PAI-1启动子序列与荧光素酶报告基因扩增及载体连接问题分析

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(Plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)启动子荧光素酶表达质粒构建中扩增、转化、酶切及连接的问题。方法利用PCR技术扩增1100 bp长度PAI-1启动子片段,与PUC-19T载体连接,将PUC19T-PAI-1 1100质粒,及荧光素酶报告基因pGL3-Basic质粒转染大肠肝菌(DH5a)后扩增,提取并纯化;以BglⅡ,MluⅠ酶切,电泳并回收PAI-1 1100片段和pGL3-Basic酶切大片段,将PAI-1 1100片段插入荧光素酶报告基因pGL3-Basic中,构建含PAI-1 1100片段荧光素酶质粒。结果扩增PAI-11100 bp片段成功,目的片段与载体PUC19T,pGL3-Basic载体连接条件较苛刻,需要增加连接时间及效率的摸索。结论控制扩增时DNA浓度,胶回收,感受态质量,LB平板质量,内切酶,连接时间及质量比等问题都可增加连接成功概率。     

RICU护理风险管理对ARDS患者呼吸机相关性肺炎的预防效果观察

目的:观察RICU(呼吸重症监护病房)护理风险管理对ARDS(急性呼吸窘迫综合征)患者呼吸机相关性肺炎的预防效果。方法:选取我院收治的RICU收治的60例ARDS患者,随机分为两组,各30例。观察组行RICU护理风险管理,对照组行常规护理。比较两组护理满意度及风险事件发生情况。结果:观察组满意度93.33%、风险事件发生率3.33%均显著优于对照组76.67%、23.33%,且组间差异对比P0.05。结论:RICU护理风险管理对ARDS患者呼吸机相关性肺炎的预防效果显著,即可提升患者满意度,减少各种风险事件,值得应用推广。     

重组人半乳糖苷结合凝集素-9质粒的构建及表达

目的构建人半乳糖苷结合凝集素-9(Galectin-9)的真核表达质粒pGalectin-9,并检测其表达。方法通过DNA重组技术和PCR方法从人外周血单个核细胞克隆Galectin-9基因,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pGalectin-9瞬时转染中国仓鼠卵巢(Chinesehamster ovary,CHO)细胞,通过Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光方法检测Galectin-9的表达。结果 DNA测序和酶切鉴定证明Galectin-9基因正确克隆至pcDNA3.1(+)的多克隆位点;以重组质粒pGalectin-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光方法,在分子和细胞水平证实Galectin-9的表达。结论成功构建pGa-lectin-9的重组质粒,并证实其在CHO细胞中可以成功表达。     

同时稳定抑制X连锁凋亡抑制蛋白和生存素表达对胰腺癌细胞上皮-间质转化及侵袭性的影响

目的:探讨同时抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(survivin)后,对胰腺癌Panc-1细胞上皮-间质转化(EMT)及侵袭性的影响,并初步探讨其机制。方法:在前期实验构建的胰腺癌Panc-1-XS细胞(XIAP和survivin同时稳定抑制)中,运用Transwell小室实验及划痕实验分别检测细胞侵袭和迁移能力;半定量Western印迹分别检测钙黏蛋白-E(E-cadherin,上皮标志物)、锌指转录因子(Slug)蛋白(间质标志物)及第10号染色体同源丢失性磷酸酶——张力蛋白基因(PTEN)和磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)蛋白的表达情况。结果:Panc-1-XS细胞侵袭和迁移能力显著下降,同时伴随E-cadherin蛋白表达显著上调及Slug蛋白显著下调,即出现间质-上皮转化(MET);PTEN蛋白表达上调、P-Akt蛋白表达下调。结论:同时抑制XIAP和survivin表达,能部分逆转胰腺癌Panc-1细胞EMT表型,显著减弱其侵袭和迁移能力;此调控过程可能通过PTEN/PI3K/Akt途径实现。     

脑机接口技术在神经系统疾病康复中的应用进展

脑-机接口(BCI)是一种利用大脑信号与外部环境进行交互的新技术,在运动辅助及康复治疗中具有重要的研究价值。本文主要介绍BCI技术在脑卒中、脊髓损伤和肌萎缩侧索硬化症康复中的应用进展,并就BCI技术目前的局限性及研究发展方向进行综述。     

人脂联素基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建

目的:克隆不同长度人脂联素基因(AD)启动子片段,构建含人AD启动子片段的荧光素酶报告基因载体并进行测序鉴定。方法:利用PCR技术从人全血基因组DNA中扩增出AD启动子片段,经纯化酶切后克隆入载体pGL-3 basic中,形成重组质粒,筛选阳性克隆进行测序,并与GenBank比对。结果:从人全血基因组DNA中PCR扩增得到1.1 kb和2.1 kb AD启动子片段,构建2种报告基因载体,将其命名为AD promoter1.1-pGL-3 basic和AD promoter2.1-pGL-3 basic,经测序证实所插入的目的片段与GenBank检索的人AD启动子序列99.6%匹配。结论:成功构建了含人AD启动子片段的报告基因载体。     

非酒精性Wernicke脑病康复治疗1例及文献复习

目的 分析非酒精性Wernicke脑病(Wernicke's encephalopathy, WE)的临床表现、诊断及临床治疗、康复治疗方案。方法 回顾性分析长治医学院附属和平医院收治的1例非酒精性WE的诊治过程及康复治疗方案。结果 患者胆囊结石伴胆囊炎、胆囊切除术后右上腹疼痛,意识进行性加深,经头颅MRI确诊为非酒精性Wernicke脑病,经补充维生素B1及康复治疗后,患者病情好转,各项功能障碍改善。结论 对于长期营养摄入不足,且合并精神状态改变、共济失调和眼球运动异常的患者,临床医生应尽早进行诊断性补充维生素B1,并完善头颅MRI明确诊断。通过综合康复治疗提高患者生活质量。     

丹参饮合生脉散治疗不稳定性心绞痛

研究丹参饮合生脉散对不稳定性心绞痛的治疗作用。方法：将１１８例患者随机分为丹参饮合生脉散组和西药常规治疗组。治疗组在西药常规治疗的基础上加服中药丹参饮合生脉散。观测２组患者心绞痛症状，心电图变化，硝酸甘油消耗量及中医各证型疗效等。     

儿童良性急性肌炎：（附2例报告）

儿童良性急性肌炎(benign acute childhood myositis)是一种少见而独特的临床综合征。又称急性短暂性肌炎(acute transient myositis)感染后肌炎(pastinfectious myositis)及流行性腿肌痛(myalgia cruris epidemica)。自1957年Lundberg首次报道以来,已陆续报告百余例,但国内迄今尚未见报道、本文报告二例。