重组腺病毒载体介导HOSM 基因对胰腺癌细胞PC3体外增殖的抑制作用

目的构建了含人抑瘤素M（HOSM）基因的复制缺陷型重组腺病毒载体AD-HOSM,观察其对人胰腺癌细胞株PC3在体外生长抑制情况。方法通过同源重组方法构建含HOSM基因的缺陷型腺病毒载体AD-HOSM,报告基因AD-GFP检测腺病毒的对胰腺癌细胞系的转染效率;人胰腺癌细胞株PC3转染含HOSM基因的缺陷型腺病毒载体AD-HOSM后,用RT-PCR法检测外源HOSM基因在其中的表达;台盼兰染色、细胞计数法检测AD-HOSM对PC3的体外增殖抑制情况。结果成功构建了重组腺病毒载体AD-HOSM,AD-HOSM对胰腺癌细胞PC3有较高的转染效率,HOSM基因在转染细胞能有效的表达。体外试验示AD-HOSM明显抑制PC3的的生长。结论重组腺病毒介导HOSM表达能有效抑制PC3在体外的增殖,提示重组腺病毒介导的HOSM基因治疗可能成为胰腺癌治疗的候选方案。     

人工真皮联合VSD及自体刃厚皮片移植治疗烧伤后瘢痕增生的疗效及影响因素分析

目的：探讨人工真皮联合负压封闭引流(Vacuum sealing drainage,VSD)及自体刃厚皮片移植治疗烧伤后瘢痕增生的疗效,并分析影响其术后疗效的相关因素。方法：选取笔者医院2017年6月-2020年3月收治的烧伤后瘢痕增生患者106例作为研究对象。所有患者沿瘢痕与正常皮肤边界完整切除瘢痕组织,行人工真皮联合VSD及自体刃厚皮复合移植治疗。对患者疗效进行评价,并于治疗前后检测瘢痕厚度,采用温哥华瘢痕量表(Vancouver scar scale,VSS)对瘢痕情况进行评分。根据患者疗效情况将所有患者分为有效组和无效组,并记录其相关临床资料,采用单因素分析和多因素Logistic回归模型分析影响患者术后疗效的相关因素。结果：106例患者治疗后有效率为92.45%(98/106)。治疗后,患者瘢痕厚度、VSS评分均低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析显示,瘢痕部位、创面深度、瘢痕增生时间、瘢痕厚度、瘢痕柔软度、瘢痕体质均与患者术后疗效情况有关(P<0.05)。多因素Logistic分析表明,创面深度、瘢痕厚度、瘢痕柔软度、瘢痕体质均是术后疗效情况...     

诊断性与治疗性ERCP并发症的原因分析及治疗体会（附130例报告）

随着内镜技术日益成熟,以及在临床的广泛应用,许多以往需传统开腹治疗的患者可以通过内镜的治疗手段得以实现,但其均为微创或有创技术,与其相关的并发症达0~36%[1],甚至严重并发症还会危及生命。2005年8月至2007年7月我院共完成诊断和治疗性内镜逆行胰胆管造影(ERCP)130例次,发     

