Par-3蛋白在转化生长因子?茁1介导的大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 观察转化生长因子（TGF)β1诱导的正常大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化（EMT）过程中细胞极性蛋白Par-3的表达及上调Par-3蛋白表达对TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程的影响。 方法 应用TGF-β1 (10 μg/L)刺激NRK52E细胞，采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光方法分别检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Par-3 mRNA和蛋白的表达；应用Lipofectmine 2000将pKH3-HA-Par-3质粒瞬时转染NEK52E细胞，采用Western印迹观察上调表达Par-3对上述指标的影响。 结果 TGF-β1刺激后，NRK52E细胞α-SMA蛋白和mRNA水平上调，E-cadherin蛋白和mRNA的表达下调；Par-3蛋白表达呈时间依赖模式下调，72 h TGF-β1刺激组与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。但Par-3 mRNA水平在各时间点差异均无统计学意义（P > 0.05）。脂质体转染外源性质粒pKH3-HA-Par-3上调表达Par-3可显著抑制TGF-β1诱导NRK52E细胞α-SMA蛋白的上调表达；逆转E-cadherin蛋白的下调表达。 结论 在TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程中细胞极性Par-3蛋白表达下调，基因转染上调表达Par-3可部分减轻EMT的程度，提示Par-3蛋白在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和肾脏纤维化中可发挥保护性作用。     

肾性血尿的中西医诊断与治疗

血尿是肾脏病的常见症状。血尿根据能否被肉眼发现分为肉眼血尿和镜下血尿,根据病因可分为肾小球源性血尿与非肾小球源性血尿。新鲜尿离心沉渣每高倍镜视野红细胞超过3个,或1h尿红细胞计数超过10万,或12h计数超过50万个,可诊断为镜下血尿。国外的研究表明,镜下血尿发病率0．18％～16．1％不等。最近澳大利亚的一项研究表明,11247例受试者,血尿发病率4．6％。另一项研究发现镜下血尿的发病率为6％,其中0．15％为非肾小球性血尿,如泌尿系结石、肿瘤等。     

两种糖尿病肾病大鼠模型的对比研究

目的对比两种糖尿病肾病动物模型肾脏纤维化进程及其机制探讨。方法 32只雄性SD大鼠随机分成4组:正常对照组(Con组);单肾切除组(Nx组);糖尿病组(DM组);单肾切除+糖尿病组(DMNx组)。共观察16周,于16周末检测各组大鼠血糖、血压、尿白蛋白、肾重/体质量、肾脏病理。用RT-PCR检测各组大鼠肾组织α-SMA、E-cadherin mRNA表达水平。结果与DM组相比较,DM Nx组大鼠肾重/体质量比值增加,系膜基质明显增多,尿白蛋白排泄率明显增加。DM Nx组大鼠肾小管间质出现局灶性纤维化。但两组之间的血压,血糖水平差异无显著性。与Con组及Nx组相比较,DM组与DM Nx组大鼠肾脏组织中α-SMA mRNA的表达水平均显著增高,且DM Nx组较DM组升高更明显;而E-cadherin mRNA的表达水平显著降低,且DM Nx组较DM组降低更明显。结论单肾切除后STZ诱导的糖尿病肾病模型与单纯STZ诱导的糖尿病肾病模型相比,小管间质更早出现纤维化,可能与肾小管上皮细胞转分化程度更强有关。     

