宫颈癌细胞中NRDR选择性剪接新亚型表达质粒的构建及原核表达

背景与目的:构建宫颈癌细胞中视黄醇脱氢/还原酶-辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)及其选择性剪接亚型NRDRB1原核表达载体,并在BL21-AI大肠杆菌中表达融合蛋白. 材料与方法:用RT-PCR检测宫颈癌组织中NRDR、NRDRB1表达,RACE方法克隆NRDRB1全长cDNA,运用Gateway表达系统将NRDR、NRDRB1编码区序列构建到表达载体,转化到大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白通过金属离子亲和层析纯化. 结果:在宫颈鳞癌组织中发现NRDR新的选择性剪接亚型NRDRB1,构建了NRDR、NRDRB1原核表达载体,在BL21-AI中表达出氨基端含6×His标签的重组蛋白,诱导表达4 h后目的蛋白可占总蛋白量的30%～50%,经一步亲和层析得到了高纯度的NRDR及NRDRB1重组蛋白. 结论:在大肠杆菌中获得高效表达的NRDR、NRDRB1蛋白,为进一步研究其功能提供了实验材料.     

维甲酸衍生物对肿瘤细胞的凋亡诱导作用

维甲酸及衍生物的抗肿瘤作用已在白血病及多种实体肿瘤的临床治疗及实验室研究中显示出其诱人前景。其中,较引人注目的是一系列新的维甲酸衍生物,如CD437,ST1926,MM002等。这些新发现的维甲酸衍生物较目前临床应用较广的全反式维甲酸(ARTA)有更强的凋亡诱导作用,更低的细胞毒性和更理想的药物代谢动力学指标,诱导凋亡途径也不同于传统维甲酸类药物作用依赖p53激活的途径。其作用的分子机制也完全有别于目前已知的化疗药物,可诱导对维甲酸和其它多种化疗药物耐药的肿瘤细胞发生凋亡。该文对目前维甲酸衍生物在肿瘤细胞中的凋亡诱导作用研究作一综述。     

氟砷染毒大鼠其子代脾脏氧化性损伤的研究

目的：揭示氟砷共存时对子代健康影响。方法：采用两代一窝繁殖实验 的方法,测定Wistar大鼠暴露于氟砷后其子代脾脏中氟砷的蓄积水平、脂质过氧化水平和抗氧化能力,以及病理组织学检查。结果：随着暴露剂量的增加脾脏中氟、砷含量显著增加,SOD和GSH－Px活性随之降低, 而LPO含量却逐渐增加;停止氟砷暴露8周后,脾脏中氟砷含量显著降低,酶的活性有所恢复,而LPO含量明显减少。结论：氟砷联合染毒可导致大鼠子代脾脏的氧化性损伤。     

锰染毒雄性大鼠体内脂质过氧化水平改变

目的：观察锰染毒后大鼠体内脂质过氧化水平的改变,为锰的毒作用机制研究提供依据。方法：以氯化锰为受度物,雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠为受试对象,测定其脏器脂质过氧化水平。结果：氯化锰经口饮水染毒后,大鼠各脏器超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）均明显下降,谷胱苷肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）亦有不同程度改变,而巯基（－ＳＨ）含量仅肝脏变化较明显。结论：一定剂量的锰可引起大鼠体内脂质过氧化水平的改变,而这种变化很可能是锰的     

医护人员坚韧性素质与职业倦怠的关系

目的:探讨医护人员坚韧性素质与职业倦怠的关系,为改善医护人员的心理健康状况、提高其医疗服务水平提供一定的理论依据并制定相应的措施。方法:运用中国成年人坚韧人格量表以及职业倦怠量表对天津、山东、广东三地583名医疗卫生界人员进行调查研究,运用SPSS 13.0对数据进行统计分析。结果:1医护人员的职业倦怠总体水平和坚韧性素质在年龄、职称等人口学特征上差异显著(P0.05);2医护人员的职业倦怠与坚韧性素质之间存在显著负相关(r=-0.462,P0.01),与坚韧性素质的韧性、控制、投入、挑战4个维度之间也存在显著负相关(r=-0.443,-0.391,-0.484,-0.274;P0.01);3逐步回归分析显示,影响医护人员职业倦怠的素质因素有投入、韧性因子和职称因素。结论:医护人员的坚韧性素质水平越高则其职业倦怠水平越低。     

辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与多克隆抗体制备

目的：制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶（NRDR）多克隆抗体.方法：应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔.斑点杂交测定抗血清效价,HiTrap Protein G柱纯化兔IgG,免疫印迹鉴定抗体特异性.结果：BL21-AI对NRDR进行了高效表达.回收的NRDR蛋白溶液的浓度为0.36mg/ml,回收率为48.5%.所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清,血清的效价是1：500,检测极限是8ng NRDR蛋白.纯化后的NRDR抗体具有较高的免疫活性和特异性.结论：建立了高效制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的方法.     

