槲皮素诱导耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U2-OS/MTX300凋亡

 【目的】 研究槲皮素对耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞株U2-OS/MTX300的增殖抑制和诱导凋亡作用及相关机制。【方法】 以不同浓度槲皮素及甲氨蝶呤处理U2-OS及U2-OS/MTX300。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及平板克隆检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Hochest 33258 染色及流式细胞仪检测凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved-PARP,Bax,Bak,Bcl-2及Bcl-XL表达。【结果】 槲皮素可明显抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U2-OS/MTX300的增殖,72 h IC50值为(22 ± 4)μmol/L、10、25、50μmol/L可显著抑制U2-OS/MTX300克隆形成数量,且随剂量增加抑制作用明显增强。槲皮素与甲氨蝶呤之间不存在交叉耐药性。槲皮素能诱导U2-OS/MTX300细胞S期阻滞,并可诱导胞内产生典型凋亡小体,流式细胞仪可检测到明显凋亡。其作用机制是通过上调Bax,Bak及下调Bcl-2表达,促进cytochrome C释放及诱发PARP等重要胞内蛋白断裂来实现。【结论】 槲皮素可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U2-OS/MTX300细胞增殖并诱导其凋亡,线粒体途径可能是其诱导凋亡的重要机制。     

带血管蒂腓肠肌内侧头肌瓣转移重建髌腱的长期随访

Objective To evaluate the long following-up outcome of the medial gastrocnemius muscle transferring reconstruction the patella tendon after the wide resection of aggressive bone tumors in the proximal tibia. Methods With the 69 patients of the osteogenetic sarcoma in the proximal tibia were treated with the wide resection and reconstruction the patella tendon. After the long following up the knee extensor,function and complications were evaluated. Results With the 69 patients, the 45 survival patients were followed up for the average 68.6 (24-128) months. The local recurrence rate was 8.7%(6/69). The strength of knee extending was in the average of grade 4.2(3.6-5.0), the degree of knee flexion was in the average of 95°(75°-135°), the degree of knee extension was in the average of-2°(0°-12°), the knees of five patients cannot fully extension. The MSTS functional score was in the average of 77% (23.1/30). Conclusion During the limb salvage of the proximal tibial aggressive bone tumors, the medial gastrocnemius muscle transferring reconstruction the patella tendon could offer the knee extension strength; improve the soft tissue coverage and functional results.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂PCI-24781诱导耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U2-OS/MT300凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂PCI-24781诱导耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及平板克隆形成实验检测PCI-24781对骨肉瘤细胞U-20S/MTX300增殖的影响,hochest33258染色检测PCI-24781处理后细胞核形态改变,流式细胞仪检测凋亡,Western blot法检测cleaved-PARP、P53表达量及组蛋白H3、H4乙酰化水平变化。结果PCI-24781对耐甲氨蝶呤U2-OS/MT 300细胞呈剂量依赖性增殖抑制,其48 h IC50值为(0.55±0.03)μmol.L-1,该值与甲氨蝶呤敏感U2-OS细胞IC50值之间无统计学差异(P>0.05)。0.5μmol.L-1PCI-24781可显著抑制细胞克隆形成,其抑制率达(61±7)%。PCI-24781处理48 h后细胞内出现典型凋亡小体,流式细胞仪检测凋亡率达(29±4)%。Western blot检测可见随PCI-24781浓度升高cleaved-PARP,组蛋白H3、H4乙酰化水平及P53显著升高。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂PCI-24781可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与上调组蛋白乙酰化水平,促进抑癌基因P53表达有关。     

81例四肢病理性骨折的外科治疗

目的总结分析病理性骨折的临床治疗方法及其合理性。方法回顾性分析2003年6月至2006年6月中山大学第一附属医院骨肿瘤科手术治疗四肢病理性骨折81例。统计分析病理陛骨折的不同病因特点，临床特征及采用不同临床治疗方法的必要性和合理性。结果病理性骨折发生于8-74岁不同年龄的患者，平均年龄38．6岁。骨折病因依次为转移性肿瘤32例（39．6％），原发恶性肿瘤27例（33．4％），良性肿瘤22例（27．2％）；下肢57例（70．4％），上肢24例（29．6％）；29例（35．8％）合并有肺或其他部位转移。81例均接受手术治疗，术后随访时间6～36个月，平均32个月。76例（93．8％）术后能扶拐行走，其中45例（55．6％）3个月后正常行走，6例（7．3％）1年内死亡，13例（16．1％）3年内死亡。结论病理性骨折为临床常见病，不同病因有不同临床特征及应采用不同的治疗方法；掌握其不同临床特点，采用合理、优良有效的治疗方法是良好预后的关健。     

