人胚胎无瘢痕愈合模型的建立及组织学初步观察

创面愈合后瘢痕形成一直是困扰整形外科医师的临床难题 ,孕中期胎儿皮肤创面愈合后无瘢痕形成 ,成为人们期望的理想愈合方式[1 ] ,我们将孕中期人胎儿皮肤异种移植至裸鼠的皮下 ,建立人胎儿无瘢痕愈合的模型 ,并对其愈合过程进行了组织学观察 ,以期为人胎儿无瘢痕愈合机制的研究提供一定依据。1　材料和方法1 1　材料1 1 1　动物　雌性的成年裸鼠 (ＢＡＬＢ ｃ) 4 0只 ,6～ 7周龄 ,体重 (2 0± 1)ｇ,由上海医药工业研究院动物房提供。裸鼠随机分成 8组 ,无菌饲料饲养于 2 3℃无菌环境中。1 1 2　人胎儿皮肤　孕龄为 2 0～ 2 4周的正常健康孕…     

用基因芯片研究不同皮肤组织创面愈合过程中同源异形框基因的差异表达

目的 探讨人胎儿及成人皮肤创面愈合过程中同源异形框基因的差异表达.方法 采用包含有14000个靶基因cDNA克隆的基因芯片技术,对正常成人和胎儿及其创面愈合过程中同源异形框基因族的表达进行对比观察.结果 正常成人和胎儿及其创面愈合过程中同源异形框基因族呈现差异表达,其中以PRX-2、HOXB13、HOXB6和HOXB7的差异表达为显著.结论 同源异形框基因的差异表达表明正常成人和胎儿皮肤的发育生物学状态存在差异,可能是胎儿和成人皮肤不同创面愈合方式的根本原因.     

人胚胎无瘢痕愈合动物模型的组织学初步观察

背景孕中期人胎儿创伤后无瘢痕愈合,目前研究的障碍之一是缺乏合适的动物模型.目的建立人胎儿无瘢痕愈合的动物模型.设计完全随机对照实验研究.地点和对象实验地点在第二军医大学长征医院整形外科完成,对象为BALB/c裸鼠,雌性,6～7周龄,体质量(20.0±1.0)g,由上海医药工业研究院动物房提供.孕龄为20～24周、因创伤等原因流产的胎儿背部皮肤,孕妇身体健康,由第二军医大学长征医院妇产科提供.干预将人胎儿皮肤移植到裸鼠背部皮下,制造切口建立动物模型.于移植术前、移植术后7 d及创伤后3,7,14,120 d取标本.主要观察指标创面愈合的过程的大体及组织学观察.结果人胎儿皮肤移植后成活,切口愈合后无瘢痕产生.结论该模型是人胎儿无瘢痕愈合机制研究比较合适的动物模型.     

重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165在大鼠骨髓基质细胞中的表达

目的 利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒(Ad-VEGF165),并观察Ad-VEGF165转染大鼠骨髓基质细胞(bMSCs)后VEGF165的表达情况. 方法 将PCR获取的VEGF165目的 基因插入到pAATrackCMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-VEGF165,经Pme I酶切线性化后,采用电穿孔法转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183大肠杆菌感受态细胞中,挑选同源重组菌落.提取质粒并用Pac I酶切鉴定.线性化重组质粒pAdEasy-VEGF165转染293T细胞,包装成重组腺病毒颗粒.并扩增收集重组腺病毒,测定病毒滴度.体外培养大鼠骨髓基质细胞,Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞,转染后在荧光显微镜下观察.转染的骨髓基质细胞采用RT-PCR和ELISA法检测VFGF165的表达水平. 结果 经酶切鉴定,基因测序及绿色荧光观察证实成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒,并扩增出109pfu/ml的高滴度重组腺病毒.Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞后,RT PCR证明转染的骨髓基质细胞内有VEGF165mRNA表达.ELISA检测发现转染组上清液中VEGF165蛋白分泌量明显高于对照组(P＜0.01). 结论 pAdEasy-VEGF165转染对骨髓基质细胞的增殖能力无明显影响,而且骨髓基质细胞能够表达并分泌VFGF165为研究骨组织工程血管化局部基因治疗奠定了基础.     

1例ANCA相关性血管炎患者行蛋白A免疫吸附治疗的效果观察

抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性血管炎是一组由自身免疫介导的炎症性疾病.本文介绍了1例ANCA相关性血管炎患者接受蛋白A免疫吸附治疗的情况,对其治疗过程及临床疗效进行分析与总结,以期为临床上治疗此病提供参考和借鉴.     

人胎儿和成人皮肤及其创面愈合过程中转化生长因子 - β的表达

目的探讨人胎儿和成人皮肤及其创面愈合过程中转化因子-β(TGF-β)的表达.方法利用已建立的人胎儿无瘢痕愈合动物模型,获取相应标本,结合临床所取成人皮肤标本,采用免疫组化染色方法,观察TGF-β的表达情况.结果正常人胎儿皮肤及其创面愈合过程中TGF-β的表达极低,无明显差异(P>0.05),而上述表达与正常成人皮肤及其创面的表达之间差异显著(P<0.01).结论TGF-β的低水平表达可能是胎儿皮肤无瘢痕愈合的重要原因之一.     