终末期糖基化终产物通过转化生长因子依赖和非依赖途径介导NRK52E细胞转分化和胶原Ⅰ的合成

目的探讨终末期糖基化终产物（AGEs）介导肾小管上皮细胞转分化和胶原（Col）Ⅰ合成的分子机制。方法体外培养正常大鼠近端肾小管上皮细胞系（NRK52E），应用自制的AGE-牛血清白蛋白（BSA）刺激NRK52E细胞。免疫细胞化学方法检测不同时间磷酸化（P）Smad2／3核转位情况。ELISA方法检测细胞培养上清TGF-β1的水平。RT-PCR方法检测α-平滑肌肌动蛋白（SMA）、E-钙黏着糖蛋白（cadherin）和ColⅠmRNA表达。Western印迹检测α-SMA、E-cadherin和ColⅠ蛋白的表达。同时观察TGF-β1中和抗体对AGE-BSA上述效应的阻断作用。结果基础状态下，NRK52E细胞存在低水平p-Smad2／3核表达（16％）。与BSA对照组比较，AGE—BSA以时间依赖方式上调NRK52E细胞p-Smad2／3核转位，其高峰出现在30min（68％比30.5％，P〈0．01）和24h（76％比31．3％，P〈0．01）。AGE—BSA显著上调α-SMA和ColⅠmRNA和蛋白表达；下调E-cadherin mRNA和蛋白的表达；并能促进NRK52E细胞合成和分泌TGF-β1。TGF-β1中和抗体能明显抑制AGE—BSA介导的24hp-Smad2／3核转位（25．2％，P〈0．01），但不能阻抑30min活化高峰；能明显抑制AGE-BSA介导的α-SMA和ColⅠmRNA和蛋白表达．以及显著地上调E-cadherin mRNA和蛋白的表达。结论AGEs通过TGF-β依赖和非依赖途径诱导肾小管上皮细胞Smads信号通路活化，促进其向肌成纤维母细胞转分化和ColⅠ的合成。     

地龙对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用的研究

目的探讨地龙煎液对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏的保护作用及机制。方法链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病肾病大鼠模型,随机分为糖尿病肾病模型组、地龙低剂量组、地龙高剂量组、ACEI组（阳性对照治疗组）各12只,另以12只正常大鼠作为正常组。地龙低剂量组给予地龙煎液1g.kg-1.d-1、地龙高剂量组3.gkg-1.d-1、ACEI组给予培哚普利4mg.kg-1.d-1灌胃,糖尿病肾病模型组及正常组给予0.9%NaC l溶液灌胃。共观察12周,检测各组12周末24h尿微量白蛋白定量、肾重/体重、肾功能（Sc、rBUN）、肾脏病理变化情况,免疫组织化学检测肾组织Ⅳ型胶原蛋白的表达。结果糖尿病肾病模型组肾重/体重,24h尿微量白蛋白,肾小球、肾小管PAS评分,肾组织Ⅳ型胶原蛋白表达水平均显著高于正常组。地龙高剂量组、地龙低剂量组、ACEI组24h尿微量白蛋白、肾小球、肾小管PAS评分,肾组织Ⅳ型胶原蛋白表达水平较糖尿病肾病模型组显著降低（P〈0.05）,其中地龙高剂量组、ACEI组较地龙低剂量组更为显著。结论地龙能显著降低糖尿病肾病大鼠24h尿微量白蛋白水平,减轻肾小球硬化及肾小管损伤的程度,减少肾脏Ⅳ型胶原蛋白的表达,对肾脏有一定的保护作用。     

高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞损伤及机制的研究

目的:观察高糖诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤及机制。方法:细胞生长融合至约80%时,用DMEM低糖培养基无血清同步化48 h,然后分为以下7组。①正常糖对照组(5.5 mM低糖DMEM培养基,NG);②高糖1组(15 mM高糖DMEM培养基,HG1);③高糖2组(30 mM高糖DMEM培养基,HG2);④高糖3组(45 mM高糖DMEM培养基,HG3);⑤高糖4组(60 mM高糖DMEM培养基,HG4);⑥等渗1组(30 mM甘露醇DMEM培养基,HM1);⑦等渗2组(45 mM甘露醇DMEM培养基,HM2)。观察不同糖浓度(5.5~45 mM)刺激HK-2细胞24 h,观察IκBα和p65蛋白表达规律。MTT比色法检测细胞活力。Western blot法检测IκBα和p65蛋白表达。结果:高糖2组、高糖3组、高糖4组浓度呈依赖性对HK-2活力存在显著的抑制作用(P0.05,P0.01);高糖2组、高糖3组浓度的甘露醇对HK-2活力没有明显的抑制作用(P0.05)。IκBα蛋白表达随着葡萄糖浓度的升高而依次降低,而p65蛋白表达呈浓度依赖性升高,高糖2组、高糖3组的葡萄糖与正常糖对照组比较,差异有显著性或非常显著性意义(P0.05,P0.01)。结论:高糖诱导的HK-2毒性损伤呈一定的浓度依赖关系,其机制与NF-κB通路的激活有关,与渗透压作用无明显关联。     