骨盆Ⅰ-Ⅱ-Ⅳ区肉瘤整块切除后腰盆钉棒重建系统

目的探讨骨盆Ⅰ-Ⅱ-Ⅳ区肉瘤整块切除后新设计的腰盆钉棒重建系统的临床应用。方法回顾性研究中山大学附属第一医院骨肿瘤科,2009年6月到2010年12月期间,行骨盆Ⅰ区、Ⅱ区和Ⅳ区肉瘤整块切除和腰盆钉棒系统重建术的病例资料,评价该术式的治疗效果及术后并发症。入选条件:穿刺活检证实骨盆原发性肉瘤;肺部CT未见转移灶,Eneking分期为ⅡB期;患者能完成规范的新辅助化疗;术前MRI评估证实肉瘤未侵犯髂外动静脉、坐骨神经和盆腔脏器,确认肉瘤累及骨盆Ⅰ-Ⅱ-Ⅳ三个区域。结果 4例累及骨盆Ⅰ区、Ⅱ区和Ⅳ区的原发性肉瘤患者接受肿瘤整块切除后腰盆钉棒系统重建。患者男3例,女1例;平均年龄29.75岁(18～45岁)。病理类型包括:尤文肉瘤2例,软骨肉瘤1例和骨肉瘤1例,尤文肉瘤和骨肉瘤完成新辅助化疗。肉瘤整块切除范围包括骨盆Ⅰ区、Ⅱ区和Ⅳ区肿瘤、肿瘤累及的髂肌、臀中小肌和部分臀大肌,同时采用骨盆髋臼和腰椎椎弓根钉棒系统重建髋臼、骨盆环和腰骶连接。术后3周患者开始进行康复治疗,术后3个月可扶拐行走。术后平均随访14个月(9～19个月),目前尚未发现复发和转移。MSTS功能评分平均为66.67%(63%～73%);Harris髋关节评分良2例,差2例。结论骨盆原发性肉瘤治疗的主要目标是通过广泛切除而获得治愈,通过骨盆环重建挽救下肢的主要功能。骨盆Ⅰ区、Ⅱ区和Ⅳ区肉瘤整块切除和腰盆钉棒系统既能完整的切除肿瘤,又能有效重建骨盆和腰骶连接功能。这种重建方式近期疗效观察能够达到患者及骨肿瘤专科医生的功能期望。     

一种新型穿刺活检针在骨与软组织肿瘤诊断中的临床应用

目的评价思特利穿刺活检针在骨与软组织肿瘤诊断中的应用。方法回顾性总结2011年9月到2012年3月期间,本组应用思特利穿刺活检针对132例患者施行肿瘤穿刺,比较研究穿刺病理结果和术后病理结果。结果在132例患者中,共进行133次（其中一例两个部位）初次穿刺,8人接受2次穿刺,首次穿刺结果阳性率为89．5％（119／133）,8例再次穿刺后,阳性率提高为95．5％（127／133）。121例穿刺活检结果与最终手术病理结果相符,准确率91．6％（121／132）。其中,骨内实性组织取材99例,穿刺结果的阳性率95．0％（94／99）,准确率为93．0％（92／99）;骨内溶骨性组织取材21例,穿刺结果的的阳性率与准确率均为85．7％（18／21）;软组织取材12例,穿刺结果的阳性率与准确率均为92．0％（11／12）;恶性骨与软组织肿瘤穿刺活检的敏感性及特异性分别为97．3％（70／73）及100％（59／59）,阳性预测值100％（71／71）,阴性预测值96．7％（59／61）。结论思特利穿刺活检针安全、有效,具有很高的穿刺活检阳性及准确率,尤其在骨内实性组织取材中具有明显的优势。     

恶性骨肿瘤患者化疗间歇期睡眠障碍与生活质量的相关性研究

目的了解恶性骨肿瘤患者化疗间歇期的睡眠障碍和生活质量情况,以及睡眠障碍与生活质量的相关关系。方法使用匹兹堡睡眠质量指数,欧洲癌症研究与治疗组织生活质量核心问卷对120例在广州市某三级甲等医院进行化疗的骨肿瘤患者进行问卷调查。结果恶性骨肿瘤患者化疗间歇期睡眠障碍评分(8.44±3.67)分,有55.8%的患者存在睡眠障碍。患者生活质量明显低于常模,除认知功能、气促、便秘和腹泻4个条目外,其余两组比较差异有统计学意义(P0.05),但总体生活质量优于住院患者,除社会功能、便秘和腹泻3个条目外,其余两组比较差异有统计学意义(P0.05)。生活质量的各功能维度得分与睡眠障碍得分呈负相关(P0.01),症状维度中,除恶心与呕吐和腹泻外,其余各症状得分与生活质量呈正相关(P0.01)。结论骨肿瘤患者化疗间歇期生活质量较差,且普遍存在睡眠障碍症状,睡眠障碍越严重,患者生活质量越差。因此提示医护人员要关注患者的睡眠质量,分析导致睡眠障碍的原因,提出干预措施,从而提高化疗患者的生活质量。     

