荧光双向凝胶电泳分析温热处理对K562细胞系蛋白质表达谱的影响

目的:观察温热处理对K562细胞蛋白质表达谱的影响.方法:将培养获得的K562细胞在41℃恒温处理1 h,以37℃作为对照,采用荧光双向凝胶电泳技术分离全细胞蛋白质,分子成像仪获取图像后软件分析差异表达的蛋白质点.结果:温热处理K562细胞与对照组细胞蛋白质表达谱分析比较差异表达蛋白质点数为65个,其中温热处理后表达上调的蛋白质点27个,下调的蛋白质点38个.结论:研究将为阐明热疗的分子基础提供可靠的实验依据,随着研究的深入必将推动基于热疗的肿瘤生物治疗的更大发展和广泛的临床应用.     

用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白

目的 用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38MAPK结合的蛋白。方法 以p38MAPK为靶蛋白，分别用不同的介(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果 选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆，经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断，回收PCR产物并进行测序，将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列，得到了46个编码蛋白的序列。结论 T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。     

信号肽-FRET荧光蛋白载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

目的 构建带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白(pECFP-C1-SP)和增强型黄色荧光蛋白(pEYFP-C1-SP)的质粒载体，为使用荧光共振能量转移(FRET)技术研究LPS在细胞膜上的受体识别机制提供依据。方法 采用点突变技术构建了带TLR4信号肽的载体，用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞，观察带信号肽载体和融合蛋白载体在细胞内的表达。结果 DNA测序证明所构建的带TLR4信号肽的载体正确；酶切和DNA测序表明融合蛋白载体的构建正确，TLR4信号肽可以使蛋白主要表达在膜上。结论 所构建的带信号肽的荧光蛋白载体是正确的，pECFP-C1-SP和pEYFP-C1-SP能够表达在细胞膜上，可有效地应用于膜蛋白相互作用的研究。     

人组织因子基因RNAi载体pENTRTM/U6-TF-shRNA的构建与鉴定

目的:RNAi效应与基因转移有密切关系.拟通过构建组织因子基因RNAi载体,为达到阻止凝血过程的启动打下基础.方法:实验于2006-11/2007-05在南方医科大学中医药学院中医症候实验室完成.利用Invitrogen公司在线软件设计人组织因子基因(NM_001993)干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒感受态扩增,质粒DNA小提、测序.结果:合成的寡核苷酸双链退火处理后,经4%琼脂糖凝胶电泳,紫外观察可见ds oligo和ss oligo清晰可见,双链寡核苷酸与pENTRTM/U6的连接反应,转化到质粒感受态扩增后,提取得到的质粒DNA经过测序结果证实pENTRTM/U6-TF-shRNA为阳性克隆.结论:成功构建出凝血途径的人组织因子基因pENTRTM/U6-TF-shRNA载体,为研究组织因子基因RNAi载体在出凝血疾病中的应用提供了稳定的转染细胞工具.     

经支气管镜中药灌洗治疗肺系疾病初探

介绍经支气管镜进行中药灌洗治疗肺系疾病,对于开创新的中药治疗途径、缩短患者病程、减少医疗费用等方面有着重要的意义。通过对临床病例的观察,说明了此种方法使用于临床的可行性。推测这种方法的使用,对于某些肺系的疑难顽证的治疗,以及借助支气管镜的镜下观察,对中医望诊的发展都有着较为宽广的前景。     

人组织因子基因RNAi载体pENTRTM/U6-TF-shRNA的构建与鉴定☆

目的： RNAi效应与基因转移有密切关系。拟通过构建组织因子基因RNAi载体，为达到阻止凝血过程的启动打下基础。 方法：实验于2006-11/2007-05在南方医科大学中医药学院中医症候实验室完成。利用Invitrogen公司在线软件设计人组织因子基因（NM_001993）干扰片段，合成shRNA序列，再行寡核苷酸双链的合成，退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端，连接产物转化到感受态细胞，增菌，质粒感受态扩增，质粒DNA小提、测序。 结果：合成的寡核苷酸双链退火处理后，经4%琼脂糖凝胶电泳，紫外观察可见ds oligo和ss oligo清晰可见，双链寡核苷酸与pENTRTM/U6的连接反应，转化到质粒感受态扩增后，提取得到的质粒DNA经过测序结果证实pENTRTM/U6- TF-shRNA为阳性克隆。 结论：成功构建出凝血途径的人组织因子基因pENTRTM/U6- TF-shRNA载体，为研究组织因子基因RNAi载体在出凝血疾病中的应用提供了稳定的转染细胞工具。     

