高为100.0%(P<0.01),为理想的腭裂动物模型,光镜结果显示,atRA诱导的腭裂为小腭。结论:成功建立了atRA致腭裂发生分子机制研究的动物模型,为进一步研究腭裂畸形的分子机制奠定了基础。