半骨盆置换术治疗骨盆恶性肿瘤的初步应用

目的探讨半骨盆置换术在骨盆恶性肿瘤广泛切除和功能性保肢手术中的应用。方法回顾中山大学附属第一医院骨肿瘤科2003年至2006年18例半骨盆切除和重建手术治疗案例，评估骨盆恶性肿瘤广泛切除和假体置换术的疗效和并发症。结果中山大学附属第一医院骨肿瘤科18例骨盆原发性恶性骨肿瘤患者，接受了骨盆Ⅰ区＋Ⅱ区＋（Ⅲ区）切除和人工半骨盆假体置换手术。患者平均年龄为19岁，病理类型包括12例骨肉瘤、3例尤文肉瘤和3例纤维肉瘤，外科分期均为ⅡB。患者经过术前肿瘤评估，MRI显示肿瘤尚未侵犯髂血管和坐骨神经，全身骨扫描未显示肿瘤跳跃或转移，肺部CT显示肿瘤无转移；同时患者接受两个循环规范化术前化疗后，初步化疗评估为良好。术前充分准备，常规切除骨盆Ⅰ区＋Ⅱ区＋（Ⅲ区），安装组合式半骨盆。组合式半骨盆假体设计突出骶骨座、无髂骨、可调髋臼及耻骨支。术中平均出血3000ml（1500～6000m1）。1例术后腓总神经损伤，5例有伤口并发症，其中1例感染和1例残腔愈合不良的患者接受了股外侧肌（皮）瓣转移，伤口均一期愈合。术后3周开始功能锻炼，2至3个月可扶拐行走。平均随访36．73个月（15-58个月），2例局部复发，3例死于远处转移，MSTS功能评分平均65％。结论在骨盆原发性恶性肿瘤的治疗中，广泛切除是治愈肿瘤的关键，应用半骨盆假体置换能有效重建骨骼缺损，联合肌皮瓣移植可以解决困难的伤口并发症，患肢功能可以接受。改进假体设计，改善患肢功能是今后努力的方向。     

蟾毒灵诱导骨肉瘤细胞株凋亡的蛋白质组学研究

目的：探索蟾毒灵诱导骨肉瘤细胞株凋亡的作用及相关分子机制。方法：利用MTT法检测蟾毒灵处理骨肉瘤细胞株U2OS,U2OS/MTX300（甲氨蝶呤耐药细胞株）,SAOS2,IOR/OS9后24,48,72 h的生长抑制作用,通过流式细胞仪检测蟾毒灵处理48 h后上述细胞凋亡率,双向凝胶电泳联合MALDI-TOF/TOF质谱技术筛选蟾毒灵处理U2OS细胞48 h后差异表达的蛋白,Western blot法验证相关蛋白表达。结果：蟾毒灵对四株骨肉瘤细胞株生长抑制作用呈时间及剂量依赖性,蟾毒灵对甲氨蝶呤敏感细胞株U2OS及耐甲氨蝶呤细胞株U2OS/MTX300的72 h IC₅₀分别为（37.43±4.1）,（32.24±5.3） nmol·L^-1。流式细胞仪检测结果证实蟾毒灵可显著诱导四株骨肉瘤细胞凋亡。蛋白质组学筛选、鉴定出蟾毒灵处理U2OS 48 h后24种差异表达蛋白,进一步Western blot验证发现凋亡相关蛋白中热休克蛋白27表达变化最为显著,并且过表达热休克蛋白27可部分逆转蟾毒灵诱导U2OS及U2OS/MTX300细胞凋亡的作用。结论：蟾毒灵具有显著诱导骨肉瘤凋亡作用,其中热休克蛋白27蛋白水平下调在蟾毒灵诱导的骨肉瘤细胞凋亡中具有重要作用。     

趋化因子CXCL14在骨肉瘤中的表达及其与预后的关系

目的研究趋化因子CXCL14在骨肉瘤细胞和组织中的表达及其与患者预后的关系。方法利用RT-PCR、酶联免疫吸附
法（ELISA）和荧光定量PCR技术检测4种骨肉瘤细胞株及40对骨肉瘤及癌旁肌肉中CXCL14的表达,CCK8细胞增殖实验、克
隆形成实验观察CXCL14对U2OS细胞增殖的影响,免疫组化检测CXCL14在骨肉瘤组织中的表达,并运用Kaplan-Meier 法进
行生存分析。结果CXCL14在骨肉瘤细胞株中的表达均高于正常成骨细胞,而且其在骨肉瘤组织的表达也显著高于癌旁肌肉
组织（P<0.01）。干扰CXCL14表达能抑制U2OS的生长（P<0.05）,经两条CXCL14干扰RNA处理后U2OS克隆形成率分别为
（4.93±0.25）%和（5.03±0.0.31）%,均显著低于阴性对照组（8.03±1.16）%,差异有统计学意义（P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析
显示,CXCL14高表达的患者预后比低表达组差（P=0.02）。结论CXCL14在骨肉瘤中高表达,它能促进骨肉瘤细胞的增殖并与
患者不良预后相关,提示其可能成为潜在的治疗靶点。