S期激酶相关蛋白2（SKP2）泛素化修饰OGG1对中波紫外线诱导的晶状体上皮细胞氧化损伤作用

目的　探索E3泛素连接酶S期激酶相关蛋白2（SKP2）介导的碱基切除修复蛋白8-氧代鸟嘌呤-DNA糖基化酶（OGG1）在年龄相关性白内障（ARC）发生过程中的泛素化降解机制。方法　采用免疫沉淀实验检测OGG1的泛素化修饰及其与SKP2的结合能力。采用中波紫外线（UVB）照射人晶状体上皮细胞株SRA01/04构建细胞氧化损伤模型。蛋白免疫印迹实验检测细胞氧化损伤模型和过表达模型细胞中SKP2的蛋白表达。通过转染SKP2质粒,增加SKP2的表达并观察细胞中OGG1蛋白的表达变化。结果　OGG1蛋白存在泛素化修饰。UbiBrowser软件预测能与OGG1结合的潜在E3泛素连接酶,并通过免疫沉淀实验证明SKP2与OGG1之间存在相互作用。在氧化损伤环境下,SRA01/04细胞中SKP2蛋白表达出现先下降后逐渐升高的趋势,其中UVB照射10 min时SKP2表达下降最为显著。对照组、转染空载质粒组和转染SKP2过表达质粒组SRA01/04细胞中SKP2蛋白的相对表达量分别为1.040±0.007、0.920±0.008和1.330±0.020,与转染空载质粒组相比,转染SKP2过表达质粒组细胞中SKP2蛋白的表达显著上调（P＜0.05）。空白对照组、UVB组、UVB+转染空载质粒组和UVB+转染SKP2过表达质粒组细胞中OGG1蛋白的相对表达量分别为1.05±0.01、5.05±0.16、5.20±0.07和3.83±0.10;与UVB+转染空载质粒组相比,UVB+转染SKP2过表达质粒组SRA01/04细胞中OGG1蛋白相对表达水平明显降低,且差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　E3泛素连接酶SKP2能够促进OGG1发生泛素化降解,导致晶状体上皮细胞内部损伤性DNA的累积,从而导致ARC的发生发展。     

ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响

目的　探究N⁶-甲基腺苷（m⁶A）去甲基化酶ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞（LEC）氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响。方法　运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测年龄相关性白内障（ARC）患者和对照组晶状体前囊膜上皮细胞中ALKBH5的mRNA和蛋白的表达。通过紫外线B（UVB）构建晶状体上皮细胞株SRA01/04细胞氧化损伤模型和靶向ALKBH5设计小干扰RNA（siRNA）转染构建敲降模型,运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测氧化损伤模型和敲降模型中ALKBH5的mRNA和蛋白表达。运用CCK-8法检测Control组、UVB组、UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中SRA01/04细胞活力变化。免疫荧光染色检测UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中15A3的荧光强度变化。运用qRT-PCR检测转染对照siNC组和转染siALKBH5#3组中11个DNA氧化损伤修复基因（ODRGs）的mRNA表达变化。结果　在ARC患者的晶状体前囊膜上皮细胞中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高。在UVB以时间梯度诱导SRA01/04的细胞氧化损伤模型中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均呈上升后下降趋势,其中UVB照射10 min后ALKBH5 mRNA和蛋白表达升高最为显著。ALKBH5敲降效率结果显示,与转染对照siNC组相比,转染靶向ALKBH5的siRNA后,ALKBH5的mRNA和蛋白表达均显著下降。CCK-8法检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞活力明显降低。免疫荧光染色检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞内DNA氧化损伤指标15A3染色显著增加。同时,与转染对照siNC组相比,转染ALKBH5#3组SRA01/04细胞的ODRGs中,TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6 mRNA的表达均显著上升,DCLRE1A mRNA的表达显著下降,MGMT和MRE11A mRNA的表达则未见明显差异。结论　m⁶A去甲基化酶ALKBH5在UVB诱导的LEC氧化损伤模型中诱导性表达上升,敲降ALKBH5可促进LEC内大部分ODRGs表达升高,参与调控LEC内损伤DNA的修复,阻止ARC的发生。     

