人组织因子基因RNAi载体pENTR^TM/U6-TF-shRNA的构建与鉴定

目的：RNAi效应与基因转移有密切关系。拟通过构建组织因子基因RNAi载体,为达到阻止凝血过程的启动打下基础。方法：实验于2006-11/2007-05在南方医科大学中医药学院中医症候实验室完成。利用Invitrogen公司在线软件设计人组织因子基因（NM_001993）干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒感受态扩增,质粒DNA小提、测序。结果：合成的寡核苷酸双链退火处理后,经4%琼脂糖凝胶电泳,紫外观察可见ds oligo和ss oligo清晰可见,双链寡核苷酸与pENTRTM/U6的连接反应,转化到质粒感受态扩增后,提取得到的质粒DNA经过测序结果证实pENTRTM/U6-TF-shRNA为阳性克隆。结论：成功构建出凝血途径的人组织因子基因pENTRTM/U6-TF-shRNA载体,为研究组织因子基因RNAi载体在出凝血疾病中的应用提供了稳定的转染细胞工具。     

呼吸机螺纹管快速晾干法

呼吸机硅胶螺纹管在含氯消毒液中浸泡消毒后,需用清水冲洗干净,晾干备用。目前临床常规将螺纹管平放于治疗巾上晾干,由于内腔水分无法自行流出,因此要达到充分晾干耗时较长。如晾干不彻底,管腔内留有水迹易滋生细菌,达不到消毒隔离要求。若使用夹子固定螺纹管下垂晾晒,既造成对螺纹管的压痕又不符合消毒隔离要求。我科2006年5月对600余根呼吸机螺纹管采用快速晾干法,克服了以上不足,现报道如下。     

利用改良抑制消减杂交方法建立再生障碍性贫血CD4+T细胞的基因差异表达文库

目前发现T细胞介导的免疫在再生障碍性贫血(再障)发病机制中起重要作用，并且已有多个独立的研究小组从再障患外周血及骨髓中成功分离出能引起造血功能衰竭的致病相关性T细胞克隆，并证实其表型为CD4^ T细胞，但这些T细胞异常增殖、活化及抑制机体造血功能的具体机制仍不清楚。我们通过改良抑制消减杂交的方法，建立CD4^ T细胞的差异基因表达库，为揭示再障病理损伤的机制提供线索。     

烧伤合并急性肾功能衰竭行血液透析1例观察与护理体会

2006年6月，我们收治1例烧伤合并急性肾功能衰竭患者，早期行血液透析，经严密观察与精心护理，效果满意。现报告如下。     

骨组织脱钙方法的改良

骨组织必须经过脱钙才能制作切片。选择适当的脱钙液、脱钙方法以及脱钙时间与骨组织的制片质量有密切关系。我们运用超声波技术及两种传统的脱钙方法对不同的骨性组织分组进行脱钙制片,并进行比较,发现该方法在不破坏组织结构及影响染色的同时,缩短了诊断时间,保证了切片质量。现将方法介绍如下。     

夏日蝉趣

“垂缕饮清露,流响出疏桐。居高声自远,非是藉秋风。”这是唐代著名诗人虞世南一首咏蝉的诗,是唐代咏蝉诗中“三绝”之一。秋高蝉噪,蝉声远传,一般的人都以为是借助于秋风,而虞世南却见解独到,强调这是由于“居高声自远”。     

化疗药物对人乳腺癌荷瘤裸鼠ER-α表达和甲基化水平的影响

目的探讨常用化疗药物对人乳腺癌荷瘤裸鼠雌激素受体α(ER-α)表达和甲基化水平的影响。方法 36只裸鼠接种ER阳性表达(ER⁺)人乳腺癌细胞株MCF-7,36只裸鼠接种ER阴性表达(ER^-)人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。成功建模后,均分别腹腔注射紫杉醇和表柔比星0、1、2、5、10、20 mg/kg,计算肿瘤体积。采用Western blot法检测肿瘤组织中ER-α、DNA甲基转移酶1(DNMT1)和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的蛋白表达,定量甲基化特异性PCR检测ER-α甲基化水平。结果紫杉醇和表柔比星腹腔内给药后,肿瘤体积呈剂量依赖性缩小(P<0.05)。ER⁺ MCF-7细胞种植瘤中,紫杉醇和表柔比星均可导致ER-α蛋白表达降低(P<0.05),DNMT1和HDAC1蛋白表达增加(P<0.05),ER-α甲基化水平升高(P<0.05)。ER^- MDA-MB-231细胞种植瘤中,紫杉醇和表柔比星引起DNMT1和HDAC1蛋白表达增加(P<0.05);而ER...     

间歇性预激综合征误诊为舒张晚期室性期前收缩1例

患者男性,31岁。阵发性心慌2年。常规心电图示频发的室性期前收缩呈三联律。24h动态心电图（图1）示：室性期前收缩2000余次。第2,6个QRS波群宽大畸形,形态与卫端窦性QRS差别较大。其前可见P波。初诊为频发的室性期前收缩。     

宫颈粘连误诊分析

宫颈粘连是人工流产术,特别是负压吸宫术的晚期并发症之一,误诊率较高,近年来已逐渐被妇产科医师所重视.现将我院诊治的16例官颈粘琏患者曾被误诊的临床资料进行分析如下:     

大鼠体内肝细胞碱性彗星试验评估3种参考化学物的遗传毒性

[目的]建立大鼠体内肝细胞碱性彗星试验方法,检测3种参考化学物的遗传毒性.[方法]将6～10周龄的Sprague Dawley大鼠随机分为4组,每组10只,雌雄各半.以生理盐水(0.9％NaCl溶液)为阴性对照组,受试物组分为甲基磺酸乙酯(EMS)200 mg/kg组、N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)50 mg/kg组...