非血缘异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床研究

目的：分析总结非血缘关系异基因造血干细胞移植（URD-HSCT）治疗恶性血液病的疗效、造血重建、并发症以及长期生存情况。方法：采用非血缘关系HLA配型相合的外周血造血于细胞对24例恶性血液病患者进行了移植,预处理方案采用改良的BU／CY方案;移植物抗宿主病（GVHD）的预防采用CsA联合MMF、MTX并加用ATG;PGE1预防肝静脉闭塞症。结果：Ⅰ～Ⅳ度aGVHD发生率为37．50％,cGVHD的发生率为41．66％。24例患者均获造血重建;移植相关死亡率为12．5％;随访时间为2～38个月,16例生存,8例死亡。结论：URD-HSCT能提供更快的造血功能恢复,GVHD的发生率有所增加,而移植相关死亡率并无明显增加,是目前治愈恶性血液病的有效方法,相当部分患者可通过移植获治愈,但移植后疾病复发仍是影响患者长期生存的主要因素之一,防治移植后复发仍是需要解决的重要课题。     

靶向mdr-1基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定

本研究构建并鉴定靶向mdr-1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体。根据Genbank数据库提供的mRNA序列,选择设计3个能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,体外分别合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经BamHI和HindⅢ双酶切线性化的pGCsilencer人U6启动子质粒载体中;为了确定利用酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,采用脂质体转染的方法将构建好的3个重组载体(pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3)导入慢性髓系白血病耐药细胞株K562/A02,采用实时PCR方法检测转染细胞的mdr-1基因表达,Western-blot检测P-gp表达量的变化。结果表明:应用PCR电泳图谱和测序证实了克隆RNAi打靶序列完全正确,而且该载体又同时表达GFP标记基因,用于测定转染效率。分别转染pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3后K562/A02细胞的mdr-1基因表达和P-gp表达水平下降,证明shRNA可以特异性沉默mdr-1基因。结论:靶向mdr-1基因shRNA真核表达载体构建成功,为进一步研究mdr-1基因在K562/A02细胞中的作用奠定了实验基础。     

磁性纳米四氧化三铁及纳米金协同柔红霉素作用于K562/A02细胞的初步研究

目的：研究磁性纳米四氧化三铁（Nano-Fe3O4）及纳米金（Nano-Au）是否具有逆转K562/A02细胞耐药的作用。方法：用MTT法测定盐酸柔红霉素（DNR）对K562/A02和K562细胞的毒性,并观察DNR与Nano-Fe3O4或Nano-Au的联合作用。结果：体积分数为25%的Nano-Fe3O4及Nano-Au能有效增强DNR的细胞毒作用,提高细胞的凋亡率,差异具有显著性。结论：Nano-Fe3O4及Nano-Au结合DNR后均能有效逆转K562/A02细胞的耐药性。     

以尿苷二磷酸半乳糖为添加剂冷藏兔血小板的研究

本研究探讨以尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)为添加剂的血小板冷藏保存方法。采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PC),在悬液中添加UDP-Gal,放4℃冰箱储存10天。尔后观察血小板(Plt)数量?血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)?血小板聚集功能(PagT)?血小板促凝活性实验(PF3aT和APCT)和血小板凋亡(apoptosis)的变化。将冷藏兔血小板用Cr51标记后,检测输入兔体内后的血小板生存时间。结果表明加入UDP-Gal冷藏保存10天后的PC的Plt、MPV、PDW、血小板促凝血活性与新鲜PC相比均无显著性变化(P(0.05);而冷藏对照PC的Plt明显减少,MPV、PDW显著增大,血小板促凝血活性减低,与新鲜PC相比差异有显著性(P>0.01);加入UDP-Gal的PC冷藏保存10天后的血小板凋亡率与新鲜PC相比有所增高(P(0.05),但明显低于冷藏对照组(P(0.01),其血小板聚集率(诱聚剂为阳离子没食子酸丙酯,C-PG)减低,但仍能保持在新鲜血小板的50%以上。添加UDP-Gal时冷藏保存10天的血小板与新鲜的血小板在体内的生存时间相近(P(0.05),输注兔体内72小时时的血小板存活率在新鲜对照组、UDP-Gal冷藏保存组和冷藏对照组分别为57.5%±7.2%、50.3%±6.3%和0.1%±0.5%。结论尿苷二磷酸半乳糖对冷藏保存的兔血小板有保护作用,并能延长冷藏兔血小板在体内的生存时间。     

血小板衍生微粒对脐血粒巨噬祖细胞的促增殖作用

本研究探讨血小板衍生微粒(PMP)对脐血粒巨噬祖细胞集落形成单位(CFU-GM)的促增殖作用。采用不同浓度的凝血酶激活血小板释放出PMP,采用流式细胞术检测PMP的释放量,确定凝血酶的最佳实验浓度。应用Ficoll分离脐血单个核细胞(MNC),在含有不同浓度PMP的甲基纤微素半固体培养基中培养7天,观察CFU-GM集落形成情况。结果表明:2.0、1.5、1.0和0.5U/ml凝血酶激活血小板后的PMP释放率分别为:28.7%、47.7%、50.1%和43.9%;CFU-GM集落产率与PMP呈剂量依赖关系,PMP为10、50、100μg/ml时的CFU-GM集落产率(个/2×105MNC)分别为:119.8±32.2、142.8±45.2、180.8±85.1。50、100μg/mlPMP组的集落产率与空白对照组(103.0±24.8)相比,P值均<0.05;而10μg/mlPMP组的集落产率略高于空白对照组,但P值>0.05。结论:用1.0U/ml的凝血酶激活血小板释放的PMP较为均一,而且释放量最大。PMP可促进人脐血粒巨噬祖细胞的增殖。     