2型糖尿病肾病中医证型与TWEAK等炎症因子相关性试验研究

【目的】探讨糖尿病肾病(DN)患者不同中医证型与炎症因子之间的关系,为中医辨证分型、临床治疗、判断病情及预后提供依据。【方法】选择DN患者120例作为观察组,根据临床表现进行传统的中医辨证分型,应用酶联免疫吸附法(ELISA)对患者血尿标本进行检测,分析DN患者的中医证型与血、尿肿瘤坏死样凋亡微弱诱导因子(TWEAK)及血中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)等炎症因子的相关性,并与30例健康体检者(健康组)作比较。【结果】(1)与健康组比较,DN无蛋白尿组、少量蛋白尿组、大量蛋白尿组、肾功能不全组等各期患者的血中TWEAK浓度均下降,尿TWEAK浓度及血中IL-1β浓度均上升(均P0.05);DN无蛋白尿组的血中IL-10浓度亦上升(P0.05)。(2)阴虚燥热证组血中TWEAK浓度明显高于其他组(P0.05),各主证血中TWEAK浓度依次为:阴虚燥热证气阴两虚证脾肾气虚证、阴阳两虚证;阴虚燥热证组尿中TWEAK浓度也明显高于其他组(P0.05),各主证尿中TWEAK浓度依次为:阴虚燥热证气阴两虚证脾肾气虚证阴阳两虚证;血中IL-1β水平,在所有证型中湿热证组表达最高(P0.05),阴虚燥热证组表达最低(P0.05);血中IL-10水平,在所有证型中阴虚燥热证组表达最高(P0.05),各主证血中IL-10水平依次为:阴虚燥热证气阴两虚证脾肾气虚证阴阳两虚证。【结论】DN中医辨证分型与TWEAK、IL-1β、IL-10等炎症因子有一定相关性,为临床治疗DN、判断病情及预后提供依据。     

黄芩素对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的探讨黄芩素对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法将24只大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组8只。治疗组给予黄芩素300mg·kg^-1·d^-1灌胃,共24周。比较各组大鼠肾重／体重比值、血糖、收缩压、24h尿白蛋白量及肾组织病理学表现,免疫组织化学法检测肾组织细胞间黏附分子1（ICAM-I）和E选择素蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组肾重／体重比值、血糖、24h尿白蛋白量升高（P〈0．05）;收缩压无统计学差异（P〉0．05）。与模型组相比,治疗组24h尿白蛋白量降低（P〈0．05）;。肾重／体重比值、血糖、收缩压均无统计学差异（P〉0．05）。模型组ICAM-1和E选择素表达较对照组升高,治疗组ICAM-1和E选择素表达较模型组降低（P〈0．05）。结论黄芩素可减轻糖尿病大鼠肾脏ICAM-1和E选择素的表达,对肾脏有一定的保护作用。     

IL-18在糖尿病中引起肾损伤的机制探讨

目的研究糖尿病大鼠模型尿液中肾损伤分子-1(KIM-1)、IL-18的表达,观察糖尿病大鼠尿液中KIM-1的变化,并探讨IL-18引起大鼠肾损伤的机制,以及在肾损伤中所起的作用。方法收集大鼠24周的24小时尿,用酶联免疫吸附法检测正常对照组(Control)、糖尿病模型组(Diabetic)24小时尿液中KIM-1和IL-18的表达水平。结果正常对照组、糖尿病模型组中KIM-1的表达水平分别为(10.9±2.1)ng,(119.1±23.9)ng;IL-18的表达水平分别为(4.8±0.9)ng,(57.0±8.4)ng。两个指标的正常对照组和糖尿病模型组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖尿病大鼠晚期有肾脏损伤,IL-18在其中起重要作用。