POLH对过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的影响

目的　探究DNA聚合酶η（POLH）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的防御机制。方法　以年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织和H₂O₂处理的晶状体上皮细胞系SRA01/04为研究对象,分别通过RT-PCR和免疫印迹实验验证POLH的表达并筛选H₂O₂最佳作用浓度用于后续实验,将培养的SRA01/04细胞分为H₂O₂组、H₂O₂+HA组和H₂O₂+OV-POLH组,采用RT-PCR和免疫印迹实验检测POLH mRNA和蛋白表达情况,免疫荧光法检测DNA氧化损伤标志物以及TUNEL实验检测细胞凋亡变化,免疫印迹实验检测细胞中BAX、BCL-2、Nrf2和Keap1蛋白表达。结果　RT-PCR结果显示,与透明晶状体前囊膜（1.00±0.22）相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组织中POLH mRNA相对表达量明显下降（0.38±0.62）（P<0.000 1）。RT-PCR和免疫印迹实验均显示,200 μmol·L^-1 H₂O₂处理的SRA01/04细胞中POLH表达量最低;TUNEL实验检测结果显示, 200 μmol·L^-1 H₂O₂处理后细胞的凋亡明显增加。RT-PCR和免疫印迹实验结果显示,与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组SRA01/04细胞中POLH表达量显著升高（P<0.000 1）。免疫荧光染色结果显示,与H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞的γH2A染色明显下降。免疫印迹实验检测结果显示,与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞促凋亡蛋白BAX表达量明显下降,而抑凋亡蛋白BCL-2表达量明显升高（均为P<0.01）;与H₂O₂组和H₂O₂+HA组相比,H₂O₂+OV-POLH组细胞Keap1蛋白水平明显下降,而转录调控蛋白Nrf2表达明显升高（均为P<0.01）。结论　过表达POLH可通过增强DNA损伤修复功能抑制H₂O₂诱导的晶状体上皮细胞凋亡,其抑制氧化应激机制可能与Nrf2-Keap1-ARE通路有关。     

强化心肺复苏训练并保证技能质量的改革与实践

心肺复苏(CPR)是最重要、最基本的抢救生命的理论和技术,CPR和气管插管术是对各类患者抢救过程中最重要、最常用的急救手段[1].     

某市2012-2015年流感监测结果分析

目的 掌握该市2012-2015年流感病毒感染者流行病学特征,为该市流感的防控工作提供科学依据.方法 通过中国流感监测信息系统统计2012-2015年该市两家哨点医院流行病学监测数据和网络实验室对两家哨点医院采集咽拭子标本的实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测结果分析.结果 该市两家哨点医院2012-2015年门急诊病例就诊总数为789 229例,流感样病例数为29 005例(3.68％);该市疾病预防控制中心网络实验室2012-2015年共检测流感样病例标本5 793份,阳性率8.15％,其中季节性H3型占58.26％,Yamagata型占31.57％,新甲H1N1型占5.72％,B型占4.45％;不同年龄组阳性检出率,0～5岁组为6.26％,＞5 ～10岁组为11.16％,＞10 ～ 35岁组为8.87％,＞35～40岁组为4.23％,＞40岁组(10.66％);不同职业之间阳性检出率比较发现,学生组为10.04％,散居儿童组为6.03％;全年各月份均有检出,其中1月份和2月份检出数最高,7月份检出次之,5、6和11月份检出数较低;B型、Yamagata型和新甲H1N1型检出数主要集中在1-3月,季节性H3型在7、8、9和1月份检出数较高.结论 2012-2015年四种流感监测年度该市流感一般在冬季和夏季流行,病毒以B型、Yamagata型、季节性H3型和新甲H1N1型相互交替流行,在不同的月份流感优势毒株型别存在变化,在不同的年龄组和不同的职业中发病率有所区别,应进一步加强流感监测和数据分析工作.     

影响胆囊切除术后胃肠功能恢复的因素分析

胆囊切除术是肝胆外科最常见的手术,术后胃肠功能的恢复是病人术后康复的一项重要指标.对103例单纯胆囊切除术后影响胃肠恢复的因素进行分析,现报道如下.     

5-氟尿嘧啶磁性载药微球靶向治疗裸鼠人胰腺癌

肿瘤靶向治疗是指利用具有一定特异性的载体,将能杀伤肿瘤细胞的药物和基因等选择性地运送到肿瘤部位,把治疗作用或药物效应尽量限定在特定的靶细胞、组织或器官内,而不影响正常细胞、组织或器官的功能,从而提高疗效、减少毒副作用的一种方法[1].我们以5-氟尿嘧啶(5-Fu)作为模型药,乳化热固化法制备5-Fu磁性载药微球(5-Fu-MAMS),体外循环装置考察其磁定位规律并观察对裸鼠人胰腺癌PC-3移植瘤的疗效.