持续改进危急值临床处置及时性的探讨

“处置及时性”是危急值管理的一个重要切入点,其实现有赖于医务人员危急值处置的主观意识以及细化的处置流程。作者通过介绍该院强化危急值管理的工作思路,依据危急值管理重点将该项工作划分为医技科室危急值的及时处置、临床科室危急值的及时处置两个阶段。同时详述针对提高临床危急值处置工作重点,医院采取的质量管理方式,如根因分析、指标筛选、数据分析等。通过医院质量管理的持续改进,危急值上报的流程进一步完善,医务人员危急值管理知晓率显著提升,危急值接收登记率明显提高,医务人员处置危急值平均时间缩短,差异有统计学意义（P <0.05）。     

DC与CIK共培养对肝癌细胞杀伤活性的研究

本研究的目的是观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与同源树突状细胞（DC）共培养后DC-CIK细胞的增殖活性、表型的变化,及其对肝癌细胞细胞毒作用的影响.采集健康供者的外周血单个核细胞（MNC）,置于37℃,5%CO2培养箱培养2小时,收集非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞,贴壁细胞诱导分化出成熟DC,将成熟DC和CIK细胞按1：5的比例混合培养3天,用MTT法检测DC-CIK共培养细胞杀伤SMMC-7721肝癌细胞株的活性.结果显示：DC与CIK细胞共培养后,DC-CIK细胞群的增殖活性和杀伤活性较单纯的CIK细胞更高.结论：DC与CIK共培养细胞是一种增殖活性和细胞毒活性均高于CIK细胞的免疫活性细胞.     

以骨髓纤维化为突出表现的非霍奇金淋巴瘤一例

患者 ,男 ,2 7岁 ,未婚 ,因不明原因发热 3个月 ,于 1998年 12月 30日入院。外院检查 :Ｈｂ 46ｇ Ｌ ,ＷＢＣ 3.1× 10 9 Ｌ ,ＢＰＣ 5 1× 10 9 Ｌ ,骨髓穿刺“干抽”。骨髓活检示骨髓纤维化中期。入院查体 :体温 39.6℃ ,神志清 ,贫血貌 ,浅表淋巴结无肿大 ,巩膜无黄染 ,胸骨有压痛 ,心肺 (- ) ,肝肋缘下未及 ,脾肋缘下 2ｃｍ ;Ｈｂ 37ｇ Ｌ ,ＷＢＣ 1.1× 10 9 Ｌ ,ＢＰＣ 46× 10 9 Ｌ ,血沉70ｍｍ 1ｈ ;白蛋白 30ｇ Ｌ ,总蛋白 5 0ｇ Ｌ ,丙氨酸转氨酶和γ 谷氨酰转肽酶轻度增高 ,乳酸脱氢酶 8.2 μｍｏｌ·ｓ- 1 Ｌ(正常值 <3.7μｍ…     

非清髓异基因外周造血干细胞移植治疗难治性恶性血液病

目的:观察非清髓异基因外周造血干细胞移植(NAST)对难治性恶性血液病的疗效。方法:采用NAST治疗 3例慢性粒细胞白血病加速期(CML -AP)、1例骨髓增生异常综合征(MDS-RAEB T)患者。非清髓预处理方案:氟达拉宾 (Flud)30mg·m-2·d-1×6d,白消安(Bu)4mg·kg-1·d-1×2d,环磷酰胺(CTX)600mg·d-1×2d,3例CML- AP患者在此基 础上加用阿糖胞苷(Ara c)。结果:4例患者造血均顺利恢复,ANC>0.5×109/L平均为12天,BPC>20×109/L平均为11天。 +30天时经短串联重复序列(STR)- PCR检测3例患者为完全嵌合体(CC),1例慢粒患者为混合嵌合体(MC),+90天时全部 患者均处于CC。分别随访4月～16月,均无病存活。结论:非清髓异基因外周造血干细胞移植是治疗CML- AP、MDS -RAEB T 等难治性恶性血液病的有效手段。     

骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡和TNF-α关系的研究

目的：探讨骨髓增生异常综合征(MDS)骨髓细胞调亡特征以及与肿瘤坏死因子α(TNF—α)的关系。方法：分别采用形态学和dUTP末端缺口标记(TUNEL)方法检测骨髓细胞调亡；采用ELISA方法检测骨髓单个核细胞培养后上清液中TNF—α的浓度，并与缺铁性贫血(IDA)患者进行比较。结果：形态学方法检测骨髓单个核细胞培养后细胞调亡指数，MDS明显高于IDA(P＜o．01)，MDS各分型(RA／RAS、RAEB／RAEB—t)之间细胞调亡指数差异无显著性意义(P＞0．05)。同一个体TUNEL法测得的骨髓细胞调亡指数均高于形态学观测的结果。TUNEL检测MDS细胞调亡指数RA／RAS＞RAEB／RAEB—t，但差异无显著性意义(P＞0．05)。MDS骨髓单个核细胞上清中TNF-α浓度高于IDA组，差异有显著性意义(P＜0．05)；MDS各分型之间RA／RAS显著高于RAEB／RAEB—t(P＜0．05)。结论：MDS骨髓细胞确实凋亡过度，早期MDS重于晚期MDS，并与TNF—α呈线性关系；采用TUNEL法检测凋亡细胞较形态学方法敏感。