慢性肾衰竭维持性血液透析合并不宁腿综合征的中医证候研究

【目的】探讨慢性肾衰竭维持性血液透析(MHD)患者合并不宁腿综合征(RLS)中医证候的分布规律及相关性。【方法】纳入MHD患者304例,采集患者中医四诊信息进行辨证分型得出其中医证候规律,比较各证候RLS的患病率;同时,比较不同转铁蛋白饱和度(TS)下RLS及其证候分布情况。【结果】(1)MHD患者各中医证候RLS患病率比较,差异有统计学意义(P0.05);本虚证中的气阴两虚证、肝肾阴虚证RLS患病率较高,分别为33.3%、23.5%;标实证中血瘀证的患病率较高,为21.6%。(2)TS20%的透析患者合并RLS的比例较TS≥20%的高,差异有统计学意义(P0.05);气阴两虚证、肝肾阴虚证的透析患者TS20%的百分比较其他证候高,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】气阴两虚证、肝肾阴虚证是血液透析合并RLS的高危证候,临床上需注意气阴两虚证、肝肾阴虚证透析患者的TS水平。     

应用AdEasy腺病毒载体系统构建血管内皮生长因子165重组腺病毒

目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建血管内皮生长因子165（VEGF165）重组腺病毒，并在293T细胞中扩增。方法将PCR获取的VEGF165基因酶切并插入到pAdTrack-CMV中，构建成腺病毒穿梭质粒pAdTrack-VEGF165，经PmeI酶切线性化后，采用电穿孔转化到事先电转化腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183大肠杆菌感受态细胞中，挑选同源重组菌落。提取质粒并用Pac I酶切鉴定，线性化重组质粒pAdEasy-VEGF165转染293T细胞，包装成重组腺病毒颗粒，荧光显微镜下观察绿色荧光表达，并扩增收集重组腺病毒，测定病毒滴度。结果经限制性内切酶检测、基因测序及和绿色荧光观察证实成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒，并扩增出10^9pfu／mL的高滴度重组腺病毒。结论成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒载体，为研究骨组织工程血管化局部基因治疗奠定了基础。     

镍钛记忆合金牵张犬腭骨-上颌骨缝超微结构的研究

目的 利用透射电镜观察不同时间段犬腭骨-上颌骨缝内细胞超微结构的变化,以探索颅面部骨缝组织在张力作用下的变化.方法 制作镍钛形状记忆合金(NiTi-SMA)扩张器,并用口腔矫形测力器测定其最大力值为3.5 N.选择8周龄杂种犬45只,随机分为空白对照组、实验对照组、实验组.实验对照组和实验组在全麻下,去除硬腭中部后部骨质,缝合口腔和鼻腔侧黏膜,形成宽约8 mm的腭裂模型.实验组将NiTi-SMA安置在硬腭上,分别于牵张后3、7、14、28、56 d处死动物,并制作电镜标本.透射电镜下观察腭骨-上颌骨缝内细胞的变化过程.结果 电镜下腭骨-上颌骨缝牵张,首先表现为组织断裂,渗出,细胞死亡,随后是骨和纤维生成细胞群增殖活跃,成骨细胞和成纤维细胞功能增强,最终恢复正常缝组织结构.结论 电镜下可以区分缝细胞的类型和功能状态,提示缝牵张是组织修复与再生并存的过程,张力引发细胞反应特别是成骨反应是导致骨缝增宽的主要因素.     

镍钛记忆合金牵张犬腭骨-上颌骨缝超微结构的研究

目的 利用透射电镜观察不同时间段犬腭骨-上颌骨缝内细胞超微结构的变化,以探索颅面部骨缝组织在张力作用下的变化.方法 制作镍钛形状记忆合金(NiTi-SMA)扩张器,并用口腔矫形测力器测定其最大力值为3.5 N.选择8周龄杂种犬45只,随机分为空白对照组、实验对照组、实验组.实验对照组和实验组在全麻下,去除硬腭中部后部骨质,缝合口腔和鼻腔侧黏膜,形成宽约8 mm的腭裂模型.实验组将NiTi-SMA安置在硬腭上,分别于牵张后3、7、14、28、56 d处死动物,并制作电镜标本.透射电镜下观察腭骨-上颌骨缝内细胞的变化过程.结果 电镜下腭骨-上颌骨缝牵张,首先表现为组织断裂,渗出,细胞死亡,随后是骨和纤维生成细胞群增殖活跃,成骨细胞和成纤维细胞功能增强,最终恢复正常缝组织结构.结论 电镜下可以区分缝细胞的类型和功能状态,提示缝牵张是组织修复与再生并存的过程,张力引发细胞反应特别是成骨反应是导致骨缝增宽的主要因素.