玄参内生真菌分离、鉴定及系统发育分析

分别从武隆产区玄参根、主茎、侧枝、叶片和重庆市区栽培玄参侧枝中分离内生真菌,根据形态学特征和26Sr DNA D1/D2测序结果对其进行鉴定,并进行了种群多样性分析,对优势属炭疽菌属内生真菌构建了系统发育树。试验结果显示:真菌种群多样性指数,武隆玄参叶片主茎=侧枝根,重庆玄参侧枝武隆玄参侧枝。共计分离得到内生真菌58株,绝大部分是各种植物病原菌,其优势属为刺盘孢属Colletotrichum,其中绝大多数是C.gloeosporioides和C.boninense。叶片和子芽可能是内生菌侵染的主要途径;内生菌和病原菌可能相互转化,受环境、基因型等多种因素影响。     

基于转录组测序挖掘国槐花蕾黄酮类物质生物合成相关基因

为研究国槐黄酮类物质的生物合成途径,利用高通量测序技术对国槐花蕾进行转录组测序,经Trinity软件组装获得113 907条unigenes,平均长度803 bp,其中72 752条unigenes在数据库获得注释信息,共搜索到38 891个SSR位点。通过代谢通路分析,发现国槐转录组中有135个unigenes参与黄酮类生物合成,有959条unigene参与其他次生代谢途径。进一步分析参与国槐芦丁生物合成相关基因,发现有24个与CHS相关,有52个与FLS相关,有11个与UFGT相关。国槐转录组数据的获得为研究国槐黄酮类物质生物合成途径奠定了基础,也为槐米药材品质的形成提供理论依据。     

国槐不同组织器官中多成分分析及抗氧化活性研

目的 通过对国槐Sophora japonica不同组织器官进行综合评价,为其资源合理利用提供依据。方法 采用高效液相色谱（HPLC）法、电感耦合等离子体发射光谱（ICP-OES）法、比色法检测样品中芦丁、水仙苷、槲皮素、异鼠李素、重金属含量以及Fe³⁺还原能力、DPPH自由基（DPPH·）、ABTS自由基（ABTS^·+）清除能力和总抗氧化能力（FRAP）。运用SPSS 20.0软件对结果进行聚类分析和主成分分析。结果 国槐不同组织器官中4种黄酮类成分总含量为花蕾 > 花 > 花轴 > 叶 > 枝条;抗氧化能力依次为花蕾 > 花 > 花轴 > 叶 > 枝条,与黄酮类成分总量呈正相关。花和花蕾中5种重金属含量均符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》,部分叶、花轴和枝条中Cd超标。聚类分析将花和花蕾聚为一类,花轴、叶和枝条聚为另一类;主成分分析将8个变量提取为2个主成分（PC1和PC2）,不同组织器官间PC1值有明显差异,不同批次间表现在PC2值上有差异。结论 国槐花及花蕾中重金属含量低,黄酮类成分含量高,抗氧化活性强,品质优良;花轴及叶也含有较高的黄酮类成分及较强的抗氧化能力,具有进一步开发利用的价值。     

宫颈癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶及其选择性剪接亚型真核表达载体的构建和表达

目的:构建宫颈癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)及选择性剪接亚型NRDRB1真核表达载体,并转染HeLa细胞表达融合蛋白和native蛋白。方法:分别以pDONR-NRDR、pDONR-NRDRB1载体为模板,用PCR方法扩增两端带有酶切位点的NRDR及NRDRB1编码区序列,酶切后连接到pCDNA3、pCMV-Myc真核表达载体上,经酶切、测序鉴定后,转染HeLa细胞16 h,Western blot检测蛋白表达情况,蛋白质谱分析鉴定表达蛋白。结果:成功构建NRDR、NRDRB1真核表达载体,转染HeLa细胞后,可表达带有Myc标签的蛋白和不带标签的native蛋白;质谱分析结果进一步证实所表达的蛋白为NRDR和NRDRB1。结论:获得了在真核细胞中表达的NRDR、NRDRB1蛋白,为进一步研究其功能提供了实验材料。