围手术期术后认知功能障碍的影像遗传学研究

目的研究围手术期脑源性神经营养因子(BDNF)的单核苷酸多态性及其表达与术后认知功能障碍(POCD)的关系。方法结核病手术患者223例术前均行PET检测和认知功能测定。其中20例诊断为POCD者,在治疗后第3天、1个月、3个月分别行PET检测,并进行BDNF基因SNP的检测和基因型分析。结果 12-back任务中,BDNF Val纯合子组比BDNF Met携带者表现差。2BDNF Val纯合子组休息局部脑血流量(rCBF)有更低的基底海马rCBF。3基因型主要作用在几个中线区域,包括中央前回和几个扣带皮质集群以及杏仁核和左颞下叶和中央后回,海马rCBF在BDNF Met携带组呈强阳性,但不在Val纯合子表现。相反的,在中间枕骨和上颞脑回,海马rCBFVal纯合子表现出强阳性,BDNF Met携带组不表现。4海马rCBF明显影响平均海马工作记忆激活,BDNF Met携带组中更明显。5在BDNF Val纯合子组,海马失活强烈预测横向PFC激活和前和后扣带皮质失活。结论 POCD者大脑功能发生变化,在分子水平上也反映大脑存在生理或病理变化。     

定心方及丹参酮防治大鼠缺血再灌注性心律失常的NO机制研究

目的 :研究定心方和丹参酮防治大鼠缺血再灌注性心律失常的一氧化氮 (NO)机制。方法 :大鼠冠状动脉结扎造成心肌缺血 ,松开结扎线造成缺血再灌注模型 ,观测定心方及丹参酮对 NO及心律失常的影响。结果 :NO升高时 ,心律失常的发生减少 ,定心方和丹参酮均能增加心脏血中 NO含量 ,减少心律失常的发生。结论 :定心方和丹参酮能通过增加血中 NO含量而防治心律失常。     

中医中药应尽快纳入转化医学的轨道

介绍了转化医学的概念、内涵、发展过程,结合国内中医药医疗和科研现状,提出应该从规范转化体制、设立专项研究经费、合理运用先进技术手段、培养专业人才队伍、建设中医药转化医学研究平台等方面进行努力,尽快将中医中药研究纳入转化医学轨道以跟上国际发展步伐。     

X线照射对宫颈癌HeLa细胞醛缩酶A表达和定位的影响

目的:观察宫颈癌HeLa细胞转染醛缩酶A(aldolase A,ALDOA)后,在X线作用下ALDOA在细胞内定位的改变,以及其对细胞存活率的影响。方法:克隆出ALDOA全长编码序列,构建真核表达质粒pECFP-C1-ALDOA,实验组通过脂质体介导将pECFP-C1-ALDOA转染HeLa细胞,设载体pECFP-C1作为阴性对照,各组均给予X线照射,荧光显微镜观察照射前后HeLa细胞中pECFP-C1-ALDOA和pECFP-C1表达及定位的变化,用XTT法检测细胞存活率的改变。结果:双酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;荧光显微镜下观察HeLa细胞内pECFP-C1-ALDOA主要分布于胞浆,pECFP-C1为全细胞均匀分布;经X线照射24h后胞浆中的pECFP-C1-ALDOA逐渐转至胞核,而pECFP-C1在细胞内的定位则不发生明显改变;经XTT法检测,发现X线照射后,转染pECFP-C1-ALDOA质粒的细胞存活率明显高于转染pECFP-C1的对照组细胞。结论:抑制ALDOA的表达,可使X线更易诱导宫颈癌细胞的死亡,因此其可能作为宫颈癌放射治疗的新靶点。